Articolo metodologico

HPLC accoppiato con impronte digitali chimiche per il riconoscimento multi-pattern per identificare l'autenticità di Clematidis armandii caulis

DOI:

10.3791/64690

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11 novembre 2022

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1School of Pharmacy, The Second Class Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutics, National Administration of Traditional Chinese Medicine, Chengdu Medical College, 2Pengzhou Second People's Hospital

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

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Qui, presentiamo un protocollo per stabilire la cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), accoppiata con il riconoscimento multi-pattern delle impronte digitali chimiche, che fornisce una nuova strategia per identificare efficacemente le varietà autentiche di Clematidis Armandii Caulis e dei suoi adulteranti.

Abstract

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Un metodo per identificare i materiali medicinali cinesi e i relativi adulteranti è stato costruito prendendo come esempio Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, una medicina tradizionale cinese universalmente usata). Dieci lotti di varietà Chuanmutong autentiche e cinque lotti di adulteranti correlati sono stati analizzati e confrontati sulla base delle impronte digitali della cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) combinate con la chemiometria, tra cui l'analisi dei cluster (CA), l'analisi delle componenti principali (PCA) e l'analisi della discriminazione dei minimi quadrati parziali ortogonali (OPLS-DA). Inoltre, è stato determinato il contenuto di β-sitosterolo. È stata stabilita l'impronta chimica di controllo di Chuanmutong e sono stati identificati 12 picchi comuni. La somiglianza tra l'impronta digitale di 10 lotti di varietà Chuanmutong autentiche e l'impronta digitale di controllo era 0,910-0,989, mentre la somiglianza di cinque lotti di adulteranti era solo 0,133-0,720. Sulla base dei picchi comuni nel cromatogramma, 15 lotti di campioni sono stati classificati in tre livelli di contenuto dalla PCA e sono stati aggregati in quattro categorie da CA, ottenendo una chiara distinzione tra Chuanmutong autentico e adulteranti di Chuanmutong. Inoltre, sette componenti differenziali che possono identificare efficacemente l'autentico Chuanmutong e gli adulteranti di Chuanmutong sono stati trovati attraverso OPLS-DA. Il contenuto di β-sitosterolo di 10 lotti di varietà Chuanmutong autentiche era 97,53-161,56 μg / g, mentre il contenuto di β-sitosterolo dei cinque lotti di adulteranti variava notevolmente, tra cui il contenuto di β-sitosterolo di Clematis peterae Hand.-Mazz. e Clematis gouriana Roxb. finetii Rehd. et Wils. era significativamente inferiore a quello delle varietà autentiche di Chuanmutong. Il contenuto dei componenti dell'indice HPLC e il metodo di riconoscimento multi-pattern delle impronte digitali chimiche stabilito in questo studio forniscono una nuova strategia per identificare efficacemente i materiali medicinali cinesi autentici e i relativi adulteranti.

Introduzione

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Chuanmutong, Caulis secco di Clematis armandii Franch. o Clematis montana Buch.-Ham., è una medicina tradizionale cinese comunemente usata nelle cliniche 1,2,3. È usato per il trattamento di problemi urinari, edema, piaghe sulla lingua e sulla bocca, diminuzione della secrezione di latte, rigidità articolare e dolori muscolari causati dal calore umido4. Chuanmutong è sempre stato ottenuto da varietà selvatiche, distribuite principalmente nel sud-ovest della Cina, in particolare nel Sichuan, dove la migliore qualità può essere trovata<....

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Protocollo

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1. Metodi per il rilevamento chimico delle impronte digitali

  1. Condizioni cromatografiche
    1. Preparare la fase mobile acetonitrile (A)/acqua (B). Impostare un programma di gradiente come segue nel software HPLC: 0-20 min, 3% A-10% A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
    2. Mantenere la portata della fase mobile a 1,0 ml/min.
    3. Effettuare la separazione cromatografica su una colonna C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) mantenuta a 30 °C.
    4. Impostare il volume di iniezione su 10 μL.
    5. Rilevare i campioni a una lunghezza d'onda di 205 nm.
      NOTA: ....

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Risultati

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Impronta digitale cromatografica di Chuanmutong e analisi di similarità (SA)
I valori RSD del tempo di ritenzione relativo di precisione, ripetibilità e stabilità erano inferiori rispettivamente allo 0,46%, 1,65% e 0,53%; i valori RSD dell'area di picco relativa erano inferiori rispettivamente al 4,23%, 3,56% e 3,96%. Come mostrato nelle figure 1A,B, c'erano 12 distinti picchi comuni (dal picco 1 al picco 12) nelle impronte digitali HPLC nei 10 campioni autentici di Chuan.......

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Discussione

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La raccolta di campioni per la ricerca è il primo passo chiave per costruire il riconoscimento multi-pattern nell'identificazione dell'autenticità dei materiali medicinali cinesi. Attraverso ricerche di mercato, abbiamo scoperto che Sichuan Ya'an, Liangshan e Leshan sono le principali aree di produzione delle risorse selvatiche di Chuanmutong. Anche le varietà affini dello stesso genere hanno la stessa distribuzione geografica 6,20; CC, DC, DE, XS e SMT sono spes.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto della Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (n. 2020JC0088, n. 2021MS203).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Acido aceticoZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Cina2017381038
AcetonitrileSigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghai, CinaWXBD5243V
β-SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Cina20210201
  Colonna C18Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, CinaWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, Cina...19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina200901CMT-7
ChuanmutongWusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, Cina201201CMT-8
ChuanmutongLimin pezzi di erbe cinesi Co., Ltd., Sichuan, Cina201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Cina210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Bridge, comune di Sanlang, contea di Tianquan, Sichuan, Cina...-CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Villaggio di Heilin, municipalità di Qiliping, contea di Hongya, Sichuan, Cina-DC
Clematis peterae Hand.-Mazz.Villaggio di Huangmu, municipalità di Huangmu, contea di Hanyuan, Sichuan, Cina-DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Mountain, Huangwan Township, Contea di Emei, Sichuan, Cina -XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Villaggio di Wannian, municipalità di Huangwan, contea di Emei, Sichuan, Cina-Bilancia elettronica SMT
Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,  Cina FA1204
ErgosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Cina20210201
EthanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Cina2021112602
Acetato di etileZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Cina2017042043
acido formicoKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Cina2016062901
Cromatografia liquida ad alte prestazioniAgilent, USA.1260
IBM SPSS Statistics versione 26.0International Business Machines Corporation, USA-Metanolo
Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghai, CinaWXBD6409V
MethanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Cina202010302
alcool n-butilicoZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Cina2020071047
Etere di petrolioZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Cina2020090125
Acido fosforicoComeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Cina20200110
SESCF-TCM versione 2012Commissione della farmacopea nazionale,Cina-http://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Cina20210201
TrichloromethaneSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, Cina20200214
Umetrics versione SIMCA 14.1.0.2047Umetrics, Svezia-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
Macchina per acqua ultrapuraYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, CinaUPH-II-10T
Pulitore ad ultrasuoniKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, CinaKH3200E

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....

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