In questo studio, un modello di ratto di induzione della parodontite è presentato attraverso una combinazione di legatura ritentiva e iniezioni ripetitive di lipopolisaccaride derivato da Porphyromonas gingivalis, per 14 giorni intorno ai primi molari mascellari. Le tecniche di legatura e iniezione di LPS sono state efficaci nell'indurre la peridontite, con conseguente perdita ossea alveolare e infiammazione.
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Articolo metodologico
Induzione della parodontite attraverso una combinazione di legatura e iniezione di lipopolisaccaridi in un modello di ratto
In questo articolo
Sommario
Abstract
La parodontite (PD) è una malattia immuno-infiammatoria cronica altamente prevalente del parodonto, che provoca una perdita dei tessuti molli gengivali, del legamento parodontale, del cemento e dell'osso alveolare. In questo studio, viene descritto un semplice metodo di induzione del PD nei ratti. Forniamo istruzioni dettagliate per il posizionamento del modello di legatura attorno ai primi molari mascellari (M1) e una combinazione di iniezioni di lipopolisaccaride (LPS), derivato da Porphyromonas gingivalis sul lato mesio-palatale della M1. L'induzione della parodontite è stata mantenuta per 14 giorni, promuovendo l'accumulo di biofilm batterico e l'infiammazione. Per convalidare il modello animale, IL-1β, un mediatore infiammatorio chiave, è stato determinato mediante un saggio immunologico nel liquido crevicolare gengivale (GCF) e la perdita ossea alveolare è stata calcolata utilizzando la tomografia computerizzata a fascio conico (CBCT). Questa tecnica è stata efficace nel promuovere la recessione gengivale, la perdita ossea alveolare e un aumento dei livelli di IL-1β nel GCF alla fine della procedura sperimentale dopo 14 giorni. Questo metodo è stato efficace nell'indurre la malattia di Parkinson, potendo così essere utilizzato in studi sui meccanismi di progressione della malattia e sui futuri possibili trattamenti.
Introduzione
La parodontite (PD) è la sesta condizione di salute pubblica più diffusa in tutto il mondo, che colpisce circa l'11% della popolazione totale, essendo una forma avanzata, irreversibile e distruttiva di malattia parodontale 1,2. Il PD è un processo infiammatorio che colpisce i tessuti gengivali e parodontali, che provoca la recessione gengivale, la migrazione apicale dell'epitelio giunzionale con sviluppo della tasca e la perdita dell'osso alveolare3. Inoltre, la malattia di Parkinson è associata a diverse malattie sistemiche, tra cui malattie cardiovascolari, obesità, diabete e artrite ....
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Protocollo
NOTA: Il protocollo sperimentale dello studio è stato approvato dal Comitato Etico di Sperimentazione Animale dell'Istituto di Ricerca Sanitaria delle Isole Baleari (CEEA-UIB; numero di riferimento 163/03/21).
1. Anestesia animale e preparazione della procedura
- Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici (bavagli in alluminio, esploratore dentale, lancia diamantata, forbici chirurgiche, pinze microchirurgiche, un micro portaaghi, un intagliatore hollenback, un elevatore microchirurgico periostale e forbici microchirurgiche) (5 min a 135 °C) prima dell'intervento.
- Preparare tutte le soluzioni necessarie p....
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Risultati
Una sequenza temporale delle fasi sperimentali è presentata nella Figura 1. La figura 2A mostra un'immagine della mandibula dopo l'intervento chirurgico, con il posizionamento della legatura attorno al solco di M1 al tempo 0 dell'esperimento. La figura 2B mostra come, dopo 14 giorni dalla procedura, la legatura intorno alla M1 entra nel solco gengivale, causando infiammazione della gengiva e accumulo infiltrante.
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Discussione
Questo metodo descrive l'induzione del PD nei ratti seguendo una tecnica combinata di iniezioni di Pg-LPS e posizionamento della legatura intorno alla M1, rivelando che cambiamenti significativi nei tessuti parodontali e nell'osso alveolare potrebbero essere indotti in 14 giorni dopo questo metodo.
