Articolo metodologico

Estrazione dinamica continua del sangue dal cuore di ratto tramite tecnica di microdialisi non invasiva

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DOI:

10.3791/64531

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13 settembre 2022

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1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Research Institute of Integrated TCM & Western Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

In questo articolo

Sommario

Il presente protocollo descrive un metodo semplice ed efficace per la raccolta dinamica e in tempo reale del sangue del cuore di ratto utilizzando la tecnica della microdialisi.

Abstract

L'analisi dinamica dei componenti del sangue è di grande importanza per comprendere le malattie cardiovascolari e le loro malattie correlate, come l'infarto miocardico, l'aritmia, l'aterosclerosi, l'edema polmonare cardiogeno, l'embolia polmonare e l'embolia cerebrale. Allo stesso tempo, è urgente superare la tecnica di campionamento continuo del sangue cardiaco nei ratti vivi per valutare l'efficacia della terapia di medicina etnica distintiva. In questo studio, una sonda di microdialisi del sangue è stata impiantata nella vena giugulare destra dei ratti in una procedura chirurgica precisa e non invasiva. I campioni di sangue cardiaco sono stati quindi raccolti a una velocità compresa tra 2,87 nL / min e 2,98 ml / min collegandosi a un sistema di raccolta di campioni di microdialisi online. Ancora più importante, i campioni di sangue acquisiti possono essere temporaneamente conservati in contenitori di microdialisi a 4 °C. Il programma di raccolta continua del sangue online basato sulla microdialisi dal cuore di ratto ha notevolmente garantito la qualità dei campioni di sangue, facendo progredire e rinvigorire la razionalità scientifica della ricerca sulle malattie cardiovascolari sistemiche e valutando la terapia etnomedica dal punto di vista dell'ematologia.

Introduzione

Con l'accelerazione del ritmo di vita e l'aumento della pressione psicologica, le malattie cardiovascolari (CVD) tendono a verificarsi nelle persone giovani, di mezza età e anziane 1,2. La morbilità e la mortalità delle CVD sono elevate, con le caratteristiche di insorgenza acuta, rapida progressione e un lungo decorso della malattia, che influiscono seriamente sulla sicurezza dei pazienti3. L'insorgenza di CVD può essere strettamente correlata ai cambiamenti in alcuni componenti del sangue, come colesterolo, lipidi sierici, glicemia, enzimi miocardici e protein chinasi K 4,5,6. La situazione rilevante del paziente può essere gestita più rapidamente analizzando gli elementi di esame del sangue di routine. Quindi, la qualità dei campioni di sangue determina l'accuratezza dei risultati del test. Tuttavia, i metodi convenzionali per la raccolta del sangue presentano alcuni inevitabili inconvenienti, che influiscono seriamente sui risultati sperimentali, come l'ampia area traumatizzata, il piccolo volume di raccolta del sangue, gli elevati requisiti per gli operatori, l'incapacità di riflettere i cambiamenti del farmaco in tempo reale, il pretrattamento ingombrante del campione di sangue, il grande consumo di animali da esperimento e il mancato rispetto dei requisiti etici degli animali 7,8,9 . Con i continui progressi della tecnologia medica, anche la qualità della raccolta del sangue ha avanzato requisiti più elevati. Pertanto, è urgente sviluppare una nuova tecnologia di prelievo del sangue per superare le carenze di cui sopra.

