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Articolo metodologico

Misurazione della termogenesi del muscolo scheletrico in topi e ratti

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DOI:

10.3791/64264

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27 luglio 2022

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In questo articolo

Sommario

Topi e ratti vengono impiantati chirurgicamente con transponder di temperatura remoti e quindi abituati all'ambiente e alla procedura di test. Le variazioni della temperatura muscolare vengono misurate in risposta a stimoli farmacologici o contestuali nella gabbia domestica o durante l'attività fisica prescritta (ad esempio, tapis roulant che cammina a velocità costante).

Abstract

La termogenesi del muscolo scheletrico fornisce una potenziale strada per comprendere meglio l'omeostasi metabolica e i meccanismi alla base del dispendio energetico. Sorprendentemente poche prove sono disponibili per collegare i meccanismi neurali, miocellulari e molecolari della termogenesi direttamente ai cambiamenti misurabili della temperatura muscolare. Questo articolo descrive un metodo in cui i transponder di temperatura vengono utilizzati per recuperare misurazioni dirette della temperatura del muscolo scheletrico del topo e del ratto.

I transponder remoti vengono impiantati chirurgicamente all'interno del muscolo di topi e ratti e agli animali viene dato il tempo di riprendersi. Topi e ratti devono quindi essere ripetutamente abituati all'ambiente e alla procedura di test. I cambiamenti nella temperatura muscolare sono misurati in risposta a stimoli farmacologici o contestuali nella gabbia domestica. La temperatura muscolare può anche essere misurata durante l'attività fisica prescritta (cioè il tapis roulant che cammina a velocità costante) per tenere conto dei cambiamenti nell'attività come contributori ai cambiamenti nella temperatura muscolare indotti da questi stimoli.

Questo metodo è stato utilizzato con successo per chiarire i meccanismi alla base del controllo termogenico muscolare a livello del cervello, del sistema nervoso simpatico e del muscolo scheletrico. Vengono fornite dimostrazioni di questo successo utilizzando l'odore del predatore (PO; odore di furetto) come stimolo contestuale e iniezioni di ossitocina (Oxt) come stimolo farmacologico, dove l'odore del predatore induce la termogenesi muscolare e Oxt sopprime la temperatura muscolare. Pertanto, questi set di dati mostrano l'efficacia di questo metodo nel rilevare rapidi cambiamenti nella temperatura muscolare.

Introduzione

Nell'ambito della ricerca metabolica, l'esame della termogenesi del muscolo scheletrico è una nuova strada promettente per sondare l'omeostasi del peso corporeo. La letteratura pubblicata supporta l'idea che le risposte termogeniche di uno dei più grandi sistemi di organi del corpo, il muscolo scheletrico, forniscano una strada per aumentare il dispendio energetico e altri effetti metabolici, riequilibrando così efficacemente i sistemi all'interno di malattie come l'obesità 1,2,3. Se il muscolo può essere considerato un organo termogenico, gli studi devono utilizzare una meto....

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Protocollo

Questi metodi possono essere applicati sia a modelli di ratto che di topo e sono stati eseguiti con l'approvazione istituzionale (Kent State University, IACUC Approval #359 e #340 CN 12-04). Prima dell'attuazione del protocollo, gli animali devono essere alloggiati in conformità con la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.

1. Preparazione del lettore di transponder

NOTA: Prima dell'uso, il lettore del transponder deve essere impostato; I seguenti passaggi includono solo le modifiche alle impostazioni necessarie per questo studio. Questa parte del protocollo è direttamente....

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Risultati

I transponder sono stati impiantati unilateralmente nel gastrocnemio destro di dieci topi wild-type (WT) di 4-6 mesi allevati dal ceppo SF1-Cre (Tg(Nr5a1-cre)7Lowl/J, ceppo #012462, C57BL/6J e background FVB; femmina N = 5; maschio N = 5). Dopo il recupero, i topi sono stati abituati a una procedura di test della temperatura della gabbia domestica che non includeva uno stimolo contestuale (ad esempio, PO). Le misurazioni della temperatura utilizzando una bacchetta transponder sono state registrate all'interno della loro .......

