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Tutte le procedure sperimentali sono state esaminate e approvate dall'Institutional Review Board dell'Ospedale Bundang dell'Università Nazionale di Seoul. Per gli esperimenti in questo studio, sono stati reclutati 34 partecipanti con ictus. È stato ottenuto il consenso informato firmato da tutti i partecipanti. Un consenso informato firmato è stato ottenuto da un rappresentante legale se un partecipante soddisfaceva i criteri ma non poteva firmare il modulo di consenso a causa della disabilità.
1. Configurazione sperimentale
- Reclutamento dei pazienti
- Eseguire il processo di screening utilizzando i seguenti criteri di inclusione:
Età compresa tra 18 e 85 anni con presenza di compromissione delle funzioni dell'arto superiore;
Primo ictus ischemico o emorragico confermato dalla tomografia computerizzata cerebrale o dalla risonanza magnetica;
Capacità del partecipante di seguire le istruzioni per la valutazione clinica e lo studio EEG;
Assenza di una storia di altre malattie psichiatriche o neurologiche ad eccezione dell'ictus.
- Escludi i pazienti in base a quanto segue:
Malattie pregresse che coinvolgono il sistema nervoso centrale (ad es. trauma cranico, tumore cerebrale, morbo di Parkinson);
Impossibilità di indossare la cuffia EEG; e
Incapacità di seguire le istruzioni per la valutazione clinica e lo studio EEG.
NOTA: I criteri di inclusione ed esclusione sono stati scelti per selezionare i partecipanti in grado di partecipare all'esperimento e per regolare i fattori demografici che potrebbero influenzare i risultati.
- Fornire a tutti i partecipanti reclutati informazioni sui dettagli della procedura sperimentale.
- Sistema sperimentale: EEG
- Utilizzare un sistema EEG composto da 32 elettrodi Ag/AgCl per il cuoio capelluto, una cuffia EEG tessile e un software di registrazione EEG per la registrazione dei dati.
- Utilizzare un personal computer (PC) con installato il software di registrazione EEG e collegare il PC al dispositivo EEG tramite Bluetooth.
- Utilizzare un altro PC con un software di analisi numerica e programmazione per l'ingegneria (vedi Tabella dei materiali).
- Per la presentazione degli stimoli, collegare il PC a una trigger box dedicata (Figura 1).
NOTA: Le specifiche dettagliate dei due PC sono fornite nell'Indice dei materiali.
- Paradigma sperimentale basato su software di programmazione
NOTA: I partecipanti hanno eseguito un compito di estensione della mano utilizzando le mani interessate e non affette, durante il quale sono stati misurati i dati EEG. La Figura 2 mostra il paradigma sperimentale di questo studio.- Presentare due stimoli visivi, CLOSE e OPEN, per 30 s ciascuno, al centro di un monitor per misurare i dati EEG dello stato di riposo al basale, durante i quali il partecipante chiude e apre gli occhi.
NOTA: Poiché i dati EEG in stato di riposo sono relativamente meno contaminati da artefatti fisiologici indesiderati, sono utili per verificare la qualità dei dati EEG e identificare le caratteristiche individuali dell'EEG rispetto allo stato di riposo.
- Presentare un'immagine in movimento della mano per 3 secondi per istruire il partecipante a fare un movimento di estensione della mano, seguito da un segno di fissazione per 5 secondi per riposare.
NOTA: Questa procedura è stata considerata come una prova ed è stata ripetuta 10 volte in una singola sessione. Ogni partecipante si è sottoposto a 4 sessioni per ogni mano. Il partecipante ha avuto una pausa ogni volta che voleva dopo aver eseguito ogni sessione per evitare un eccessivo affaticamento.

