Chirurgia e test comportamentali nel modello di trasposizione del neuroma tibiale nei ratti

Summary

Questo protocollo descrive il modello di trasposizione del neuroma tibiale, che comporta una lesione del nervo tibiale con successiva trasposizione dell'estremità del nervo prossimale verso una posizione pretibiale o laterale sottocutanea. I test comportamentali del dolore neuromatico e dell'iperalgesia plantare sono quantificati utilizzando i monofilamenti di Von Frey.

Abstract

La trasposizione del neuroma tibiale (TNT) è un modello di ratto in cui l'allodinia nel sito del neuroma (nervo tibiale) può essere valutata indipendentemente dall'allodinia sulla superficie plantare della zampa posteriore innervata dal nervo surale intatto. Questo modello TNT è adatto per testare terapie per il dolore neuroma, come la potenziale superiorità di alcune terapie chirurgiche che sono già utilizzate in clinica, o per valutare nuovi farmaci e il loro effetto su entrambe le modalità di dolore nello stesso animale. In questo modello, una lesione distale (neurotmesi) viene prodotta nel nervo tibiale e l'estremità del nervo prossimale viene trasposta e fissata per via sottocutanea e pretibialmente per consentire valutazioni del sito neuromatico con un monofilamento di Von Frey da 15 g. Per valutare l'allodinia sopra il nervo surale, i monofilamenti di Von Frey possono essere utilizzati tramite il metodo up-down sulla regione laterale plantare della zampa posteriore. Dopo aver tagliato il nervo tibiale, l'ipersensibilità meccanica si sviluppa nel sito del neuroma entro 1 settimana dopo l'intervento chirurgico e persiste almeno fino a 12 settimane dopo l'intervento. L'allodinia sulla superficie plantare innervata surale si sviluppa entro 3 settimane dall'intervento chirurgico rispetto all'arto controlaterale. A 12 settimane, un neuroma si forma sull'estremità prossimale del nervo tibiale reciso, indicato dalla dispersione e dal vortice degli assoni. Per la chirurgia modello TNT, è necessario seguire più passaggi critici (micro) chirurgici e si consiglia una certa pratica chirurgica in anestesia terminale. Rispetto ad altri modelli di dolore neuropatico, come il modello di lesione nervosa risparmiata, l'allodinia sul sito del neuroma può essere testata indipendentemente dall'ipersensibilità del nervo surale nel modello TNT. Tuttavia, il sito del neuroma può essere testato solo nei ratti, non nei topi. I suggerimenti e le indicazioni fornite in questo protocollo possono aiutare i gruppi di ricerca che lavorano sul dolore a implementare con successo il modello TNT nella loro struttura.

Introduction

Ogni ferita, che varia da semplici lacerazioni all'amputazione dell'intero arto, è accompagnata da vari gradi di lesione del nervo periferico. Tale lesione nervosa può provocare la formazione di un neuroma, un intreccio disorganizzato di fibre nervose germoglianti. I neuromi diventano dolorosi nell'8%-30% dei pazienti, influenzando gravemente la loro qualità di vita 1,2,3,4,5. Dopo l'amputazione degli arti, il dolore neuromatico si sviluppa nel 50% dei pazienti

Protocol

Questa ricerca è stata condotta in conformità con l'IVD (Instantie voor Dierenwelzijn Utrecht) e le linee guida per la ricerca sugli animali, numero di progetto AVD1150020198824.

1. Misurazioni della linea di base di Von Frey

1. Prima dell'intervento chirurgico, eseguire misurazioni basali secondo la procedura di test di Von Frey, descritta di seguito nei paragrafi 5 e 6.

2. Anestesia e preparazione

NOTA: Questo studio è stato condotto su 15 ratti maschi di Sprague Dawley di 12 settimane.

1. Anestetizzare gli animali per induzione c....

Results

La valutazione nel sito del neuroma ha mostrato una maggiore sensibilità all'applicazione del monofilamento di von Frey da 15 g. Al basale, i ratti hanno risposto tipicamente al 10% -15% (± 13%) delle 25 applicazioni di un monofilamento da 15 g. Il tasso di risposta è aumentato al 45%-50% (± 24%) 1 settimana dopo l'intervento chirurgico di TNT. Sul lato controlaterale, il numero di risposte dopo l'intervento chirurgico era simile a quello al basale (Figura 2A). Circa il 20% dei ratti non ha .......

Discussion

Passaggi critici nel protocollo
Il modello TNT prevede il taglio del nervo tibiale e la sua trasposizione laterale e sottocutanea in una posizione pretibiale per consentire test di sensibilità del neuroma, oltre all'iperalgesia plantare sul nervo surale. Nel modello TNT, è fondamentale che il posto del neuroma sia visibile ai ricercatori. Pertanto, è preferibile un ceppo di ratto albino perché le suture sottocutanee sono facilmente visibili attraverso la pelle e il colore della sutura dovrebbe preferi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aesthesio	Linton Strumentazione	514007 fino a 514015	0,6 g fino a 15 g monofilamenti Carprofene
	Farmacia veterinaria locale	n/a	La farmacia veterinaria locale produce la diluizione del caprofene
Tamponi di cotone	Nobamed	974255
Elettrocauterizzazione	Fine Science Tools	18010-00
Etanolo 70%	Interchema BV
Ethilon 4.0	Johnson & Johnson	1854G	IMPORTANTE: il colore deve essere blu o nero
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5
Isoflo, isoflurano Zoetis	Dechra Prodotti veterinari	B506
Gabbie inferiori in rete	StoeltingCo	57816 e 57824
Micro pinze	Strumenti di scienza fine	11251-35
Micro porta aghi	Fine Science Tools	12076-12
Micro forbici	Fine Science Tools	15019-10
Micro pinzette	Fine Science Tools	11254-20
NaCl 0.9%	Trademed	H7 1000-FRE
Porta aghi	Fine Science Tools	12004-16
Unguento oftalmico	Farmacia veterinaria locale	n/a	La farmacia veterinaria locale produce l'unguento oftalmico
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
Forbici	Fine Science Tools	14001-12
Stereomicroscopio operatorio	Leica	A60 F
Foglio sterile con foro	Evercare OneMed	1555-01
Lama chirurgica nr.15	Strumenti per le scienze	10015-00
Pinzette	Strumenti per le scienze	11617-12