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Discussione

Questo protocollo di test della temperatura fornisce al campo una strada per misurare direttamente la termogenesi del muscolo scheletrico. Questo è fondamentale in quanto la ricerca approfondisce l'identificazione dei meccanismi alla base della termogenesi muscolare33. Il metodo fornisce due protocolli economici per misurare la termogenesi del muscolo scheletrico in condizioni contestuali e farmacologiche. Questo protocollo sottolinea l'importanza sia dell'assuefazione che dell'acclimatazione all'.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Ringraziamenti

Questo lavoro è supportato da R15 DK097644 e R15 DK108668. Ringraziamo il Dr. Chaitanya K Gavini e il Dr. Megan Rich per i contributi precedenti e il Dr. Stanley Dannemiller per aver garantito la nostra conformità alle linee guida istituzionali sull'uso degli animali. Un ringraziamento speciale al Dr. Tim Bartness per aver fornito la ricerca fondamentale necessaria per costruire questo metodo e i suoi studi associati. Le figure 1A, C, D e 2A sono state create utilizzando Biorender.com.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
1012M-2 Tapis roulant metabolico chiuso modulare per topi, 2 corsie con ShockColumbus Instruments
1012R-2 Tapis roulant metabolico chiuso modulare per ratti, 2 corsie con ShockColumbus Instruments
1-1/4 in. Taglierina a cricchetto in PVCSiringhe BrassCraft
1 mL FisherScientificBD 309659
Betadine TamponiFisher Scientific19-898-945
Bobina boosterBioMedic Data SystemsAccessorio transponder
Clipper elettricheAndis40 Ultraedge Clipper
Blade Fogli a specchio flessibiliAmazonPiastrelle a specchio autoadesive non in vetro
PinzeFisher Scientific89259-940
del cuscinetto
(isoflurano)Kent ScientificVetFlo-0730Camere a basso costo da 3,0 L per vaporizzatori tradizionali
KetoprophenMed-Vet Intl.RXKETO-50
Strisce magneticheAmazon
MagnetiDIYMAG Ganci magnetici 40lbs
aghiMed-Vet Intl.26400
Neomicina/Polimixina/Bacitracina con unguento oftalmico all'idrocortisone, 3,5 gMed-Vet Intl.RXNPB-HC
Sutura assorbibile OasisMed-Vet Intl.MV-H821-V
Asciugamani per odori Predator (furetto)Marshall BioResources
Tubo
Clip per ferite riflesse CellPointScientific
ferite riflesse, 7 mm (topo)CellPoint Scientific
Clip per ferite riflesse, 9 mm (ratto)CellPoint Scientific
Srerile Autoclip, 7 mm (topo)CellPoint Scientific(topo)
Filtri in acciaio inossidabile Interval Seasonings Infusore per tèAmazon
Autoclip sterile, 9 mm (ratto)CellPoint Scientific(ratto)
Soluzione salina sterileMed-Vet Intl.RX0.9NACL-10
Forbici chirurgicheFisher Scientific08-951-5
Lenzuola
Asciugamani (controllo/assuefazione)AmazonAsciugamani in cotone 100%, bianco
TransponderBioMedic Data SystemsModello: IPTT-300
Transponders ReaderBioMedic DataSystems Modello: DAS-8027-IUS/ DAS-7007R
VersacleanFisher Scientific18-200-700detersivo liquido
Webcol Alcohol PrepsCovidien22-246-073 
Pezzi a cuneo per tubo
Camera di induzione riscaldante Amazon in PVCClip per Applicatore di clip per ferite Applicatore di clip per ferite chirurgiche in PVC

Riferimenti

  1. Periasamy, M., Herrera, J. L., Reis, F. C. G. Skeletal muscle thermogenesis and its role in whole body energy metabolism. Diabetes Metabolism Journal. 41 (5), 327-336 (2017).
  2. Rowland, L. A., Bal, N. C., Periasamy, M.

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Ristampe e permessi

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