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Articolo metodologico

Un modello murino di silicosi stabilito dall'inalazione ripetuta di polvere di silice cristallina

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DOI:

10.3791/64862

6 gennaio 2023

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive un metodo per stabilire un modello murino di silicosi attraverso l'esposizione ripetuta a sospensioni di silice tramite una flebo nasale. Questo modello può imitare in modo efficiente, conveniente e flessibile il processo patologico della silicosi umana con elevata ripetibilità ed economia.

Abstract

La silicosi può essere causata dall'esposizione alla polvere di silice cristallina (CSD) respiratoria in un ambiente industriale. La fisiopatologia, lo screening e il trattamento della silicosi nell'uomo sono stati ampiamente studiati utilizzando il modello murino di silicosi. Facendo inalare ripetutamente CSD nei polmoni, i topi possono imitare i sintomi clinici della silicosi umana. Questa metodologia è pratica ed efficiente in termini di tempo e resa e non provoca lesioni meccaniche alle prime vie respiratorie dovute all'intervento chirurgico. Inoltre, questo modello può imitare con successo il processo di trasformazione acuta/cronica della silicosi. Le principali procedure sono state le seguenti. La polvere CSD sterilizzata da 1-5 μm è stata completamente macinata, sospesa in soluzione fisiologica e dispersa in un bagno d'acqua ad ultrasuoni per 30 minuti. I topi sottoposti ad anestesia indotta da isoflurano sono passati da una respirazione rapida superficiale ad un'aspirazione profonda e lenta per circa 2 secondi. Il topo è stato posizionato nel palmo di una mano e la punta del pollice ha toccato delicatamente il bordo del labbro della mascella del topo per raddrizzare le vie aeree. Dopo ogni espirazione, i topi hanno respirato la sospensione di silice goccia a goccia attraverso una narice, completando il processo entro 4-8 secondi. Dopo che la respirazione dei topi si è stabilizzata, il loro petto è stato accarezzato e accarezzato per evitare che il CSD inalato venisse espulso con la tosse. I topi sono stati poi riportati nella gabbia. In conclusione, questo modello è in grado di quantificare la CSD lungo il tipico passaggio fisiologico di minuscole particelle nel polmone, dal tratto respiratorio superiore ai bronchioli terminali e agli alveoli. Può anche replicare l'esposizione ricorrente dei dipendenti a causa del lavoro. Il modello può essere eseguito da una sola persona e non necessita di attrezzature costose. Simula in modo conveniente ed efficace le caratteristiche patologiche della silicosi umana con un'elevata ripetibilità.

Introduzione

I lavoratori sono inevitabilmente esposti a polvere di silice cristallina irregolare (CSD), che può essere inalata ed è più tossica in numerosi contesti occupazionali, tra cui l'estrazione mineraria, la ceramica, il vetro, la lavorazione del quarzo e il calcestruzzo 1,2. Una condizione cronica di inalazione di polvere nota come silicosi provoca fibrosi polmonare progressiva3. Secondo i dati epidemiologici, l'incidenza della silicosi è diminuita a livello globale negli ultimi decenni, ma negli ultimi anni è aumentata e colpisce i più giovani

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Protocollo

Tutte le procedure hanno seguito le linee guida della Guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (pubblicazione NIH n. 8023, rivista nel 1978) e sono state approvate dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso la Scuola di Medicina dell'Università di Scienza e Tecnologia di Anhui.

1. Gestione e alimentazione dei topi

  1. Assegnare 20 topi maschi C57BL/6 sani ai gruppi sperimentali o di veicoli in un rapporto 1:1. Acclimatare i topi al nuovo ambiente per 1 settimana.
  2. Fornire un tempo di luce costante di 12 ore al giorno. Utilizzare un inter....