Figura 1: Schema della configurazione dell'apparecchiatura. Un PC (PC1) che presentava stimoli sperimentali era collegato a una scatola di innesco, e un altro PC (PC2) era collegato a un amplificatore EEG. Gli eventi di stimolazione generati in PC1 sono stati inviati all'amplificatore EEG tramite la trigger box collegata a PC1. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2: Paradigma sperimentale utilizzato in questo studio. Una singola prova consisteva in un movimento di estensione della mano di 3 secondi seguito da un rilassamento di 5 secondi. Questo schema è stato ripetuto 10 volte in una singola sessione. In totale sono state eseguite otto sessioni; Quattro sessioni hanno coinvolto il movimento della mano interessato, mentre le altre quattro hanno coinvolto il movimento della mano non influenzato. Questa figura è stata adattata da Shim et al.17 con il permesso di Mary Ann Liebert, Inc. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
2. Registrazione dei dati EEG relativi al movimento
- Impostazione EEG
- Far sedere il partecipante su una comoda poltrona davanti a un monitor.
NOTA: La distanza tra il partecipante e il monitor deve essere di almeno 60 cm per evitare l'affaticamento degli occhi. Tuttavia, una distanza eccessiva dovrebbe essere evitata (ad esempio, >150 cm) perché potrebbe distrarre la concentrazione del partecipante.
- Per indossare con precisione la cuffia per la misurazione EEG, definire la posizione Cz in base al sistema internazionale 10-20 utilizzando l'intersezione della linea longitudinale che collega il nasion e l'inion e la linea trasversale che collega la parte superiore di entrambi i padiglioni auricolari.
NOTA: A seconda dell'apparecchiatura di misurazione EEG, potrebbe non essere necessaria una cuffia EEG. In tal caso, gli elettrodi EEG sono direttamente attaccati al cuoio capelluto secondo il sistema internazionale 10-2015.
- Per una misurazione EEG accurata, utilizzare una cuffia EEG di dimensioni adeguate in base alle dimensioni della testa del partecipante e posizionarla in modo che la posizione dell'elettrodo Cz sia posizionata sulla posizione individuale Cz.
- Fissare il sottogola con una tenuta adeguata; Ciò impedirà al partecipante di sentirsi a disagio durante la deglutizione e il battito delle palpebre nell'esperimento. Successivamente, verificare che le posizioni degli elettrodi T9 e T10 del cappuccio EEG si trovino nella regione temporale sopra entrambi i padiglioni auricolari e che la posizione dell'elettrodo Fpz del cappuccio EEG si trovi al centro della fronte.
NOTA: Se questi elettrodi si trovano fuori dalla posizione designata, prendere in considerazione la possibilità di cambiare il cappuccio. Nel nostro studio sono state utilizzate tre misure di cappuccio EEG (54 cm: piccolo, 56 cm: medio, 58 cm: grande).
- Dopo aver posizionato correttamente la cuffia EEG, collegare gli elettrodi per cuoio capelluto 32 Ag/AgCl sul cuoio capelluto secondo il sistema internazionale esteso 10-10, con gli elettrodi di terra e di riferimento rispettivamente a Fpz e FCz16.
NOTA: La posizione dell'elettrodo di riferimento (FCz) è relativamente meno influenzata da vari artefatti fisiologici, come quelli dell'elettrooculografia, dell'elettromiografia e dell'elettrocardiografia, perché si trova intorno all'area centrale (Cz) del cuoio capelluto.
- Regolare il livello di impedenza tra gli elettrodi EEG e il cuoio capelluto utilizzando un gel conduttivo e fissare i capelli con il gel per evitare qualsiasi ostruzione tra gli elettrodi EEG e il cuoio capelluto.
NOTA: È importante verificare se si crea un ponte tra elettrodi EEG adiacenti a causa di una perdita di gel.
- Utilizzare il software per la registrazione EEG.
- Accendere il sistema EEG ed eseguire Configurazione > Seleziona amplificatore. Scegli Liveamp > > amplificatore > connettiti. Cercare Liveamp funzione per la connessione wireless (Figura 3).
- Eseguire la funzione di controllo dell'impedenza per monitorare il livello di impedenza per ciascun elettrodo.
NOTA: Si consiglia di condurre l'esperimento con un livello di impedenza di <20 KΩ (Figura 4).
- Eseguire la funzione di monitoraggio per confermare se gli EEG di tutti gli elettrodi hanno livelli di ampiezza simili attraverso il monitoraggio del segnale EEG in tempo reale (Figura 5).
