Il presente studio dimostra un modello animale altamente riproducibile di ischemia miocardica regionale acuta e danno da riperfusione nei conigli utilizzando una mini-toracotomia sinistra per i casi di sopravvivenza o una sternotomia della linea mediana per i casi di non sopravvivenza.
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Articolo metodologico
Modello di danno da ischemia e riperfusione nei conigli
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il protocollo fornisce una metodologia semplice e altamente replicabile per indurre in situ l'ischemia miocardica regionale acuta nel coniglio per esperimenti di non sopravvivenza e sopravvivenza. Il coniglio bianco adulto della Nuova Zelanda viene sedato con atropina, acepromazina, butorfanolo e isoflurano. L'animale viene intubato e posto in ventilazione meccanica. Un catetere endovenoso viene inserito nella vena marginale dell'orecchio per l'infusione di farmaci. L'animale viene pre-medicato con eparina, lidocaina e soluzione di Ringer lattato. Viene eseguita una riduzione della carotide per ottenere l'accesso alla linea arteriosa per il monitoraggio della pressione arteriosa. I parametri fisiologici e meccanici selezionati vengono monitorati e registrati da un'analisi continua in tempo reale.
Con l'animale sedato e completamente anestetizzato, viene eseguita una toracotomia sinistra del quarto spazio intercostale (sopravvivenza) o una sternotomia della linea mediana (non sopravvivenza). Il pericardio viene aperto e si trova l'arteria discendente anteriore sinistra (LAD).
Una sutura in polipropilene viene fatta passare attorno al secondo o terzo ramo diagonale dell'arteria LAD e il filamento di polipropilene viene infilato attraverso un piccolo tubo di vinile, formando un laccio. L'animale viene sottoposto a 30 minuti di ischemia regionale, ottenuta occludendo il LAD stringendo il laccio. L'ischemia miocardica è confermata visivamente dalla cianosi regionale dell'epicardio. A seguito di un'ischemia regionale, la legatura viene allentata e il cuore può ripercepirsi.
Sia per gli esperimenti di sopravvivenza che per quelli di non sopravvivenza, la funzione miocardica può essere valutata tramite una misurazione ecocardiografica (ECHO) dell'accorciamento frazionario. Per gli studi di non sopravvivenza, i dati della sonomicrometria raccolti utilizzando tre sonde a ultrasuoni piezoelettriche digitali impiantate all'interno dell'area ischemica e della pressione sviluppata dal ventricolo sinistro (LVDP) utilizzando un catetere del ventricolo sinistro inserito apicamente (LV) possono essere acquisiti in modo continuo per valutare rispettivamente la funzione miocardica regionale e globale.
Per gli studi di sopravvivenza, l'incisione viene chiusa, viene eseguita una toracentesi con ago sinistro per l'evacuazione dell'aria pleurica e si ottiene il controllo del dolore postoperatorio.
Introduzione
Le malattie cardiovascolari sono la principale causa di morte nel mondo e contribuiscono a oltre 18 milioni di decessi ogni anno 1,2,3. L'infarto miocardico acuto (IM) è un'emergenza medica comune che si sviluppa quando un coagulo di sangue o un pezzo di placca ateromatosa blocca il flusso sanguigno di un'arteria coronaria. Ciò provoca ischemia miocardica regionale nel territorio in cui l'arteria perfue.
Il presente studio descrive un protocollo che utilizza una metodologia semplice e affidabile per creare un'ischemia miocardica regionale acuta in ....
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Protocollo
Questa indagine è stata condotta secondo le linee guida del National Institutes of Health sulla cura e l'uso degli animali ed è stata approvata dal Comitato per la cura e l'uso degli animali del Boston Children's Hospital (Protocollo 20-08-4247R). Tutti gli animali hanno ricevuto cure umane in conformità con la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.
1. Specie animali, agenti anestetici e analgesici
- Specie animali: utilizzare conigli bianchi della Nuova Zelanda (ceppo selvatico; sesso femminile; sessualmente maturo 15-20 settimane; 3-4 kg di peso corporeo) per studi sperimentali.
- Agenti a....
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Risultati
Seguendo il protocollo (Figura 1), l'ischemia miocardica è stata confermata immediatamente dalla visualizzazione diretta della cianosi dell'epicardio.
Gli ECG standard (tre derivazioni degli arti: I, II e III e tre derivazioni aumentate calcolate: aVL, aVR e aVF) sono stati registrati continuamente prima dell'ischemia, durante l'ischemia e durante la riperfusione (Figura 2). Gli ECG dimostrano tachicardia, aritmie (cioè fibrillazione .......
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Discussione
Il nostro protocollo dimostra una metodologia affidabile per l'esecuzione dell'ischemia miocardica regionale acuta nel coniglio. L'approccio della mini-toracotomia sinistra è ideale per i casi di sopravvivenza, per i quali l'incisione e il dolore associato devono essere ridotti al minimo. È importante sottolineare che la terapia diuretica non era necessaria prima dell'estubazione e non c'è stata mortalità intraoperatoria nel gruppo non di sopravvivenza o a 4 settimane dopo l'intervento nel gruppo di sopravvivenza. Quando.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi, finanziario o di altro tipo, è dichiarato dagli autori.