La microdialisi è una tecnica di campionamento in vivo basata sui principi della dialisi10. In condizioni di non equilibrio, i composti da misurare sono diffusi e perfusi dal tessuto lungo il gradiente di concentrazione nella sonda di microdialisi incorporata nel tessuto nel dializzato, che viene continuamente rimosso insieme al dializzato, raggiungendo lo scopo di campionamento dal tessuto vivente11,12. Rispetto ai metodi di campionamento tradizionali, la tecnica di microdialisi presenta splendidi vantaggi nei seguenti aspetti13,14,15: monitoraggio continuo in tempo reale delle variazioni dei vari composti nel sangue; il campionamento non richiede noiose operazioni preliminari e può rappresentare realmente la concentrazione del composto bersaglio nel sito di campionamento; le sonde possono essere impiantate in diverse parti del corpo per studiare l'assorbimento, la distribuzione, il metabolismo, l'escrezione e la tossicità dei composti bersaglio; il campione acquisito non contiene macromolecole biologiche (>20 kD). Pertanto, i campioni di sangue di qualità superiore garantiscono una migliore interpretazione delle CVD e del meccanismo trattato dalla medicina etnica.

I sistemi di campionamento per microdialisi sono generalmente costituiti da pompe di microiniezione, tubi di collegamento, vasche di movimentazione prive di animali, sonde di microdialisi e collettori di campioni16. Come parte più critica del dispositivo del sistema di microdialisi, le comuni sonde di microdialisi comprendono sonde concentriche, sonde flessibili, sonde lineari e sonda shunt17. Tra queste, le sonde flessibili sono sonde morbide e non metalliche, utilizzate principalmente per raccogliere campioni da vasi sanguigni e tessuti periferici come cuore, muscoli, pelle e grasso di animali svegli e liberamente in movimento o anestetizzati13. A contatto con vasi sanguigni o tessuti, la sonda può essere piegata in modo flessibile, evitando così danni irreversibili alla sonda o al sito di campionamento. Con il continuo sviluppo della tecnologia delle sonde, anche l'applicazione della tecnologia di microdialisi in vari campi si sta approfondendo. In questo articolo, il sangue del cuore di ratto è stato acquisito dinamicamente e continuamente dalla tecnologia di microdialisi non invasiva attraverso la sonda flessibile progettata per la raccolta del sangue.

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Protocollo

Il protocollo sugli animali è stato approvato dal Comitato amministrativo dell'Università di medicina tradizionale cinese di Chengdu (numero di registrazione: 2021-11). I ratti maschi specifici di Sprague Dawley (SD) privi di agenti patogeni (8-10 settimane, 260-300 g) sono stati allevati in gabbie di ventilazione indipendenti, mantenendo l'ambiente di laboratorio a 22 °C e al 65% di umidità relativa, e sono stati utilizzati per il presente studio. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Tutti i ratti erano abituati all'alimentazione adattiva per 1 settimana con acqua e dieta gratuite durante il periodo.

1. Preparazione sperimentale

  1. Assemblare l'apparecchiatura coinvolta nella microdialisi del prelievo di sangue (vedere Tabella dei materiali), come mostrato nella Figura 1.
  2. Preparare la soluzione di destrosio citrato anticoagulante (ACD), contenente 3,50 mmol/L di citrato, 7,50 mmol/L di citrato di sodio e 13,60 mmol/L di glucosio, come liquido di perfusione per la raccolta del sangue in microdialisi (vedere Tabella dei materiali).
  3. Prima dell'uso, filtrare gli ACD con un'unità di filtrazione a membrana da 0,22 μm e rimuovere le bolle ad ultrasuoni. Mantenere gli ACD a 37 °C per ridurre la stimolazione per i ratti SD.

2. Ispezione della pervietà del sistema di tubazioni di microdialisi

  1. Collegare l'ingresso della sonda dell'unità di dialisi con l'ago della siringa, l'adattatore per tubi e il tubo fep (vedere Tabella dei materiali).
    NOTA: L'estremità blu della sonda di microdialisi è per l'afflusso di fluido e l'estremità trasparente è per il deflusso del fluido.
  2. Controllare la pervietà del sistema di tubazioni in microdialisi perfondendo ACD18 nel sistema di tubazioni ad una velocità di 2 μL/min.
    NOTA: Se gli ACD fluiscono dal sito di raccolta dei campioni, il sistema di microdialisi senza ostacoli può essere utilizzato per un'ulteriore raccolta di sangue cardiaco. In caso contrario, la sonda del sangue deve essere controllata per verificare la presenza di perdite rotte o se il giunto tubo-tubo è stato sigillato.