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Risultati

La potenziale patogenesi della silicosi nei topi è stata studiata utilizzando il metodo proposto. Abbiamo scoperto che il peso corporeo dei topi nel gruppo sperimentale è diminuito significativamente rispetto al gruppo di controllo e che il peso corporeo si è ripreso lentamente dopo la cessazione dell'esposizione. A causa della dose ottimizzata utilizzata qui, non è stata osservata mortalità nei topi esposti alla silice in questo esperimento. La tabella di marcia tecnica del gocciolamento nasale ripetuto al CSD è mostrat.......

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Discussione

I modelli murini di silicosi sono fondamentali per lo studio della patogenesi e del trattamento della silicosi. Questo protocollo descrive un metodo per preparare un modello di silicosi nei topi attraverso l'esposizione nasale ripetuta. Questa metodica permette di studiare le caratteristiche patologiche della silicosi indotta da diversi tempi di esposizione. I topi sono stati anestetizzati su un ventilatore e la loro frequenza respiratoria è stata monitorata. La frequenza respiratoria iniziale breve e veloce è gradualmen.......

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto dal programma di innovazione della sinergia universitaria della provincia di Anhui (GXXT-2021-077) e dal Fondo per l'innovazione dei laureati dell'Università di scienza e tecnologia dell'Anhui (2021CX2120).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Provetta da 0,5 mLBiosharpBS-05-M
10% fissativo neutro in formalinaNanchang Yulu Experimental Equipment Co.
Adobe IllustratorAdobe 
Disinfettante a base di alcolXintai Kanyuan Disinfection Products Co.
CD68Abcamab125212
Soluzione per il recupero dell'antigene citratobiosharp life scienceBL619A
Kit cromogenico DABNJJCBioW026-1-1
Dimetil benzeneWest Asia Chemical Technology (Shandong) CoNA
Kit di analisi delle proteine BCA potenziatoBeyotime BiotechnologyP0009
Ematossilina ed eosina (H& E)Beyotime BiotechnologyC0105S
Substrato HRPMillipore CorporationP90720
HRP-coniugato Capra Affinipure Anti-coniglio IgG(H + L)ProteintechSa00001-2
Acido ghiaccioaceticoTecnologia chimica dell'Asia occidentale (Shandong) CoNA
ImageJNIHNA
IsofluranoRWD Vita ScienceR510-22
Kit colorante Trichrome di MassonSolarbioG1340
MetanoloMacklinNA
MicrotubiMilliporeAXYMCT150CS
NF-κ B p65Cell Signaling Technology8242S
Bagno oscillatorio termostatico in metalloAbsonNA
Paraffina embedding machinePrecision (Changzhou) Medical Equipment Co.PBM-A
Affettatrice a paraffinaJinhua Kratai Instruments Co.
Tampone fosfato (PBS) BiosharpBL601A
Soluzione fisiologica Il primo ospedale del popolo della città di HuainanNA
PipetteEppendorfNA
PMSFBeyotime BiotechnologicalST505
Microscopio a luce polarizzataOlympusBX51
Bilancia di precisioneAcculabALC-110.4
Prism7.0GraphPad Versione 7.0
Membrane PVDFMillipore3010040001
tampone di lisi RIPABeyotime BiotechnologyP0013B
RODI Sistema di purificazione dell'acqua multifunzionale intelligenteRSJRODI-220BN
Scilogex SK-D1807-E Agitatore 3DScilogexNA
SDS-PAGE kit di preparazione gelBeyotime BiotecnologiaP0012A
Biossido di silicioSigma#BCBV6865
Sirio colorazione rossaNanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.
Macchina per anestesia per piccoli animaliAnhui Yaokun Biotech Co., Ltd.ZL-04A
(0,1– 10 µ L)KIRGENKG1011
Puntali per pipette universali (100– 1000 µ L)PuntaliKIRGEN KG1313
(1– 200 µ L)KIRGENKG1212
Vortex  miscelatore VWRNA
ZEISS GeminiSEM 500Zeiss GermaniaSEM 500
β-actinaBiossbs-0061R
NANANANA181012Puntali per pipette universali per pipette universali

Riferimenti

  1. Olsson, A., Kromhout, H. Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace. Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).
  2. The Lancet Respiratory. The world is failing on silicosis. The Lanc....

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