Un metodo visivo sensibile per la rilevazione di batteri che producono idrogeno solforato

Summary

Qui, presentiamo un protocollo per rilevare i batteri che producono idrogeno solforato con un protocollo modificato utilizzato per la precipitazione del solfuro di bismuto (BS). I principali vantaggi di questo metodo sono che è facile da valutare e non richiede attrezzature specializzate.

Abstract

L'idrogeno solforato (H₂S) è un gas tossico prodotto dai batteri nella proteolisi degli amminoacidi e delle proteine contenenti zolfo che svolge un ruolo importante nella salute umana. Il test di produzione di H₂S è uno dei più importanti test di identificazione biochimica batterica. I metodi tradizionali non sono solo noiosi e dispendiosi in termini di tempo, ma anche inclini all'inibizione della crescita batterica a causa dell'effetto tossico dei sali di metalli pesanti nel mezzo contenente zolfo, che spesso porta a risultati negativi. Qui, abbiamo stabilito un metodo semplice e sensibile per rilevare H₂S nei batteri. Questo metodo è una versione modificata della precipitazione del solfuro di bismuto (BS) che utilizza piastre di microtitolazione trasparenti a 96 pozzetti. La coltura batterica è stata combinata con una soluzione di bismuto contenente L-cisteina e coltivata per 20 minuti, al termine della quale è stato osservato un precipitato nero. Il limite di rilevamento visivo per H 2 S era di_0,2mM. Sulla base del cambiamento di colore visivo, è possibile ottenere il rilevamento semplice, ad alto rendimento e rapido dei batteri che producono H₂S. In sintesi, questo metodo può essere utilizzato per identificare la produzione di H₂S nei batteri.

Introduction

I batteri che producono idrogeno solforato possono utilizzare aminoacidi e proteine contenenti zolfo per produrre idrogeno solforato (H₂S). La produzione di H₂S si verifica di solito nei batteri della famiglia Enterobacteriaceae gram-negativi e anche nei membri di Citrobacter spp., Proteus spp., Edwardsiella spp. e Shewanella spp.1. Questi batteri hanno la capacità di ridurre il solfato in idrogeno solforato (H₂S) per ottenere energia. L'idrogeno solforato è stato implicato nello sviluppo della resistenza batterica ai farmaci. H 2 S protegge i batteri dalla tossicità delle spe....

Protocol

1. Ceppi batterici

NOTA: Per questo esperimento, sono stati utilizzati nove ceppi standard, tra cui Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris e Klebsiella pneumoniae (Tabella 1). Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa e Proteus vuigaris possono produrre H₂S, come delineato nel....

Results

Rilevamento di batteri produttori di idrogeno solforato
Le prestazioni del test H₂S sono state studiate utilizzando colture pure di ceppi batterici selezionati, come elencato nella Tabella 1. I risultati hanno indicato che Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa e Proteus vuigaris possono produrre H₂S con precipitato BS nero, mentre Salmonella paratyphi A, Staphylococcu.......

Discussion

Il test di produzione di idrogeno solforato è uno dei test fenotipici convenzionali per l'identificazione e la differenziazione dei ceppi batterici. Molte specie batteriche possono produrre idrogeno solforato nel loro ambiente naturale, come l'acqua acquatica. Queste specie batteriche includono Salmonella sp., Citrobacter sp., Proteus sp., Pseudomonas sp., alcuni ceppi di Klebsiella sp., Escherichia coli e alcune specie di Clostridia anaerobici^{15,16<.......}

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cloruro di bismuto (III)	Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd	7787-60-2
EDTA	Nanjing Chemical Reagent Co., Ltd	60-00-4
Enterococcus faecalis	ATCC	19433
Fusobacterium  nucleato	ATCC	25586<
em>Klebsiella pneumoniae	ATCC	43816
L-cisteina	Amresco	52-90-4
Proteus  vuigaris	CMCC	49027
Salmonella paratyphi A	CMCC	50001
Salmonella paratyphi B	CMCC	50094
Staphylococcus  aureus	ATCC	25923
Trietanolammina-HCl	Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.	Codice 637-39-8