3. Impianto della sonda di microdialisi

  1. Anestetizzare i ratti con isoflurano al 2% in una miscela aria-ossigeno di 0,6 L/min, fissare i ratti completamente incoscienti sul tavolo operatorio e mantenere la temperatura corporea a 37 °C utilizzando un mantenitore della temperatura animale (vedi Tabella dei materiali).
  2. Rimuovere la pelliccia dal collo con un rasoio elettrico e disinfettare il sito chirurgico con tre cicli alternati di betadine e alcol al 70%. Iniettare bupivacaina (1,5 mg/kg) nel ratto. Esporre la vena giugulare destra mediante dissezione smussata dei tessuti molli e della fascia perivascolare attraverso un'incisione di 1,5 cm lungo la linea mediana del collo.
    NOTA: Tutti gli strumenti chirurgici e gli strumenti utilizzati nell'esperimento devono essere sterilizzati in anticipo mediante autoclave. Utilizzare guanti sterili e teli chirurgici. L'intera operazione sperimentale deve essere eseguita in un ambiente sterile. Seguire le linee guida locali sull'uso degli animali per l'anestesia e il regime di analgesia.
  3. Fai un nodo staccabile usando una sutura chirurgica 4-0 nella vena giugulare destra all'estremità distale del cuore per bloccare temporaneamente il flusso sanguigno e fai un'incisione di 1,5 cm nella vena giugulare destra vicino al cuore.
  4. Inserire uno stiletto per catetere a forma di ago (lunghezza 25 mm, diametro 0,7 mm, vedere Tabella dei materiali) nella vena giugulare destra verso l'estremità prossimale del cuore di ratto, inserire la sonda di microdialisi del sangue (lunghezza totale della sonda 24 mm, lunghezza della membrana 10 mm) in un catetere e impiantare la sonda con una pinza oftalmica lungo l'incisione obliqua dello stiletto del catetere19.
  5. Rimuovere lo stiletto del catetere guidato e immergere completamente la membrana semipermeabile della sonda (lunghezza della membrana 10 mm, diametro della membrana 0,5 mm) nella vena giugulare destra. Sbroglia il nodo staccabile all'estremità distale del cuore per ripristinare il flusso sanguigno nella vena giugulare destra.
  6. Legare la sonda con la vena giugulare destra utilizzando suture chirurgiche 4-0 e infilare sottocutaneamente il tubo coda della sonda attraverso la parte posteriore del collo. Vedere la Figura 2 per le fasi specifiche di impianto della sonda.
    NOTA: Il cut-off molecolare della sonda di microdialisi del sangue utilizzata in questo studio è di >20 kD. I campioni di sangue raccolti contengono sostanze con un peso molecolare inferiore a 20 kD.

4. Campionamento in microdialisi

  1. Una settimana dopo l'impianto della sonda di microdialisi, i ratti che si stanno riprendendo da un trauma chirurgico vengono sottoposti a campionamento di microdialisi. Posizionare il ratto sveglio in un serbatoio a movimento libero (vedere Tabella dei materiali) e collegare la sonda al sistema di microdialisi. Equilibrare la membrana di dialisi della sonda irrigando ACD con una velocità di 2 μL/min per 1 ora.
  2. Raccogliere campioni di sangue in microdialisi ad una velocità di flusso di 2 μL/min e conservarli temporaneamente in un contenitore frazionato a 4 °C.
    NOTA: I campioni di sangue ottenuti potrebbero essere testati direttamente centrifugando a 20.000 x g per 10 minuti a temperatura ambiente. Oppure potrebbe essere conservato a -80 °C per i test successivi. Quando si raccolgono campioni, è sempre importante osservare se la sonda prolasso e / o fuoriesce.