Durante questa procedura, deve essere fornita attenzione a diversi passaggi critici. Durante l'anestesia animale e la preparazione della procedura, valutare la corretta anestesia durante il.......
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Dichiarazioni
Gli autori non dichiarano alcun conflitto di interessi.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fundació Universitat-Empresa de les Illes Balears (Proof of concept call 2020), dall'Instituto de Salud Carlos III, dal Ministerio de Economía y Competividad, cofinanziato dal Fondo sociale europeo FSE e dal Fondo europeo di sviluppo regionale del FESR (contratto con M.M.B; FI18/00104) e dalla Direcció General d'Investigació, Conselleria d'Investigació, Govern Balear (contratto con M.M.F.C; FPI/040/2020). Gli autori ringraziano la dottoressa Anna Tomás e Maria Tortosa per il loro aiuto alla chirurgia sperimentale e alla piattaforma di IdISBa. Infine, grazie ad ADEMA School of Dentistry per l'accesso allo scanner CBCT.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Carta adsorbente punto nº 30 | Proclinc | 8187 | |
| Aprotinina | Sigma-Aldrich | A1153 | |
| Atipamezolo | Dechra | 573751.5 | Revanzol 5 mg/mL |
| Legatura di seta intrecciata (5/0) | Laboratorio Arago Sl | 613112 | |
| Buprenorfina | Richter pharma | 578816.6 | Bupaq 0.3 mg/mL |
| Scanner per tomografia computerizzata a fascio conico (CBCT) | MyRay | hyperion X9 | Modello Hyperion X9 |
| CTAn software | SkyScan | Versione 1.13.4.0 | |
| Esploratore dentale | Proclinc | 99743 | |
| Fresa diamantata a forma di lancia | Dentaltix | IT21517 | |
| Dieta di mantenimento alimentare | Sodispain research | ROD14 | |
| Piattaforma chirurgica riscaldata | PetSavers | ||
| Hollenback carver | Hu-FRIEDY | ||
| Ago ipodermico | BD | 300600 | 25G x 5/8" - 0,5 x 16 MM |
| isoflurano | Karizoo | Isoflutek 1000mg/g | |
| Ketamina | Dechra | 581140.6 | Anesketina 100 mg/mL |
| Lipopolisaccaride derivato da P.Gingivalis | InvivoGen | TLRL-PGLPS | |
| Metanolo | Fisher Scientific | M/4000/PB08 | |
| Microholter con ago | Fehling Strumenti chirurgici | KOT-6 | |
| Pinze microchirurgiche | KLS Martin | 12-384-06-07 | |
| forbici microchirurgiche | S& Strumenti microchirurgici T | SDC-15 Monitor RV | |
| iMEC 8 Vet | Mindray | ||
| Immunodosaggio a microsfere multiplex | Procartaplex, Thermo fisher Scientific | PPX-05 | |
| Paraformaldeide (PFA) | Sigma-Aldrich | 8187151000 | |
| Elevatore microchirurgico periostale | Dentaltix | CU19112468 | |
| Fenilmetilsulfonilfluoruro (PMSF) | Roche | 10837091001 | |
| Soluzione tampone fosfato (PBS) | Capricorn Scientific | PBS-1A | |
| PhosSTOP | Roche | 4906845001 | Compressa commerciale per inibitori della fosfatasi |
| Fiala di plastica | SPL Lifesciencies | 60015 | 1,5 ml |
| salina | Cinfa | 204024.3 | |
| Stereomicroscopio | Zeiss | Modello SteREO Discovery.V12 | |
| Lenti chirurgiche luce led | Zeiss | ||
| Forbici chirurgiche | Siringa Zepf Surgical | 08-1701-17 | |
| BD plastipak | 303172 | 1mL | |
| Micromotore dentale veterinario | Eickemeyer | 174028 | |
| Xilazina | Calier | 20102-003 | Xilagesic 20 mg/mL |
Riferimenti
- Carvalho, J. D. S., et al. Impact of citrus flavonoid supplementation on inflammation in lipopolysaccharide-induced periodontal disease in mice. Food and Function. 12 (11), 5007-5017 (2021).
- Nazir, M. A.
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Ristampe e permessi
