Il presente protocollo descrive un metodo semplice ed efficace per la raccolta dinamica e in tempo reale del sangue del cuore di ratto utilizzando la tecnica della microdialisi.
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Articolo metodologico
Estrazione dinamica continua del sangue dal cuore di ratto tramite tecnica di microdialisi non invasiva
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'analisi dinamica dei componenti del sangue è di grande importanza per comprendere le malattie cardiovascolari e le loro malattie correlate, come l'infarto miocardico, l'aritmia, l'aterosclerosi, l'edema polmonare cardiogeno, l'embolia polmonare e l'embolia cerebrale. Allo stesso tempo, è urgente superare la tecnica di campionamento continuo del sangue cardiaco nei ratti vivi per valutare l'efficacia della terapia di medicina etnica distintiva. In questo studio, una sonda di microdialisi del sangue è stata impiantata nella vena giugulare destra dei ratti in una procedura chirurgica precisa e non invasiva. I campioni di sangue cardiaco sono stati quindi raccolti a una velocità compresa tra 2,87 nL / min e 2,98 ml / min collegandosi a un sistema di raccolta di campioni di microdialisi online. Ancora più importante, i campioni di sangue acquisiti possono essere temporaneamente conservati in contenitori di microdialisi a 4 °C. Il programma di raccolta continua del sangue online basato sulla microdialisi dal cuore di ratto ha notevolmente garantito la qualità dei campioni di sangue, facendo progredire e rinvigorire la razionalità scientifica della ricerca sulle malattie cardiovascolari sistemiche e valutando la terapia etnomedica dal punto di vista dell'ematologia.
Introduzione
Con l'accelerazione del ritmo di vita e l'aumento della pressione psicologica, le malattie cardiovascolari (CVD) tendono a verificarsi nelle persone giovani, di mezza età e anziane 1,2. La morbilità e la mortalità delle CVD sono elevate, con le caratteristiche di insorgenza acuta, rapida progressione e un lungo decorso della malattia, che influiscono seriamente sulla sicurezza dei pazienti3. L'insorgenza di CVD può essere strettamente correlata ai cambiamenti in alcuni componenti del sangue, come colesterolo, lipidi sierici, glicemia, enzimi miocardici e protein chinasi K
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Protocollo
Il protocollo sugli animali è stato approvato dal Comitato amministrativo dell'Università di medicina tradizionale cinese di Chengdu (numero di registrazione: 2021-11). I ratti maschi specifici di Sprague Dawley (SD) privi di agenti patogeni (8-10 settimane, 260-300 g) sono stati allevati in gabbie di ventilazione indipendenti, mantenendo l'ambiente di laboratorio a 22 °C e al 65% di umidità relativa, e sono stati utilizzati per il presente studio. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Tutti i ratti erano abituati all'alimentazione adattiva per 1 settimana con acqua e dieta gratuite durante il periodo.<....
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Risultati
Il presente protocollo ha permesso di ottenere il sangue cardiaco da ratti coscienti secondo i parametri di campionamento impostati nell'apparecchiatura di microdialisi. I campioni di sangue normali devono essere rosso vivo, mentre gli animali con ipossia, potenziali coaguli di sangue o malattie anemiche possono avere viola scuro o rosso scuro. I campioni ottenuti attraverso la tecnica di microdialisi del sangue sono incolori, chiari e trasparenti, che possono essere utilizzati per analizzare i marcatori sierici di diver.......
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Discussione
Le CVD sono una malattia cronica comune nelle cliniche con incidenza gradualmente crescente in Cina, e l'età di esordio tende ad essere più giovane, causando la preoccupazione e il panico della maggior parte dei pazienti20,21. Essendo la principale causa di morte nel mondo, le malattie cardiovascolari possono indurre infarto cerebrale e altre malattie ad alta mortalità, minacciando seriamente la vita sana dei pazienti22. CVD, tra cui cardi.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82104533), dalla China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273), dal Dipartimento di Scienza e Tecnologia della provincia del Sichuan (2021YJ0175) e dal progetto chiave di ricerca e sviluppo del Piano provinciale di scienza e tecnologia del Sichuan (2022YFS0438). Nel frattempo, gli autori desiderano ringraziare Yuncheng Hong, ingegnere senior delle apparecchiature presso TRI-ANGELS D & H TRADING PTE. LTD. (Singapore city, Singapore), per la fornitura di servizi tecnici per le tecniche di microdialisi.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sistema per anestesia animale | Rayward Life Technology Co., Ltd | R500IE | |
| Mantenitore di temperatura animale | Rayward Life Technology Co., Ltd | 69020 | |
| Sonda per microdialisi del sangue | Catetere per microdialisi CMA AB | T55347 | |
| CMA Microdialisi AB | T55347 | ||
| Citrato | Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd | 251275 | |
| Rasoio elettrico | Rayward Life Technology Co., Ltd | CP-5200 | |
| Tubo Fep | CMA Microdialisi AB | 3409501 | |
| Vasca a movimento libero per animali | CMA Microdialisi AB | CMA120 | |
| Glucosio | Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd | G8270 | |
| Pinze emostatiche | Rayward Life Technology Co., Ltd | F21020-16 | |
| Isofluran | Rayward Life Technology Co., Ltd | R510-22 | |
| Micro forbici | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | FS221 | |
| Microdialisi tubo di raccolta | CMA Microdialysis AB | 7431100 | |
| Collettore per microdialisi | CMA Microdialisi AB | CMA4004 | |
| Supporto per microdialisi in vitro | CMA Microdialisi AB | CMA130 | |
| Pompa per microiniezione per microdialisi | CMA Microdialisi AB | 788130 | |
| Siringa per microdialisi (1,0 ml) | CMA Microdialysis AB | 8309020 | |
| Adattatore per tubi per microdialisi | CMA Microdialisi AB | 3409500 | |
| Membrana filtrante microporosa | Merck Millipore Ltd. | ||
| Suture chirurgiche non assorbibili | Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd | S19004 | |
| Tavolo operatorio | Yuyan Scientific Instrument Co., Ltd | 30153 | |
| Pinze oftalmiche | Rayward Life Technology Co., Ltd | F12016-15 | |
| Citrato di sodio | Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd | 1613859 | |
| Sprague Dawley (SD) ratti | Chengdu Dossy Experimental Animals Co., Ltd | SYXK( )2019-049 | |
| Forbici chirurgiche | Rayward Life Technology Co., Ltd | S14014-15 | |
| Forbici chirurgiche | Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd | BY-103 | |
| Ago per siringa | CMA Microdialisi AB | T55347 | |
| Pulitore ad ultrasuoni | Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd | KMH1-240W8101 |
Riferimenti
- van Rensburg, W. J. J. Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population. Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).
- Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L.
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Ristampe e permessi