5. Operazione post-campionamento

  1. Anestetizzare i ratti SD con isoflurano al 2% in una miscela aria-ossigeno a 0,6 L/min.
  2. Sezionare per riconfermare che la sonda è nella vena giugulare destra. Rimuovere la sonda di microdialisi dalla vena giugulare destra e metterla in acqua ultrapura.
  3. Infine, eutanasia i ratti per inalazione di isoflurano al 5%.
  4. Collegare la sonda alla tubazione e risciacquare per una notte a una velocità di 2 μL/min con acqua ultrapura per lavare completamente il sale residuo nel tubo e nella sonda.
  5. Rimuovere la sonda e immergerla in acqua ultrapura. Conservare a 4 °C per evitare che la membrana di dialisi della sonda si contragga.
    NOTA: Se il volume del liquido di dialisi è incoerente con il volume del liquido di perfusione, la sonda può essere bloccata dal sangue coagulato. La sonda può essere posizionata nella soluzione proteica pancreatica fino a quando la sostanza visibile si sfalda dalla punta della membrana della sonda.

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Risultati

Il presente protocollo ha permesso di ottenere il sangue cardiaco da ratti coscienti secondo i parametri di campionamento impostati nell'apparecchiatura di microdialisi. I campioni di sangue normali devono essere rosso vivo, mentre gli animali con ipossia, potenziali coaguli di sangue o malattie anemiche possono avere viola scuro o rosso scuro. I campioni ottenuti attraverso la tecnica di microdialisi del sangue sono incolori, chiari e trasparenti, che possono essere utilizzati per analizzare i marcatori sierici di diver...

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Discussione

Le CVD sono una malattia cronica comune nelle cliniche con incidenza gradualmente crescente in Cina, e l'età di esordio tende ad essere più giovane, causando la preoccupazione e il panico della maggior parte dei pazienti20,21. Essendo la principale causa di morte nel mondo, le malattie cardiovascolari possono indurre infarto cerebrale e altre malattie ad alta mortalità, minacciando seriamente la vita sana dei pazienti22. CVD, tra cui cardi...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82104533), dalla China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273), dal Dipartimento di Scienza e Tecnologia della provincia del Sichuan (2021YJ0175) e dal progetto chiave di ricerca e sviluppo del Piano provinciale di scienza e tecnologia del Sichuan (2022YFS0438). Nel frattempo, gli autori desiderano ringraziare Yuncheng Hong, ingegnere senior delle apparecchiature presso TRI-ANGELS D & H TRADING PTE. LTD. (Singapore city, Singapore), per la fornitura di servizi tecnici per le tecniche di microdialisi.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Sistema per anestesia animaleRayward Life Technology Co., LtdR500IE
Mantenitore di temperatura animaleRayward Life Technology Co., Ltd69020
Sonda per microdialisi del sangue  Catetere per microdialisi CMA ABT55347
CMA Microdialisi ABT55347
CitratoMerck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd251275
Rasoio elettricoRayward Life Technology Co., LtdCP-5200
Tubo Fep  CMA Microdialisi AB3409501
Vasca a movimento libero per animali CMA Microdialisi ABCMA120
GlucosioMerck Chemical Technology (Shanghai) Co., LtdG8270
Pinze emostaticheRayward Life Technology Co., LtdF21020-16
IsofluranRayward Life Technology Co., LtdR510-22
Micro forbiciBeyotime Biotechnology Co., LtdFS221
Microdialisi tubo di raccolta  CMA Microdialysis AB7431100
Collettore per microdialisi  CMA Microdialisi ABCMA4004
Supporto per microdialisi in vitro CMA Microdialisi ABCMA130
Pompa per microiniezione per microdialisi  CMA Microdialisi AB788130
Siringa per microdialisi (1,0 ml)  CMA Microdialysis AB8309020
Adattatore per tubi per microdialisi  CMA Microdialisi AB3409500
Membrana filtrante microporosaMerck Millipore Ltd.
Suture chirurgiche non assorbibiliShanghai Tianqing Biological Materials Co., LtdS19004
Tavolo operatorioYuyan Scientific Instrument Co., Ltd30153
Pinze oftalmicheRayward Life Technology Co., LtdF12016-15
Citrato di sodioMerck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd1613859
Sprague Dawley  (SD) rattiChengdu Dossy Experimental Animals Co., LtdSYXK(figure-materials-1)2019-049
Forbici chirurgicheRayward Life Technology Co., LtdS14014-15
Forbici chirurgicheShanghai Bingyu Fluid technology Co., LtdBY-103
Ago per siringa  CMA Microdialisi ABT55347
Pulitore ad ultrasuoniGuangdong Goote Ultrasonic Co., LtdKMH1-240W8101
R0DB36622

