Articolo metodologico

Generazione di un modello di tiroidite autoimmune spontanea del topo

DOI:

10.3791/64609

17 marzo 2023

In questo articolo

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Sommario

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Sono stati stabiliti diversi tipi di modelli animali della tiroidite di Hashimoto, così come la tiroidite autoimmune spontanea nel topo NOD. I mouse H-2h4 sono un modello semplice e affidabile per l'induzione HT. Questo articolo descrive questo approccio e valuta il processo patologico per una migliore comprensione del modello murino SAT.

Abstract

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Negli ultimi anni, la tiroidite di Hashimoto (HT) è diventata la malattia autoimmune della tiroide più comune. È caratterizzata da infiltrazione linfocitaria e dalla rilevazione di specifici autoanticorpi sierici. Sebbene il potenziale meccanismo non sia ancora chiaro, il rischio di tiroidite di Hashimoto è correlato a fattori genetici e ambientali. Allo stato attuale, ci sono diversi tipi di modelli di tiroidite autoimmune, tra cui tiroidite autoimmune sperimentale (EAT) e tiroidite autoimmune spontanea (SAT).

L'EAT nei topi è un modello comune per HT, che viene immunizzato con lipopolisaccaride (LPS) combinato con tireoglobulina (Tg) o integrato con adiuvante completo di Freund (CFA). Il modello murino EAT è ampiamente affermato in molti tipi di topi. Tuttavia, la progressione della malattia è più probabilmente associata alla risposta anticorpale Tg, che può variare in diversi esperimenti.

SAT è anche ampiamente usato nello studio di HT nel NOD. Mouse H-2H4. Il CENNO. Il topo H2h4 è un nuovo ceppo ottenuto dall'incrocio del topo diabetico non obeso (NOD) con la B10. A(4R), che è significativamente indotto per HT con o senza alimentazione di iodio. Durante l'induzione, il NOD. Il topo H-2h4 ha un alto livello di TgAb accompagnato da infiltrazione di linfociti nel tessuto follicolare tiroideo. Tuttavia, per questo tipo di modello murino, ci sono pochi studi per valutare in modo completo il processo patologico durante l'induzione dello iodio.

In questo studio viene stabilito un modello murino SAT per la ricerca HT e il processo di cambiamento patologico viene valutato dopo un lungo periodo di induzione dello iodio. Attraverso questo modello, i ricercatori possono comprendere meglio lo sviluppo patologico della HT e selezionare nuovi metodi di trattamento per la HT.

Introduzione

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La tiroidite di Hashimoto (HT), nota anche come tiroidite linfatica cronica o tiroidite autoimmune, è stata segnalata per la prima volta nel 19121. La HT è caratterizzata da infiltrazione linfocitaria e danni al tessuto follicolare tiroideo. I test di laboratorio si manifestano principalmente come aumento degli anticorpi specifici della tiroide, inclusi gli anticorpi anti-tireoglobulina (TgAb) e gli anticorpi anti-perossidasi tiroidea (TPOAb)2. L'incidenza di HT è nell'intervallo 0,4% -1,5%, rappresentando il 20% -25% di tutte le malattie della tiroide, e questo valore è aumentato negli ultimi anni3

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Protocollo

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Il protocollo descritto di seguito è stato approvato dalle linee guida per la cura e l'uso stabilite dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università del Sichuan.

1. Preparazione

  1. Ospitare tutti i topi in specifiche condizioni prive di agenti patogeni in cicli luce-buio di 12 ore (a partire rispettivamente dalle 07:00 e dalle 19:00). Mantenere la temperatura ambiente a 22 °C. Cambia i materiali della biancheria da letto ogni settimana. Fornire quantità adeguate di chow e acqua standard per roditori.
  2. Quando si prepara la soluzione madre di NaI in acqua, pesare 2,5 g del compost....

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Risultati

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I cambiamenti istologici erano sorprendentemente diversi nelle femmine e nei maschi, la durata dell'assunzione di iodio e la soluzione di NaI. Come mostrato nella Figura 1, ~10% di NOD. I topi H-2h4 hanno sviluppato SAT anche senza induzione di iodio all'età di 24 settimane e tutti i topi alla fine hanno sviluppato tiroidite. Quando veniva somministrata acqua normale, non c'era alcuna differenza significativa nei cambiamenti istologici tra maschi e femmine. L'aggiunta di NaI all'acqua potabi.......

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Discussione

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La HT si verifica a causa di un disturbo del sistema autoimmune causato da linfociti che si infiltrano nella ghiandola tiroidea, compromettendo ulteriormente la funzione tiroidea, mentre producono anticorpi specifici della tiroide. I livelli sierici di TSH, TgAb e TPOAb nei pazienti con HT sono significativamente elevati27. Allo stato attuale, due tipi principali di modelli murini sono ampiamente utilizzati per studiare l'eziologia della tiroidite autoimmune: EAT e SAT29. I.......

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Dichiarazioni

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Tutti gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.

Ringraziamenti

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Gli anticorpi monoclonali di topo contro il TPO umano (usati come controlli positivi) sono stati forniti dal Dr. P. Carayon e dal Dr. J. Ruf (Marsiglia, Francia). Gli autori ringraziano tutti i partecipanti a questo studio e i membri del nostro team di ricerca. Questo lavoro è stato in parte sostenuto da sovvenzioni del Fondo di sostegno post-dottorato dell'ospedale della Cina occidentale, dell'Università del Sichuan, Cina (2020HXBH057) e del Programma di supporto scientifico e tecnologico della provincia del Sichuan (progetto n. 2021YFS0166)

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Butorfanolo tartratoSupelcoL-044 
Dexmedetomidina cloridrato Sigma-Aldrich145108-58-3
Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) beneSigma-AldrichM9410-1CS
Etanolomacklin64-17-5 
Freund' s Coadiuvante, Completo Sigma-AldrichF5881 
Freund' s Coadiuvante, Incompleto Sigma-AldrichF5506
Capra anti-Topo IgG invitrogenSA5-10275 
Soluzione di midazolam SupelcoM-908 
Tiroxina (T4) di topo/ratto ELISACalbiotechDKO045
Paraformaldeidemacklin30525-89-4 
Ioduro di propidioSigma-AldrichP4864
Iodio di sodioSigma-Aldrich 7681-82-5
TireoglobulinaSigma-Aldrich T1126
Tireoglobulina  Kit ELISAThermo ScientificEHTGX5
TSH ELISACalbiotechDKO200
Xilenemacklin1330-20-7

Riferimenti

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  1. Ralli, M., et al. Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation. Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649(2020).
  2. Zhang, Q. Y., et al.

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Ristampe e permessi

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Errata corrige

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Formal Correction: Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model
Posted by JoVE Editors on 6/05/2023. Citeable Link.

An erratum was issued for: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model. The Protocol section was updated.

Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:

After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).

to

After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33µg/100µL, medetomidine 2.5µg/100µL, and butorphanol 16.7µg/100µL. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4µg/g, medetomidine 0.75µg/g, and butorphanol 1.67µg/g. Anesthesia depth was confirmed when the mouse's limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of  pedal reflex.

Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:

After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.

to

After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.

Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:

Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.

to

Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.

Tag

Tiroidite di Hashimotomodello murinotopo NOD H 2h4induzione con iodioanticorpi anti tireoglobulinaanticorpi anti perossidasi tiroideainfiltrazione linfocitariaisolamento del tessuto tiroideo

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