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Articolo metodologico

Un modello murino di fibrosi polmonare indotta dalla nebulizzazione nasale di bleomicina

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DOI:

10.3791/64097

20 gennaio 2023

In questo articolo

Sommario

Vari modelli animali di fibrosi polmonare sono stati stabiliti utilizzando la bleomicina per chiarire la patogenesi della fibrosi polmonare e trovare nuovi bersagli farmacologici. Tuttavia, la maggior parte dei modelli di fibrosi polmonare mirati al tessuto polmonare hanno una somministrazione irregolare del farmaco. Qui, proponiamo un modello di fibrosi polmonare uniforme indotta dalla nebulizzazione nasale di bleomicina.

Abstract

La fibrosi polmonare è caratteristica di diverse malattie polmonari umane che derivano da varie cause. Dato che le opzioni di trattamento sono piuttosto limitate, i modelli murini continuano ad essere uno strumento importante per lo sviluppo di nuove strategie antifibrotiche. In questo studio, la somministrazione intrapolmonare di bleomicina (BLM) viene effettuata mediante nebulizzazione nasale per creare un modello murino di fibrosi polmonare che imita da vicino le caratteristiche cliniche della malattia. I topi C57BL/6 hanno ricevuto BLM (7 U/mL, 30 min/die) mediante nebulizzazione nasale per 3 giorni consecutivi e sono stati sacrificati il giorno 9, 16 o 23 per osservare i cambiamenti infiammatori e fibrotici nel tessuto polmonare. Il BLM aerosolizzato nasale ha preso di mira direttamente i polmoni, provocando infiammazione polmonare e fibrosi diffuse e uniformi. Pertanto, abbiamo generato con successo un modello murino sperimentale di fibrosi polmonare umana tipica. Questo metodo potrebbe essere facilmente utilizzato per studiare gli effetti della somministrazione di vari aerosol nasali sulla fisiopatologia polmonare e convalidare nuovi trattamenti antinfiammatori e antifibrotici.

Introduzione

La fibrosi polmonare è un processo patologico progressivo in cui l'eccessiva deposizione di componenti della matrice extracellulare, principalmente il collagene di tipo I, nell'interstizio dei polmoni porta a una compromissione della funzione polmonare1. La fisiopatologia della fibrosi polmonare è complessa e le opzioni di trattamento sono attualmente piuttosto limitate. I modelli murini rimangono uno strumento importante per studiare i meccanismi patogenetici che contribuiscono all'insorgenza e alla progressione della malattia, nonché nuove strategie per lo sviluppo di farmaci.

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Protocollo

Il Comitato per gli studi sugli animali dell'Ospedale dell'amicizia Cina-Giappone (Pechino, Cina) ha approvato tutte le procedure che coinvolgono i topi che sono state eseguite nell'ambito di questo studio (NO.190108). I topi sono stati tenuti nella stanza sterile degli animali dell'Istituto di ricerca medica clinica dell'amicizia Cina-Giappone, con una temperatura ambiente di 20-25 °C, umidità relativa del 40%-70%, intensità della luce animale di 15-20 LX e alternanza di luce e buio per 12 ore/12 ore. Gli animali avevano libero accesso al cibo e all'acqua.

1. Topi

  1. Assicurarsi che....

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Risultati

Il danno polmonare è stato indotto da BLM nebulizzato e gli animali di controllo sono stati nebulizzati con lo stesso volume di soluzione fisiologica normale. I topi sono stati nebulizzati una volta al giorno per 3 giorni, 30 minuti al giorno, utilizzando una concentrazione di BLM di 7 U/mL. I topi sono stati sacrificati nei giorni 9, 16 e 23 dopo la somministrazione di BLM per la colorazione H&E (Figura 2B). Lesioni polmonari diffuse con perdita della normale architettura alveolare, ispessimento del.......

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Discussione

L'iniezione intratracheale di bleomicina provoca una risposta infiammatoria acuta e fibrotica in entrambi i polmoni e può essere considerata un approccio efficace per stabilire un modello murino sperimentale di malattia polmonare interstiziale umana. La somministrazione intratracheale è la via di somministrazione più comunemente utilizzata 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (n. 92068108).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
  bleomicinaBioway/Nippon Kayaku Co Ltd  DP721Fibrosi modello farmaci
0,9% soluzione salina per iniezioneBaxter Healthcare (Tianjin) Co., Ltd.Preparazione della bleomicina
Siringa da 1 mlBD300481Anestetizzare gli animali
10% tampone formalina neutraTechaLab Biotech CompanyFissare il tessuto polmonare
15 ml di provetta da centrifugacorning430790Prepararsi per l'anestesia
20 ° C frigoriferoNew-fly groupBCD-213KConservare i farmaci
4 ° C frigoriferoNew-fly groupBCD-213KNegozio farmaci
Adobe illustrator cc2020AdobeProcess
immagini blu liquido posteriorePechino Chemical Workscolorazione dei tessuti
banco pulitoSuzhou Sujie Purifying Equipment Co., Ltd.Bleomicina preparazione
liquido di differenziazionePechino Chemical Workscolorazione dei tessuti
Bilancia elettronicaMETTLER TOLEDOAA-160Preparare per l'anestesia
colorazione eosinaPechino Yili Fine Chemicals Co, Ltd.colorazione dei tessuti
Termoforo HIDOMTopi incubazione
ematossilina colorazionePechino Yili Fine Chemicals Co, Ltd.
tampone salino tampone con fosfato tamponato con fosfato (PBS)HycloneSH30256.01Pulire il tessuto polmonare
Photoshop software di disegnoAdobeImmagini di processo
SCIREQ INEXPOSEEMKA Biotech Beijing Co., Ltd.Dispositivo di nebulizzazione
Microscopio a fluorescenza verticaleOlympusBX53Osservare la fetta

Riferimenti

  1. Raghu, G., et al. Diagnosis of idiopathic pulmonary fibrosis. An official ATS/ERS/JRS/ALAT clinical practice guideline. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 198 (5), e44-e68 (2018).
  2. Moore, B. B., Hogaboam, C. M.

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Ristampe e permessi

Tag

Nebulizzazione nasaleInfiammazione polmonareAlterazioni fibroticheTopi C57BL 6Bleomicina aerosolizzataPatofisiologia polmonareTrattamenti antifibrotici