Il presente protocollo descrive un modello murino di ablazione dell'innervazione adrenergica mediante l'identificazione e la resezione del ganglio cervicale superiore.
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Articolo metodologico
Tecnica chirurgica per ganglionectomia cervicale superiore in modello murino
In questo articolo
Sommario
Abstract
Prove crescenti suggeriscono che il sistema nervoso simpatico svolge un ruolo importante nella progressione del cancro. L'innervazione adrenergica regola la secrezione delle ghiandole salivari, il ritmo circadiano, la degenerazione maculare, la funzione immunitaria e la fisiologia cardiaca. La simpaticectomia chirurgica murina è un metodo per studiare gli effetti dell'innervazione adrenergica consentendo l'ablazione adrenergica completa e unilaterale, evitando la necessità di ripetuti interventi farmacologici e gli effetti collaterali associati. Tuttavia, la simpaticectomia chirurgica nei topi è tecnicamente impegnativa a causa delle piccole dimensioni del ganglio cervicale superiore. Questo studio descrive una tecnica chirurgica per identificare e resecare in modo affidabile il ganglio cervicale superiore per ablare il sistema nervoso simpatico. L'identificazione e la rimozione del ganglio sono convalidate mediante l'imaging dei gangli simpatici fluorescenti utilizzando un topo transgenico, l'identificazione della sindrome di Horner post-resezione, la colorazione per i marcatori adrenergici nei gangli resecati e l'osservazione di una diminuzione dell'immunofluorescenza adrenergica negli organi bersaglio dopo simpaticectomia. Questo modello consente studi futuri sulla progressione del cancro e su altri processi fisiologici regolati dal sistema nervoso simpatico.
Introduzione
Diversi studi hanno riportato che i nervi nel microambiente tumorale svolgono un ruolo attivo nel sostenere la progressione del tumore. È stato dimostrato che l'ablazione dei nervi simpatici adrenergici compromette lo sviluppo e la diffusione del tumore nel cancro alla prostata e allo stomaco in vivo 1,2,3, mentre il blocco farmacologico dei recettori adrenergici inibisce la crescita tumorale nel cancro della testa e del collo4. Il coinvolgimento neurale simpatico è stato descritto anche nella progressione del carcinoma pancreatico, cervicale ....
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Protocollo
Le procedure sugli animali qui descritte sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali presso il Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Qui sono stati utilizzati topi NSG maschi e femmine di otto settimane. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Gli strumenti vengono sterilizzati, la superficie di lavoro chirurgica viene disinfettata, la superficie cutanea dell'animale viene disinfettata e il chirurgo indossa guanti sterili durante tutta la procedura.
1. Preparazione dei topi e setup preoperatorio
- Il giorno prima ....
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Risultati
Questo protocollo descrive la rimozione chirurgica dell'SCG in un modello murino. La Figura 2 illustra i punti di riferimento anatomici, tra cui il CCA, la vena giugulare anteriore e l'SCG. Con la dissezione (Figura 2A), la vena giugulare anteriore destra può essere vista scorrere lungo il bordo laterale della trachea. Poiché si trova più in profondità della vena giugulare anteriore, il CCA sinistro e la sua biforcazione nell'arteria carotide interna (ICA) e nel.......
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Discussione
Questo protocollo descrive un modello murino per l'ablazione chirurgica unilaterale dell'input SCG. Questa tecnica consente di studiare gli effetti dell'innervazione adrenergica in vari contesti. Inoltre, il ganglio simpatico resecato può anche essere coltivato in coltura matrigel 3D per esperimenti in vitro 30.
Gli studi che coinvolgono SCGx sono stati eseguiti principalmente nei ratti, poiché la loro anatomia più ampia consente una più facile visualizzazione .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Q. W. è stato sostenuto dal NIH T32CA009685. R. J. W. è stato sostenuto dal NIH R01CA219534. Le strutture principali del Memorial Sloan Kettering Cancer Center sono state supportate da NIH P30CA008748.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Anticorpo anti-tirosina idrossilasi | EMD Millipore | AB152 | |
| Lacrime artificiali lubrificante unguento oftalmico | Akorn | 59399-162-35 | |
| Curity 2 x 2 pollici garza spugna 8 strati, sterile | Covidien | 1806 | |
| Derf porta aghi | Thomas Scientific | 1177K00 | |
| microscopio | |||
| Dumont #5/45 Pinze | Strumenti per la scienza fine | 11251-35 | |
| Dumont Pinze per #7b | Strumenti per la scienza | 11270-20 | |
| ETHILON Sutura in nylon | Ethicon | 698H | |
| Forbici fini - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Nastro chirurgico ipoallergenico | 3M Blenderm | 70200419342 | |
| induzione Camera, 2 litri | VetEquip | 941444 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Nair | Church & Dwight Co., Inc | 40002957 | agente chimico per la rimozione dei peli |
| NORADRENALINE RESEARCH ELISA | Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics) | BA E-5200 | |
| NSG Mouse | Jackson Laboratory | JAX:005557 | |
| Povidone-Iodio Swabstick | PDI | S41350 | |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 |
Riferimenti
- Magnon, C., et al. Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression. Science. 341 (6142), 1236361(2013).
- Zhao, C. M., et al. Denervation suppresses gastric tumorigenesis. Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014....
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Ristampe e permessi
