Alimentazione a membrana artificiale di zecche per Ixodes scapularis

Sommario

Presentato qui è un metodo per alimentare le zecche in vitro tramite un sistema di membrana artificiale per consentire l'ingorgo parziale o totale di una varietà di fasi di vita delle zecche.

Abstract

Le zecche e le loro malattie associate sono un importante argomento di studio a causa della loro salute pubblica e del carico veterinario. Tuttavia, le esigenze alimentari delle zecche durante lo studio e l'allevamento possono limitare le domande sperimentali o la capacità dei laboratori di ricercare le zecche e i loro agenti patogeni associati. Un sistema di alimentazione artificiale a membrana può ridurre questi problemi e aprire nuove strade di ricerca che potrebbero non essere state possibili con i tradizionali sistemi di alimentazione animale. Questo studio descrive un sistema di alimentazione a membrana artificiale che è stato perfezionato per il successo dell'alimentazione e dell'ingorgo per tutte le fasi di vita di Ixodes scapularis . Inoltre, il sistema di alimentazione artificiale a membrana descritto in questo studio può essere modificato per l'uso con altre specie di zecche attraverso un semplice perfezionamento dello spessore della membrana desiderato. I benefici di un sistema di alimentazione artificiale a membrana sono controbilanciati dall'intensità di lavoro del sistema, dai fattori ambientali aggiuntivi che possono influire sul successo dell'alimentazione e dalla necessità di perfezionare la tecnica per ogni nuova specie e fase di vita delle zecche.

Introduzione

Le malattie trasmesse dalle zecche hanno un forte impatto sulla salute degli esseri umani e degli animali in tutto il mondo, essendo responsabili di oltre due terzi di tutte le malattie associate ai vettori negli Stati Uniti dal 2004 al 2016¹. Inoltre, il numero di casi è cresciuto negli ultimi anni, con più persone e bestiame colpiti da zecche e malattie associate ^2,3. Mentre ci sono probabilmente numerose cause per la tendenza al rialzo del numero di casi, il cambiamento climatico è un fattore importante ^3,4. Il previsto aumen....

Protocollo

1. Preparazione della camera della membrana tick

1. Preparare una superficie piana e non porosa, come un piano di vetro o una base metallica rivestita in ceramica, pulendola con etanolo al 70% e quindi coprirla con un singolo strato di pellicola trasparente, assicurandosi che l'involucro di plastica sia piatto e privo di bolle o rughe (vedere Figura 1A).
2. Incollare con nastro adesivo la carta per la pulizia delle lenti in rayon al 100% sulla superficie preparata. Assicurarsi che sia piatto e leggermente teso con nastro adesivo su tutti e quattro i lati della carta. Due pezzi di carta da 4 in x 6 in lenti p....

Risultati

Un'alimentazione di successo dipende dal fatto che si desideri un ingorgo parziale o completo. Alimentato con successo I. scapularis diventa una tonalità di grigio canna di fucile per gli adulti e si stacca da solo dalla membrana. Tuttavia, se sono almeno delle dimensioni di un pisello, possono essere staccati dalla membrana quando finiscono l'alimentazione. Per gli stadi immaturi di I. scapularis , la dimensione per le zecche completamente ingorgate varia e, poiché, a differenza degli adulti, non mostr.......

Discussione

L'alimentazione artificiale a membrana delle zecche fornisce uno strumento utile per una varietà di procedure sperimentali, ma non è probabile che sostituisca l'alimentazione animale per tutte le applicazioni. Mantenere grandi colonie di zecche in tutte le fasi della vita senza alimentazione animale è generalmente insostenibile. Invece, il sistema di alimentazione artificiale è prezioso per altri scopi come infettare le zecche con agenti patogeni non supportati da ospiti modello, valutare gli impatti di dosaggi controlla.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
00-10 Durezza Silicone	Smooth-On	Ecoflex 00-10	Misura di prova da Smooth-On Store
00-50 Durezza Silicone	Smooth-On	Ecoflex 00-50	Misura di prova da Smooth-On Store
30 Durezza Silicone	Smooth-On	Mold Star 30	Misura di prova da Smooth-On Store
Piastre per coltura cellulare a 6 pozzetti	Corning Incorporated	3516
Adenosina trifosfato (ATP)	Millipore Sigma	A1852-1VL	Utilizzato per produrre una soluzione acquosa di 3 mM di ATP che è stata sterilizzata tramite filtro 0,2 micrometrico
Sangue bovino	HemoStat	DBB500	Defibrato meccanicamente; 500 mL è solitamente sufficiente per un esperimento
Clingwrap	Fisherbrand	22-305654
Carta da filtro	Fisherbrand	09-790-2C	Autoclave e lasciare raffreddare prima dell'uso. Può utilizzare anche la qualità fine invece del mezzo
Fluon (politetrafluoroetilene acquoso)	Bioquip	2871	Disponibile da altre fonti come https://canada-ant-colony.com/products/fluon-ptfe-10ml
Glucosio	Millipore Sigma	G8270-100G
Esano	Millipore Sigma	139386-100ML
Carta per lenti	Fisherbrand	11-995	100% rayon
Nistatina	Gold Biotechnology	N-750-10
Parafilm	Fisherbrand	S37440
Penicillina/streptomicina/fungizone	Gibco	15240-096	O generico equivalente con concentrazione come segue (10.000 unità/mL di penicillina, 10.000 µ g/mL di streptomicina e 25 µ g/mL di Amfotericina B)
Fagostimolante	Prodotto in casa		Raccolto da precedenti alimentazioni di zecche Tubo
policarbonato	McMaster-Carr	8585K204	Taglio a 45 mm di lunghezza, diametro esterno 1,25 pollici, diametro interno 1 pollice. Il taglio richiede una mola per troncatrice.
O-ring in gomma	McMaster-Carr	9452K38	5 mm di spessore, diametro interno 1,25 pollici
Pinza soft touch	VWR	470315-238
Super colla			cianoacrilato
colla Unryu paper	Forniture artistiche per negozi fibra		di gelso 10 g/m2. Acquistato presso il negozio di forniture artistiche Wet Paint, St. Paul, MN, USA