Riferimenti

  1. van Rensburg, W. J. J. Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population. Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).
  2. Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L. Cardiovascular disease prevention and management of pre-existent cardiovascular disease in a cohort of prostate cancer survivors. Journal of Cancer Survivorship. , (2022).
  3. Rødevand, L., Tesli, M., Andreassen, O. A. Cardiovascular disease risk in people with severe mental disorders: an update and call for action. Current Opinion in Psychiatry. 35 (4), 277-284 (2022).
  4. Izumi, Y., et al. Impact of circulating cathepsin K on the coronary calcification and the clinical outcome in chronic kidney disease patients. Heart and Vessels. 31 (1), 6-14 (2016).
  5. Wang, K., et al. Whey protein hydrolysate alleviated atherosclerosis and hepatic steatosis by regulating lipid metabolism in apoE-/- mice fed a Western diet. Food Research International. 157, 111419(2022).
  6. Angelone, T., Rocca, C., Pasqua, T. Nesfatin-1 in cardiovascular orchestration: From bench to bedside. Pharmacological Research. 156, 104766(2020).
  7. Bernardi, P. M., Barreto, F., Dalla Costa, T. Application of a LC-MS/MS method for evaluating lung penetration of tobramycin in rats by microdialysis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 134, 340-345 (2017).
  8. Anderzhanova, E., Wotjak, C. T. Brain microdialysis and its applications in experimental neurochemistry. Cell and Tissue Research. 354 (1), 27-39 (2013).
  9. Joukhadar, C., Müller, M. Microdialysis: current applications in clinical pharmacokinetic studies and its potential role in the future. Clinical Pharmacokinetics. 44 (9), 895-913 (2005).
  10. Stangler, L. A., et al. Microdialysis and microperfusion electrodes in neurologic disease monitoring. Fluids and Barriers of the CNS. 18 (1), 52(2021).
  11. Young, B., et al. Cerebral microdialysis. Critical Care Nursing Clinics of North America. 28 (1), 109-124 (2016).
  12. O'Connell, M. T., Krejci, J. Microdialysis techniques and microdialysis-based patient-near diagnostics. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 414 (10), 3165-3175 (2022).
  13. Hammarlund-Udenaes, M. Microdialysis as an important technique in systems pharmacology-a historical and methodological review. The AAPS Journal. 19 (5), 1294-1303 (2017).
  14. Stahl, M., Bouw, R., Jackson, A., Pay, V. Human microdialysis. Current Pharmaceutical Biotechnology. 3 (2), 165-178 (2002).
  15. Pierce, C. F., Kwasnicki, A., Lakka, S. S., Engelhard, H. H. Cerebral microdialysis as a tool for assessing the delivery of chemotherapy in brain tumor patients. World Neurosurgery. 145, 187-196 (2021).
  16. Sørensen, M., Jacobsen, S., Petersen, L. Microdialysis in equine research: a review of clinical and experimental findings. Veterinary Journal. 197 (3), 553-559 (2013).
  17. Dmitrieva, N., Rodríguez-Malaver, A. J., Pérez, J., Hernández, L. Differential release of neurotransmitters from superficial and deep layers of the dorsal horn in response to acute noxious stimulation and inflammation of the rat paw. European Journal of Pain. 8 (3), 245-252 (2004).
  18. Li, T., et al. Microdialysis sampling and HPLC-MS/MS quantification of sinomenine, ligustrazine, gabapentin, paracetamol, pregabalin and amitriptyline in rat blood and brain extracellular fluid. Acta Pharmaceutica Sinica. 55 (9), 2198-2206 (2020).
