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Articolo metodologico

Generazione di ratti ipoparatiroidei tramite paratiroidectomia assistita da nanoparticelle di carbonio

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DOI:

10.3791/64611

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14 luglio 2023

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Un modello animale di ipoparatiroidismo acquisito (HypoPT) è fondamentale per comprendere come l'HypoPT influisce sull'omeostasi degli ioni minerali e per verificare l'efficacia di nuovi trattamenti. Qui, viene presentata una tecnica per generare un modello di ratto di ipoparatiroidismo acquisito (AHypoPT) mediante paratiroidectomia (PTX) utilizzando nanoparticelle di carbonio.

Abstract

L'ipoparatiroidismo (HypoPT) è una malattia rara che coinvolge le ghiandole paratiroidi ed è caratterizzata da una ridotta secrezione o potenza dell'ormone paratiroideo (PTH), che porta ad alti livelli sierici di fosforo e bassi livelli sierici di calcio. HypoPT più comunemente deriva da danni accidentali alle ghiandole o la loro rimozione durante la tiroide o altri interventi chirurgici del collo anteriore. La chirurgia paratiroidea/tiroidea è diventata più comune negli ultimi anni, con un corrispondente aumento dell'insorgenza di HypoPT come complicanza postoperatoria. C'è una necessità critica di un modello animale HypoPT per comprendere meglio i meccanismi alla base degli effetti di HypoPT sull'omeostasi degli ioni minerali e per verificare l'efficacia terapeutica di nuovi trattamenti. Qui, viene riportata una tecnica per creare HypoPT acquisita nei ratti maschi eseguendo la paratiroidectomia (PTX) utilizzando nanoparticelle di carbonio. Il modello di ratto mostra grandi promesse rispetto ai modelli murini di ipoparatiroidismo. È importante sottolineare che la regione di legame del recettore PTH umano ha una somiglianza di sequenza dell'84,2% con quella del ratto, che è superiore alla somiglianza del 73,7% condivisa con i topi. Inoltre, gli effetti degli estrogeni, che possono influenzare la via di segnalazione del recettore PTH/PTHrP, non sono stati completamente studiati nei ratti maschi. Le nanoparticelle di carbonio sono traccianti linfatici che colorano i linfonodi tiroidei neri senza influire sulla loro funzione, ma non macchiano le ghiandole paratiroidi, il che le rende facili da identificare e rimuovere. In questo studio, i livelli sierici di PTH non erano rilevabili dopo PTX e ciò ha provocato ipocalcemia e iperfosfatemia significative. Pertanto, lo stato clinico dell'HypoPT postoperatorio può essere notevolmente rappresentato nel modello di ratto. Il PTX assistito da nanoparticelle di carbonio può quindi servire come modello straordinariamente efficace e facilmente implementabile per studiare la patogenesi, il trattamento e la prognosi dell'HypoPT.

Introduzione

L'ormone paratiroideo (PTH) è secreto dalle ghiandole paratiroidi. È un importante modulatore dell'equilibrio del calcio, mantiene il metabolismo del fosfato e partecipa al turnover osseo 1,2. L'ipoparatiroidismo (HypoPT) si manifesta come una diminuzione della secrezione o perdita funzionale di PTH. È una malattia endocrina rara, con una prevalenza di circa 9-37 per 100.000 anni-persona 3,4,5. L'ipoPT è caratterizzata da una diminuzione dei livelli sierici di PTH e calcio accompagnata da un aumento<....

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Protocollo

Questo studio è stato approvato dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso lo State Key Laboratory of Oral Diseases, Sichuan University. Il permesso è stato ottenuto dalle agenzie locali competenti prima dell'esperimento. Per il presente studio sono stati utilizzati otto ratti maschi di Sprague-Dawley (SD) di 8-10 settimane, con un peso medio di 200-250 g. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Cibo e acqua sono stati forniti ad libitum durante tutto il periodo sperimentale.

1. Preparazione preoperatoria per la generazione di ratti PTX a....

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Risultati

Le posizioni e il numero di ghiandole paratiroidi sono stati inizialmente osservati nei ratti al microscopio a dissezione. Prima dell'iniezione di nanoparticelle di carbonio, le ghiandole tiroidee erano di un colore rosso traslucido e le ghiandole paratiroidi erano difficilmente distinguibili al microscopio (Figura 1A). Dopo l'iniezione di nanoparticelle, le ghiandole tiroidee sono state colorate di nero, mentre le ghiandole paratiroidi sono rimaste non colorate (Figura .......

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Discussione

I rapporti epidemiologici indicano che l'individuazione di malattie della tiroide è aumentata in modo significativo e il numero di interventi chirurgici correlati eseguiti è aumentato di conseguenza19,20. Il tasso di incidenza dell'ipoparatiroidismo postchirurgico è di circa il 7,6%8,21, mentre l'aumentata morbilità dell'ipoparatiroidismo acquisito ha fatto sì che questa rara malattia ottenesse una maggiore attenzione da parte d.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato supportato dalla sovvenzione NSFC 81800928, dal finanziamento della ricerca della West China School / Hospital of Stomatology Sichuan University (No. RCDWJS2021-1) e dalla sovvenzione di finanziamento aperto del laboratorio chiave statale delle malattie orali SKLOD-R013.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%Kelun Co. Sichuan, Cina
10 &; L 30G NanoFil siringaWPI
6-0 poliglactina 910 sutura con agoEthicon, IncJ510G
Calcium LiquiColor testEKF0155-225Per l'analisi Ca2+
Nanoparticelle di carbonio Sospensione IniezioneLummy, Chongqing, CinaH200732461 mL: 50 mg
di creatinina (Cr) Kit di dosaggio (sarcosina ossidasi)Jiancheng, Nanchino, CinaC011-2-1Per l'analisi della creatinina
Bisturi monousoShinva, Cina
Dumstar Forbici per biologiaShinva, Cina
Forbici a molla per micro dissezioneShinva, Cina
MicroVue Rat intatto PTH ELISAImmunotopics30-2531Per la misurazione del PTH nel siero
di rattoPorta agoShinva, Cina
Fosforo Liqui-UV testEKF0830-125Per analisi Pi
Garza a stratiWeian Co. Henan, Cina
Povidone-IodioYongan Co.Ltd farmaceutico. Chengdu, Cina
Prism 9.0 (statistiche e software grafico)GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USAhttps://www.graphpad.com/scientific-software/prism/
Kit ELISA per C-telopeptide di ratto di collagene di tipo I (CTX-I)CUSABIO, Wuhan, CinaCSB-E12776rPer l'analisi CTX-I
Kit ELISA per osteocalcina di ratto/proteina Gla ossea (OT/BGP)CUSABIO, Wuhan, CinaCSB-E05129rPer l'analisi dell'osteocalcina
Lame di rasoio a filo singolo di sicurezza Rasoiodi sicurezza americano Azienda66-0089
RattiDa 8 a 10 settimane
Tende per incisione chirurgicaLiangyou Co. Sichuan, Cina
Kit per il dosaggio dell'ureaJiancheng, Nanchino, CinaC013-2-1Per l'analisi dell'urea
Sprague-Dawley

Riferimenti

  1. Bilezikian, J. P., et al. Hypoparathyroidism in the adult: Epidemiology, diagnosis, pathophysiology, target-organ involvement, treatment, and challenges for future research. Journal of Bone and Mineral Research. 26 (10), 2317-2337 (2011).
  2. Bilezikian, J. P.

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Ristampe e permessi

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