Ringraziamenti
Lo studio originale in cui è stato utilizzato questo protocollo è stato supportato dalle sovvenzioni HL-103642 e HL-088206 del National Heart, Lung, and Blood Institute
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| #10 lama | Bard Parker | 371210 | |
| #11 lama | Fisher Scientific | B3L | |
| 22 G ago PIV | BD Insyte | 381423 | |
| Acepromazina | VETONE | NDC 13985-587-50 | 0,5 mg/kg IM e IV |
| Aline sacchetto a pressione | Infu-Stat | 2139 | |
| Angiocath | Becton Dickinson | 382512 | |
| Catetere arterioso | Teleflex | MC-004912 | |
| Atropina | Hikma Pharmaceuticals | NDC 0641-6006-01 | 0,01 mg/kg IM |
| Betadina e alcool isopropilico al 70% | McKesson | NDC 68599-2302-6 | |
| Macchina per gas ematici | Siemens | MRK0025 | |
| Bovie | Valleylab | E6008 | |
| Bulldog clamps | World Precision Instruments | 14119 | |
| Bupivacaina | Auromedica | NDC 55150-249-50 | 3 mg/kg |
| IM Butorphanol | Roxane | NDC 2054-3090-36 | 0,5 mg/kg IM |
| Foglio di acetato trasparente | Oxford Instruments | ID 51-1625-0213 | |
| Clipers | Andis | AGC2 | |
| DeBakey pinze | Integra | P6280 | |
| Macchina per ecocardiografia | Philips | IE33 F1 | |
| Macchina per elettrocardiografia | Meditech | MD908B | |
| Tubo endotracheale | Medline | #922774 | |
| Fentanyl | West-Ward | NDC 0641-6030-01 | 1– 4 µ g/kg cerotto transdermico |
| Soluzione di formaldeide 10% | Epredia | 94001 | |
| Lastre di vetro | United Scientific | B01MUHX6MR | |
| sodio eparina | NDC 69-0058-02 | 1000U in 1 mL 3 mg/kg | |
| Coperta di acqua calda | 3M | 55577 | |
| Isoflurane | Penn Veterinary Supply, INC | NDC 50989-606-15 | 1%– 3% |
| Ketamina | Dechra | NDC 42023-138-10 | 10 mg/kg IV |
| Lab Chart 7 Software di acquisizione | Adinstruments | ||
| Soluzione di Ringer lattato | ICUmedical | NDC 0990-7953-09 | 10 mL/kg/h |
| Laringoscopio | Welch Allyn | 68044 | |
| Catetere del lume del ventricolo sinistro 3Fr | McKesson | 385764-EA | |
| Lidocaina (1%) | Pfizer | 4276-01 | 1– Trasduttore LVDP IV da 1,5 mL/kg |
| Edward | PDP-ED | ||
| Pennarello | Viscot | 1451SR-100 Forbici Mayo non sterili | |
| Mayo | S7-1098 | ||
| Medetomidina | Entirely Pets Farmacia | NDC 015914-005-01 | 0,25 mg/kg Forbici IM |
| Metzenbaum | Cole-Parmer | UX-10821-05 | |
| Monastra. Pigmento blu 98% | Chemsavers | MBTR1100G | |
| Monocryl 5-0 | Ethicon | Y463G | |
| Morsetto per zanzare | Shioda | 802N | |
| PDS 3-0 | Ethicon | 42312201 | |
| Cristalli piezoelettrici per sonomicrometria | Sonometrics | Small 2mm rotondo | |
| Plegets | DeRoyal | 32-363 | |
| Povuine Iodine Prep Solutions | Medline | MDS093940 | |
| Maschera facciale con sistema vaporizzato di precisione | Yuwell | B07PNH69BF | |
| Prolene 3-0 | Ethicon | 8665G | |
| Proline 5-0 | Ethicon | 8661G | |
| Sonda per pulsossimetria | Masimo | 9216-U | |
| Divaricatore per costole | Medline | MDS5621025 | |
| S12 Sonda Settore Pediatrico | Phillips | 21380A | |
| Sonomicrometro | Sonometria | BZ10123724 | |
| Garza sterile | Medline | 3.00802E+13 | |
| Asciugamani sterili | McKesson | MON 277860EA | |
| Divaricatore sternale | Medline | MDS5610321 | |
| Suture per chiusura | J& J Dental | 8698G | |
| Monitor telemetrico | Meditech | MD908B | |
| Sonda di temperatura | Omega | KHSS-116G-RSC-12 | |
| Trifenil tetrazolio cloruro (1%) | Millipore | MFCD00011963 | |
| Ventilatore | MedGroup | MSLGA 11 | |
| Vicryl 2-0 | Ethicon | V635H | |
| Vinile tubo | ABE | DISW 3001 |
Riferimenti
- Selvin, E., Erlinger, T. P. Prevalence of and risk factors for peripheral arterial disease in the United States: Results from the National Health and Nutrition Examination Survey, 1999-2000. Circulation. 110 (6), 738-743 (2004).
- Bolli, R., et al.
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Ristampe e permessi