NOTA: L'ampiezza del segnale EEG è generalmente compresa tra 10 μV e 100 μV e la potenza alfa (8-12 Hz) aumenta intorno all'area occipitale quando gli occhi sono chiusi. Pertanto, la qualità dei dati EEG può essere confermata qualitativamente monitorando il livello di ampiezza e le oscillazioni alfa sui canali intorno all'area occipitale mentre gli occhi sono chiusi.
- Impostazione del paradigma
- Per un'acquisizione stabile dei dati EEG, utilizzare due PC separati per la presentazione di stimoli esterni e la registrazione dei dati EEG (vedere la Figura 1).
- Per presentare gli stimoli sperimentali ai partecipanti, creare un programma di stimolazione basato sul paradigma sperimentale utilizzando un software di programmazione (introdotto nel passaggio 1.3).
NOTA: In questo studio è stato creato un programma di stimolazione basato su software, ma è possibile utilizzare altri software a seconda della loro compatibilità con l'apparecchiatura EEG utilizzata per l'esperimento e della comodità dell'utente. Lo script di stimolo basato su software di programmazione è fornito nel file supplementare 1 (Experimental_stimulus.m). Le informazioni sull'evento, che indicano il punto di insorgenza degli stimoli, vengono generate dal software di programmazione interno, trasmesse all'amplificatore EEG tramite la trigger box e, infine, al software di registrazione EEG (Figura 1).
- Eseguire il programma presentando gli stimoli sperimentali in modalità di monitoraggio (fare riferimento al sub step 2.1.10). Successivamente, verificare che le informazioni sull'evento siano contrassegnate correttamente e in modo tempestivo nella parte inferiore del software di registrazione EEG ogni volta che viene presentato uno stimolo, come mostrato nella Figura 6.
NOTA: Le informazioni sul punto temporale vengono registrate ogni volta che viene presentato un nuovo stimolo e vengono successivamente utilizzate per la segmentazione dei dati. Pertanto, è importante ottenere il più possibile i punti temporali esatti degli eventi sperimentali per evitare una segmentazione imprecisa dei dati, che porterebbe a risultati inaffidabili nell'analisi.
- Avviare il software di registrazione EEG, quindi eseguire in modo indipendente il programma di presentazione dello stimolo sviluppato in base al paradigma sperimentale utilizzando un software di programmazione per prevenire l'omissione dei dati.
NOTA: Per comodità di analisi dei dati, si consiglia di creare nomi di file con una regola coerente per l'archiviazione dei dati (ad esempio, Sub1_Session1).
- Registrazione EEG
- Misurare l'EEG ad una frequenza di campionamento di 1.000 Hz seguendo il paradigma sperimentale introdotto nella fase 1.3.
NOTA: La frequenza di campionamento può essere modificata a seconda dell'intervallo di frequenze EEG che il ricercatore desidera indagare. Si consiglia generalmente di utilizzare una frequenza di campionamento di >200 Hz in cui le informazioni EEG possono essere indagate a ≤100 Hz in base al teorema di Nyquist. Questo perché la maggior parte delle informazioni EEG esiste al di sotto dei 100 Hz.
- Mantenere il più possibile gli stessi ambienti sperimentali (ad esempio, luogo sperimentale, apparecchiature, temperatura ambiente, ecc.) tra i partecipanti e istruirli a ridurre al minimo i movimenti non necessari durante la misurazione EEG.

Figura 3: Procedura di connessione wireless tra un amplificatore EEG e il PC con il software di registrazione EEG. Seguire i passaggi nell'ordine: (A) selezionare l'amplificatore, (B) collegare l'amplificatore, (C) cercare l'amplificatore collegato per la connessione wireless, (D) connessione completata. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 4: Procedura di controllo dell'impedenza per ogni canale. Tutti i canali devono essere regolati sul colore verde per una misurazione EEG stabile. Si consiglia di condurre l'esperimento con un'impedenza inferiore a 20 KΩ. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 5: Procedura di monitoraggio dei dati in tempo reale per ciascun canale. I segnali provenienti da tutti i canali misurati possono essere monitorati in tempo reale e possono essere ingranditi/rimpiccioliti utilizzando l'opzione (riquadro rosso) sulla barra superiore. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 6: Screenshot per il monitoraggio delle informazioni sugli eventi. Le barre rosse indicano i creatori di eventi che vengono presentati ogni volta che uno stimolo viene fornito da PC1. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
3. Analisi dei dati EEG
NOTA: Questo studio fornisce linee guida precise per replicare il concetto di ricerca. Pertanto, fornisce una breve descrizione del processo di analisi e dei risultati rappresentativi. I processi dettagliati e i relativi risultati sono riportati in uno studio precedente17. Ciò indica che Mary Ann Liebert, Inc. ha concesso l'autorizzazione per l'uso di materiale protetto da copyright.