  19. Chauzy, A., Lamarche, I., Adier, C., Couet, W., Marchand, S. Microdialysis study of Aztreonam-Avibactam distribution in peritoneal fluid and muscle of rats with or without experimental peritonitis. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 62 (10), 01228(2018).
  20. Fang, X. X., Ardehali, H., Min, J. X., Wang, F. D. The molecular and metabolic landscape of iron and ferroptosis in cardiovascular disease. Nature Reviews. Cardiology. , 1-17 (2022).
  21. Samson, R., Ennezat, P. V., Le Jemtel, T. H., Oparil, S. Cardiovascular disease risk reduction and body mass index. Current Hypertension Reports. , (2022).
  22. Kim, M. H., et al. School racial segregation and long-term cardiovascular health among Black adults in the US: A quasi-experimental study. PLoS Medicine. 19 (6), 1004031(2022).
  23. Qin, Y. H., et al. Role of m6A RNA methylation in cardiovascular disease (Review). International Journal of Molecular Medicine. 46 (6), 1958-1972 (2020).
  24. Xu, C. M., Liu, C. J., Xiong, J. H., Yu, J. Cardiovascular aspects of the (pro)renin receptor: Function and significance. FASEB Journal. 36 (4), 22237(2022).
  25. Guvenc-Bayram, G., Yalcin, M. The intermediary role of the central cyclooxygenase / lipoxygenase enzymes in intracerebroventricular injected nesfatin-1-evoked cardiovascular effects in rats. Neuroscience Letters. 756, 135961(2021).
  26. Ahrens Kress, A. P., Zhang, Y. D., Kaiser-Vry, A. R., Sauer, M. B. A comparison of blood collection techniques in mice and their effects on welfare. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 61 (3), 287-295 (2022).
  27. Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).
  28. Reyes-Garcés, N., et al. In vivo brain sampling using a microextraction probe reveals metabolic changes in rodents after deep brain stimulation. Analytical Chemistry. 91 (15), 9875-9884 (2019).
  29. Kho, C. M., Enche Ab Rahim, S. K., Ahmad, Z. A., Abdullah, N. S. A review on microdialysis calibration methods: the theory and current related efforts. Molecular Neurobiology. 54 (5), 3506-3527 (2017).
  30. Zhuang, L. N., et al. Theory and application of microdialysis in pharmacokinetic studies. Current Drug Metabolism. 16 (10), 919-931 (2015).
  31. Zhang, Y. F., Huang, X. X., Zhu, L. X. Metabonomics research strategy based on microdialysis technique. China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (1), 214-220 (2020).
  32. Carpenter, K. L., Young, A. M., Hutchinson, P. J. Advanced monitoring in traumatic brain injury: microdialysis. Current Opinion in Critical Care. 23 (2), 103-109 (2017).
  33. Brunner, M., Langer, O. Microdialysis versus other techniques for the clinical assessment of in vivo tissue drug distribution. The AAPS Journal. 8 (2), 263-271 (2006).
  34. Tettey-Amlalo, R. N., Kanfer, I., Skinner, M. F., Benfeldt, E., Verbeeck, R. K. Application of dermal microdialysis for the evaluation of bioequivalence of a ketoprofen topical gel. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 36 (2-3), 219-225 (2009).
  35. Dhanani, J. A., et al. Recovery rates of combination antibiotic therapy using in vitro microdialysis simulating in vivo conditions. Journal of Pharmaceutical Analysis. 8 (6), 407-412 (2018).

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