È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Tomografia a coerenza ottica guidata da immagini per valutare i cambiamenti strutturali nelle retine dei roditori

943 visualizzazioni

⸱

DOI:

10.3791/64783

⸱

10 febbraio 2023

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Il protocollo qui presentato descrive in dettaglio le procedure di raccolta e analisi dei dati per la tomografia a coerenza ottica guidata da immagini (OCT) e dimostra la sua applicazione in più modelli di roditori di malattie oculari.

Abstract

Le malattie oculari, come la degenerazione maculare legata all'età, il glaucoma, la retinite pigmentosa e l'uveite, sono sempre accompagnate da cambiamenti strutturali della retina. Queste malattie che colpiscono il fondo oculare mostrano sempre anomalie tipiche in alcuni tipi di cellule della retina, comprese le cellule dei fotorecettori, le cellule gangliari retiniche, le cellule dei vasi sanguigni retinici e le cellule delle cellule vascolari coroideali. Tecniche di imaging non invasive, altamente efficienti e adattabili sono necessarie sia per la pratica clinica che per la ricerca di base. La tomografia a coerenza ottica guidata da immagini (OCT) soddisfa questi requisiti perché combina la fotografia del fondo oculare e l'OCT ad alta risoluzione, fornendo una diagnosi accurata di piccole lesioni e importanti cambiamenti nell'architettura retinica. Questo studio descrive in dettaglio le procedure di raccolta e analisi dei dati per l'OCT guidato da immagini e dimostra la sua applicazione in modelli di roditori di neovascolarizzazione coroideale (CNV), schiacciamento del nervo ottico (ONC), degenerazione retinica indotta dalla luce e uveite autoimmune sperimentale (EAU). Questa tecnica aiuta i ricercatori nel campo degli occhi a identificare i cambiamenti strutturali della retina dei roditori in modo conveniente, affidabile e trattabile.

Introduzione

Le malattie oculari che colpiscono il fondo oculare mostrano sempre anomalie tipiche in alcuni tipi di cellule della retina, come le cellule fotorecettoriali, le cellule gangliari retiniche, le cellule dei vasi sanguigni retinici e le cellule dei vasi sanguigni coroideali, che possono successivamente influenzare l'acuità visiva dei pazienti1. Per evitare una disabilità visiva irreversibile, sono necessarie diagnosi tempestive e trattamenti appropriati1. La tomografia a coerenza ottica (OCT) è stata ampiamente utilizzata in clinica per valutare una serie di malattie oculari, tra cui la de....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

Tutte le procedure sugli animali sono conformi alla dichiarazione dell'Associazione per la Ricerca sulla Visione e l'Oftalmologia sull'Uso degli Animali nella Ricerca Oftalmica e Visiva e sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali dell'Università di Medicina di Wenzhou (WMU). Ai ratti e ai topi è stato dato libero accesso all'acqua e al cibo con un'intensità di luce ambientale di 18 lux su un ciclo buio/luce di 12 ore.

1. Preparazione dei modelli animali oculari

  1. Modello di neovascolarizzazione coroideale (CNV) indotta da laser di topo

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

L'OCT guidato da immagini può essere utilizzato per monitorare lo sviluppo dello spot laser nella neovascolarizzazione coroideale (CNV) indotta da laser nei topi. Come mostrato nella Figura 1, i vasi sanguigni neonati sono passati attraverso la membrana di Bruch e lo strato di epitelio pigmentato retinico (RPE) e hanno formato una cicatrice fibrotica dopo una lesione laser11,12. Questo punto della lesione può essere catturato sia con.......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

Questo protocollo fornisce istruzioni per la raccolta delle immagini e la misurazione dello spessore degli OCT guidati da immagini. Dimostrando i quattro modelli di roditori più popolari di malattie oculari, i ricercatori hanno scoperto che l'OCT guidato da immagini ha fornito prestazioni eccellenti nell'esame di drastiche alterazioni strutturali della retina. Infatti, con le immagini ad alta risoluzione, le piccole lesioni possono essere trovate facilmente anche nelle immagini OCT. Con .......

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

Nessuno degli autori ha conflitti di interesse da rivelare.

Ringraziamenti

Gli autori ringraziano i membri dello State Key Laboratory of Ophthalmology, Optometry, and Vision Science per il loro supporto tecnico e gli utili commenti riguardanti il manoscritto. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (82101169, 81800857, 81870690), della Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (LGD22H120001, LTGD23H120001, LTGC23H120001), del Programma dell'Ufficio cinese per la scienza e la tecnologia di Wenzhou (Y20211159), del Guizhou Science and Technology Support Project (Qiankehezhicheng [2020] 4Y146) e del Progetto del Laboratorio chiave statale d....

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
BALB/c topoBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., LtdPreparazioni di modelli animali
C57BL/6JNifdc mouseBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., LtdPreparazioni di modelli animali
Carbomer Eye GelFabrik GmbH Filiale di Bausch & LombInumidisce la cornea
Completa Freund' s coadiuvanteSigma EsperimentoF5881
Piattaforma sperimentalePhoenix Technology GroupPreparazioni di modelli animali
hIRBP161-180Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Servizi Co., Ltd.Esperimento EAU
KetaminaCeva Sante Animale Anestesiagenerale
Scatola laserHaag-Streit GroupMerilas 532αPreparazioni di modelli animali
Lewis ratBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., LtdPreparazioni di modelli animali
Mycobacterium Tuberculosis H37RASigma Esperimento EAU344289
Phoneix Micron IV con OCT guidato da immagini e laser guidato da immaginiPhoenix Technology GroupPreparazioni di modelli animali
Pinze per tessutiSuzhou Mingren Medical Instrument Co., LtdMR-F101A-5Preparazioni per modelli animali
Tropicamide Fenilefrina CollirioSANTEN OY, GiapponeDilatazione oculare
ForbiciVannasSuzhou Mingren Medical Instrument Co., LtdMR-S121APreparazioni per modelli animali
XilazinaCeva Sante Animale Anestesiagenerale
EAU

Riferimenti

  1. Cen, L. -P., et al. Automatic detection of 39 fundus diseases and conditions in retinal photographs using deep neural networks. Nature Communications. 12, 4828(2021).
  2. Kashani, A. H., et al.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Tag

Cambiamenti Strutturali RetiniciImaging della Retina di RodentiFotografia del Fondo OculareNeovascolarizzazione CoroidaleSchiacciamento del Nervo OtticoDegenerazione RetinicaUveite AutoimmuneCellule FotorecettriciCellule Gangliari della Retina

Questo articolo è stato pubblicato

Video in arrivo