Questo protocollo descrive un robusto metodo di innesto di piantine che non richiede alcuna esperienza o formazione precedente e può essere eseguito a un costo molto basso utilizzando materiali facilmente accessibili nella maggior parte dei laboratori di biologia molecolare.
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Articolo metodologico
Innesto di piantine scalabile, flessibile ed economico
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'innesto di piantine in fase iniziale è diventato uno strumento popolare nella genetica molecolare per studiare le relazioni radice-germoglio all'interno delle piante. L'innesto di piantine in fase iniziale della piccola pianta modello, Arabidopsis thaliana, è tecnicamente impegnativo e richiede tempo a causa delle dimensioni e della fragilità delle sue piantine. Una crescente raccolta di metodi pubblicati descrive questa tecnica con diversi tassi di successo, difficoltà e costi associati. Questo documento descrive una semplice procedura per realizzare un dispositivo di innesto riutilizzabile internamente utilizzando una miscela di elastomero siliconico e come utilizzare questo dispositivo per l'innesto di piantine. Al momento di questa pubblicazione, ogni dispositivo di innesto riutilizzabile costa solo $ 0,47 in materiali di consumo da produrre. Utilizzando questo metodo, i principianti possono avere le loro prime piantine innestate con successo in meno di 3 settimane dall'inizio alla fine. Questa procedura altamente accessibile consentirà ai laboratori di genetica molecolare vegetale di stabilire l'innesto di piantine come parte normale del loro processo sperimentale. A causa del pieno controllo che gli utenti hanno nella creazione e nella progettazione di questi dispositivi di innesto, questa tecnica potrebbe essere facilmente adattata per l'uso in piante più grandi, come il pomodoro o il tabacco, se lo si desidera.
Introduzione
L'innesto è un'antica tecnica orticola che divenne una pratica agricola consolidata dal 500 aC1. L'innesto di diverse varietà di piante coltivate per migliorare le rese è stato il primo uso di questa tecnica e continua ad essere utilizzato per questo scopo oggi. Nell'ultimo decennio, l'innesto ha attirato una crescente attenzione come strumento per i biologi molecolari per studiare la segnalazione a lunga distanza nelle piante 2,3,4,5. Mentre l'innesto di piante adulte è relativamente facile, l'innesto di piante subit....
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Protocollo
1. Preparazione del dispositivo
- Realizzare il dispositivo di innesto di silicone colando una soluzione di elastomero siliconico in una capsula di Petri quadrata (100 mm x 100 mm). Preparare 15 ml della soluzione di elastomero, seguendo le linee guida del produttore.
NOTA: I kit di elastomero siliconico includono in genere un liquido a base di silicone e un agente polimerizzante che, se miscelati insieme, consentono al silicone di solidificarsi. - Preparare la capsula di Petri quadrata posando quattro pezzi dritti di filo da 29 G nella capsula di Petri quadrata, equidistanti l'uno dall'altro (Figura 1A). Assicurars....
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Risultati
Sono stati testati vari aspetti del design della striscia di innesto per identificare le condizioni ottimali di innesto che richiedevano la minima quantità di abilità tecnica (Tabella 1). Tutte le prove di innesto sono state completate su terreno MS di saccarosio allo 0,5%, che è stato precedentemente segnalato come un mezzo di innesto ideale11,12.
La crescita ottimale della piantina non può essere raggiunta co.......
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Discussione
Riassunto e significato
La formazione di un'unione di innesto è fondamentale per un innesto di successo, che richiede un contatto diretto e indisturbato tra il portinnesto e il rampollo. Le dimensioni in miniatura e la fragilità delle piantine di piccole piante come Arabidopsis rendono tecnicamente difficile soddisfare questo requisito. Una tecnica sviluppata nei primi metodi di innesto della piantina di Arabidopsis era quella di inserire sia il rampollo che il portainnesto in un col.......
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Dichiarazioni
Gli autori non dichiarano conflitti di interesse.
Ringraziamenti
Grazie a Javier Brumos per la formazione iniziale e la guida nell'innesto di piantine di Arabidopsis .
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Provette coniche da 15 mL | VWR International Inc | 10026-076 | |
| ACETONE (HPLC & 4 L | VWR | BJAH010-4 | |
| BactoAgar | Sigma | A1296-500g | |
| Dow SYLGARD 184 Incapsulante siliconico trasparente 0,5 kg Kit | Dow | 2646340 | |
| D-Saccarosio (Biologia molecolare), 1 kg | Fisher Scientific | BP220-1 | |
| Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Flex-Tube Tubes (1,5 mL), confezione da 500 Fisher | Scientific | 20901-551 / 05-402 | |
| Fisherbrand Manico per bisturi stile ad alta precisione #4 | Fisher Scientific | 12-000-164 | |
| Fisherbrand Nastro per autoclave senza piombo | Fisher Scientific | 15-901-111 | |
| Fisherbrand Piastre di Petri quadrate | Fisher Scientific | FB0875711A | |
| Microscopio stereo Leica Zoom 2000 | Microscopio centrale | L-Z2000 | |
| Nastro Micropore | 3M | B0082A9FEM | |
| Murashige e Skoog Basal Medium | Sigma | M5519-10L | |
| Parafilm | Genesee Scientific | 16-101 | |
| idrossido di potassio | VWR International Inc | AA13451-36 | |
| Redi-earth Plug and Plantling Mix Sun | Gro Horticulture | SUN239274728CFLP | |
| Scotts Osmocote Plus | Hummert International | 7630600 | |
| Surgical Design No. 22 Lama per bisturi in carbonio | Fisher Scientific | 22-079-697 | |
| Tween 20, 500 mL | Fisher Scientific | BP337500 | |
| PINZATRICE DUMONT STYL55 DUMOXEL POLS 110 MM | VWR | 102091-580 |
Riferimenti
- Mudge, K., Janick, J., Scofield, S., Goldschmidt, E. E. A history of grafting. Horticultural Reviews. 35, 437-493 (2009).
- Holbrook, N. M., Shashidhar, V. R., James, R. A., Munns, R. Stomatal control in tomato with ABA-deficient roots: Response of grafted plants to soil dry....
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Ristampe e permessi
