Qui, descriviamo il metodo per generare un modello di decidualizzazione artificiale usando il topo ovariectomizzato, un classico esperimento di decidualizzazione endometriale nel campo di ricerca della decidualizzazione endometriale.
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Articolo metodologico
Generazione di un modello di decidualizzazione artificiale del topo con ovariectomia per la ricerca sulla decidualizzazione endometriale
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La decidualizzazione endometriale è un processo di differenziazione unico dell'endometrio, strettamente correlato alle mestruazioni e alla gravidanza. La compromissione della decidualizzazione porta a vari disturbi dell'endometrio, come l'infertilità, l'aborto spontaneo ricorrente e la nascita pretermine. Lo sviluppo e l'uso del modello di decidualizzazione endometriale negli studi riproduttivi sono stati un punto culminante per i ricercatori riproduttivi per molto tempo. Il topo è stato ampiamente utilizzato nello studio della riproduzione e della decidualizzazione. Esistono tre modelli murini ben consolidati per quanto riguarda la decidualizzazione, vale a dire la decidualizzazione naturale della gravidanza (NPD), la decidualizzazione artificiale (AD) e la decidualizzazione in vitro (IVD). Tra questi, AD è considerato un modello affidabile per la decidualizzazione del mouse, che è facile da implementare e vicino a NPD. Questo articolo si concentra su un metodo modificato del processo di generazione e applicazione del modello di decidualizzazione artificiale del topo con ovariectomia per evitare effetti ovarici, che possono ottenere risultati altamente riproducibili con piccole variazioni all'interno del gruppo. Questo metodo fornisce un modello animale buono e affidabile per lo studio della decidualizzazione endometriale.
Introduzione
Con lo sviluppo della tecnologia di riproduzione assistita dall'uomo, l'attuale tasso di gravidanza clinica di fecondazione in vitro-trasferimento di embrioni (IVF-ET) ha raggiunto o addirittura superato quello della gravidanza naturale. Nonostante ciò, molte pazienti nella pratica clinica della riproduzione assistita si sottopongono ancora a trasferimenti multipli di embrioni ma non riescono a ottenere la gravidanza come desiderato. Tuttavia, il suo specifico meccanismo molecolare non è ancora chiaro, quindi l'intervento clinico è inefficace, che è una delle sfide significative che la medicina riproduttiva deve affrontare 1,2
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sugli animali descritti sono stati approvati dal Comitato per l'uso e la cura degli animali della Scuola medica dell'Università di Nanchino (n. 20171202). Tutte le operazioni seguono le linee guida nazionali e dell'agenzia per la cura e l'uso degli animali.
NOTA: I topi sono stati allevati in un ambiente specifico privo di agenti patogeni (SPF), con una temperatura di 22 °C ± 1 °C, umidità relativa del 50% ± 1%, un ciclo luce/buio di 12 h/12 h e libero accesso al cibo e all'acqua.
1. Ovariectomia del topo
- Sterilizzare gli strumenti chirurgici con uno sterilizzatore....
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Risultati
Gli indici del modello di decidualizzazione del topo includono la morfologia generale dell'utero, il rapporto di massa dell'utero decidualizzato e non decidualizzato, la morfologia istologica dell'endometrio e il livello di espressione delle molecole marcatrici di decidualizzazione. La morfologia generale dell'utero artificiale decidualizzato dei topi indotto dall'olio è più vicina a quella dell'utero in gravidanza. Il corpo uterino diventa spesso e la cavità uterina diventa più piccola del lato non indotto. Il volume e .......
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Discussione
La decidualizzazione nei topi è un processo spontaneo che dipende dalla presenza di embrioni, che è diverso dagli esseri umani. Tuttavia, è stato scoperto che la stimolazione artificiale come l'iniezione uterina di perle di vetro e la lacerazione uterina può indurre la decidualizzazione dell'endometrio anziché degli embrioni. Inoltre, i ricercatori hanno scoperto che molti fattori potrebbero indurre deciduali o partecipare alla decidualizzazione, come l'iniezione di ormoni steroidei, prostaglandine e fattori inibitori de.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano riconoscere il sostegno della National Nature Science Foundation of China (82001629, XQS), del Youth Program of Natural Science Foundation della provincia di Jiangsu (BK20200116, XQS) e del Jiangsu Province Postdoctoral Research Funding (2021K277B, XQS).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Estrogeno | Sigma | E2758 | Integratore ormonale |
| Progesterone | Sigma | P0130 | Integratore ormonale |
| Olio di sesamo | Sigma | S3547 | Integratore ormonale |
| Pentobarbital di sodio | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Anestesia | |
| Iniezione di meloxicam | Qilu Animal Health Products Co., Ltd | dell'analgesia | |
| (metodo di accoppiamento di kaplow/azo) | Solarbio | G1480 | Colorazione alcalina della fosfatasi |
| Eosin | Servicebio | G1005-2 | HE colorazione |
| dell'ematossilina | Servicebio | G1005-1 | HE colorazione |
| ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix | Vazyme | Q711-02 | qPCR |
| 70% etanolo | Lircon | ZH1120090 | Disinfettare |
| Iodophor | Runzekang | RZK-DF | Disinfettare |
| Eritromicina Unguento per gli occhi | Guangzhou Baiyunshan | Bulbo oculare dei topi proteggere | |
| 4-0 sutura | Ethicon | W329 | Sutura per incisione |
| 10% formalina | Yulu | L25010118 | Tissue fix |
| Composto per temperatura di taglio ottimale | Sakura | 4583 | Reagente Trizol per ssezione |
| Ambion | 15596018 | qPCR |
Riferimenti
- Carson, S. A., Kallen, A. N. Diagnosis and management of infertility: A review. JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).
- Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. Genetics of human female infertility dagger. Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).
- Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M.
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Ristampe e permessi