- Preelaborazione
- Rimuovere gli artefatti oculari dai dati EEG grezzi utilizzando procedure matematiche basate sull'analisi delle componenti principali implementate nel software di pre-elaborazione dei dati EEG18,19 (vedere la tabella dei materiali).
NOTA: Se un'epoca mostrava artefatti prominenti (± 100 μV), anche dopo la pre-elaborazione in uno qualsiasi degli elettrodi, veniva esclusa da ulteriori analisi. Il numero medio di epoche rifiutate, inclusa la loro deviazione standard, è stato di 3,69 ± 7,15 per il compito di movimento della mano interessato e di 1,62 ± 3,95 per il compito di movimento della mano non interessato.
- Applicare un filtro passa-banda compreso tra 0,1 Hz e 55 Hz. Segmentare i dati EEG pre-elaborati da -1 s a 3,5 s per ogni prova in base all'insorgenza dell'attività per contenere il periodo di riferimento utilizzato per le perturbazioni spettrali correlate agli eventi (ERSP) e le analisi delle reti funzionali.
- Analisi ERSP
NOTA: I dati EEG misurati sono stati convalidati tramite analisi ERSP per una banda di frequenza low-beta (12-20 Hz) associata a movimenti volontari.- Condurre una trasformata di Fourier a breve termine per ogni prova per calcolare le potenze spettrali EEG, per la quale è stata utilizzata la funzione newtimef del toolbox EEGLAB nel software di programmazione 20 (una finestra di Hanning non sovrapposta, dimensione della finestra di250 ms).
- Normalizzare lo spettro di potenza di ogni prova sottraendo la potenza media del periodo basale (da -1 a 0 s) per studiare le variazioni dei poteri spettrali tra l'attività di movimento della mano e il periodo di base.
- Stimare le mappe ERSP normalizzate al basale per ciascun paziente calcolando la media degli spettri di potenza normalizzati tra gli studi.
- Analisi funzionale della rete
NOTA: È stata condotta un'analisi della rete funzionale per studiare i cambiamenti EEG dal punto di vista della rete cerebrale. Per calcolare gli indici ponderati della rete dell'intero cervello basati sulla teoria dei grafi, la connettività cerebrale tra diverse regioni è stata calcolata prima utilizzando il valore di blocco di fase (PLV). È stata quindi calcolata una matrice di connettività funzionale utilizzando i risultati dell'analisi di connettività basata su PLV, che è stata successivamente utilizzata per calcolare gli indici di rete dell'intero cervello17. Tutte le analisi funzionali della rete sono state eseguite utilizzando il software di programmazione.- Calcolare il valore di blocco di fase (PLV) basato sulla trasformata di Hilbert per una banda di frequenza a basso beta (12-20 Hz) utilizzando una funzione interna21,22. La funzione interna per il calcolo del PLV basato su trasformata di Hilbert è disponibile nel file supplementare 2 (myPLV.m).
- Valutare i PLV tra tutte le possibili coppie dei 32 elettrodi EEG in ogni momento durante i periodi di attività (0-3,5 s) e creare una matrice di adiacenza simmetrica (32 x 32, numero di elettrodi = 32) calcolando la media dei PLV nel periodo di attività. Utilizzare la matrice PLV come dati di input per l'analisi della rete17,23.
- Valuta quattro indici di rete ponderati a livello globale basati sulla teoria dei grafi utilizzando il Brain Connectivity Toolbox (https://sites.google.com/site/bctnet): (1) forza, (2) coefficiente di clustering, (3) lunghezza del percorso e (4) piccolezza 17,24,25.