Qui, il pesce zebra (Danio rerio) viene utilizzato come modello per studiare le reazioni allergiche e le risposte immunitarie correlate alla sindrome alfa-Gal (AGS) valutando le reazioni allergiche alla saliva delle zecche e al consumo di carne di mammifero.
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Articolo metodologico
Modello animale di zebrafish per lo studio delle reazioni allergiche in risposta alle biomolecole della saliva delle zecche
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le zecche sono vettori di artropodi che causano malattie per trasmissione di agenti patogeni e le cui punture potrebbero essere correlate a reazioni allergiche che hanno un impatto sulla salute umana in tutto il mondo. In alcuni individui, alti livelli di anticorpi immunoglobuline E contro il glicano Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) sono stati indotti da punture di zecca. Le reazioni anafilattiche mediate da glicoproteine e glicolipidi contenenti il glicano α-Gal, presente nella saliva delle zecche, sono correlate alla sindrome alfa-Gal (AGS) o all'allergia alla carne di mammifero. Il pesce zebra (Danio rerio) è diventato un modello di vertebrati ampiamente utilizzato per lo studio di diverse patologie. In questo studio, il pesce zebra è stato utilizzato come modello per lo studio delle reazioni allergiche in risposta al consumo di carne di α-Gal e di mammifero perché, come gli esseri umani, non sintetizzano questo glicano. A tale scopo, sono stati valutati i modelli comportamentali e le reazioni allergiche di tipo anafilattico emorragico in risposta alla saliva della zecca Ixodes ricinus e al consumo di carne di mammifero. Questo approccio sperimentale consente di ottenere dati validi che supportano il modello animale zebrafish per lo studio delle allergie trasmesse dalle zecche incluso AGS.
Introduzione
Le zecche sono vettori di agenti patogeni che causano malattie e sono anche la causa di reazioni allergiche, che influenzano la salute degli esseri umani e degli animali in tutto il mondo 1,2. Durante l'alimentazione delle zecche, le biomolecole nella saliva delle zecche, in particolare proteine e lipidi, facilitano l'alimentazione di questi ectoparassiti, evitando le difese dell'ospite3. Alcune biomolecole di saliva con glicani Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) modificano la produzione di alti livelli di anticorpi anti-α-Gal IgE dopo la puntura di zecca, solo in alcuni individui, che è....
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Protocollo
Tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dal Comitato etico per la sperimentazione animale dell'Università di Castilla La Mancha nell'ambito dello studio "Valutazione della risposta immunitaria al vaccino M. bovis inattivato e sfida con M. marinum nel numero di modello del pesce zebra PR-2017-05-12".
Le zecche sono state ottenute dalla colonia di laboratorio, dove campioni rappresentativi di zecche nella colonia sono stati testati mediante PCR per i patogeni comuni delle zecche per confermare l'assenza di agenti patogeni e mantenuti presso l'Istituto di Parassitologia, Centro di biologia dell'Accademia ceca delle ....
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Risultati
Il protocollo qui presentato si basa su diversi aspetti degli esperimenti precedentemente pubblicati 27,30 e sui risultati eseguiti nel nostro laboratorio dove viene stabilito e validato il modello del pesce zebra per lo studio dell'AGS e della risposta immunitaria al α-Gal perché sia l'uomo che il pesce zebra non sintetizzano questa molecola13. Questo modello consente la caratterizzazione e la valutazione di una varietà di reazioni allerg.......
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Discussione
Il pesce zebra è un modello economico e facile da maneggiare che è stato anche uno strumento molto fattibile per lo studio dei meccanismi molecolari della risposta immunitaria, delle malattie patogene, dei nuovi test farmacologici, della vaccinazione e della protezione contro le infezioni33,34,35. Lo studio sul comportamento del pesce zebra è utile poiché studi precedenti hanno scoperto che alcune specie di pesci rimangono immob.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare i membri del gruppo SaBio per la loro collaborazione nella progettazione sperimentale e l'assistenza tecnica con l'impianto sperimentale del pesce e Juan Galcerán Sáez (IN-CSIC-UMH, Spagna) per aver fornito il pesce zebra. Questo lavoro è stato sostenuto da Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, Spagna e EU-FEDER (Grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00). Marinela Contreras è finanziata dal Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades, Spagna, sovvenzione IJC2020-042710-I.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Provetta da 1,5 mL | VWR | 525-0990 | |
| All Prep DNA/RNA | Qiagen | 80284 | |
| acquatiche | |||
| Kit per il dosaggio delle proteine BCA | Thermo Fisher Scientific | 23225 | |
| Set di disezione | VWR | 631-1279 | |
| Cibo per cani - Rosso Classico | Acana | ||
| Piastre ELISA-96 pozzetti | Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
| Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
| iScript Trascrizione inversa Supermix | Supermix | 1708840 | |
| siringhe da microlitri | Hamilton | 7638-01 | |
| Lettore di piastre | qualsiasi | ||
| soluzione salina tamponata con fosfato | Sigma | P4417-50TAB | |
| pilocarpina cloridrato | Sigma | P6503 | |
| Puntale per pipetta P10 | VWR | 613-0364 | |
| Puntale per pipetta P1000 | VWR | 613-0359 | |
| Cibo premium pesce tropicale | DAPC | ||
| Spugna Animal Holder | Realizzato con schiuma di scarto | ||
| Stereomicroscopio | qualsiasi | ||
| Termociclatore PCR in tempo reale | qualsiasi | ||
| Tricaina metansolfonato (MS-222) | Sigma | E10521 |
Riferimenti
- de la Fuente, J., Estrada-Pena, A., Venzal, J. M., Kocan, K. M., Sonenshine, D. E. Overview: Ticks as vectors of pathogens that cause disease in humans and animals. Frontiers in Bioscience: A Journal and Virtual Library. 13 (18), 6938-6946 (2008).
- de la Fuente, J., et al.
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Ristampe e permessi
