Questo protocollo presenta un sistema ottimizzato di biodosaggio a foglia staccata per valutare l'efficacia dei funghi entomopatogeni (EPF) contro l'afide della senape (Lipaphis erysimi (Kalt.)), un insetto partenogenetico. Il metodo delinea il processo di raccolta dei dati durante gli esperimenti con piastre di Petri, consentendo ai ricercatori di misurare costantemente la virulenza dell'EPF contro gli afidi della senape e altri insetti partenogenetici.
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Articolo metodologico
Valutazione dell'effetto afididida di funghi entomopatogeni contro insetti partenogenetici, afide della senape, Lipaphis erysimi (Kalt.)
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'afide della senape (L. erysimi) è un parassita che infesta varie colture crocifere e trasmette virus vegetali. Per ottenere una gestione ecologica dei parassiti, i funghi entomopatogeni (EPF) sono potenziali agenti di controllo microbico per il controllo di questo parassita. Pertanto, lo screening della virulenza degli isolati di EPF in condizioni di piastra di Petri è necessario prima dell'applicazione sul campo. Tuttavia, l'afide della senape è un insetto partenogenetico, il che rende difficile registrare i dati durante gli esperimenti con piastre di Petri. Per affrontare questo problema è stato sviluppato un sistema modificato per i saggi biologici delle foglie distaccate, utilizzando un microspruzzatore per inoculare i conidi sugli afidi e prevenire l'annegamento facilitando l'essiccazione all'aria dopo la sospensione delle spore. Il sistema ha mantenuto un'elevata umidità relativa per tutto il periodo di osservazione e il disco fogliare è rimasto fresco per oltre dieci giorni, consentendo la riproduzione partenogenetica degli afidi. Per prevenire l'accumulo di prole, è stato implementato un processo di rimozione quotidiana utilizzando un pennello da pittura. Questo protocollo dimostra un sistema stabile per valutare la virulenza degli isolati di EPF contro gli afidi della senape o altri afidi, consentendo la selezione di potenziali isolati per il controllo degli afidi.
Introduzione
L'afide della senape (L. erysimi) è un noto parassita che infesta una varietà di colture crocifere, causando notevoli perdite economiche1. Sebbene siano stati raccomandati diversi insetticidi sistematici per combattere le infestazioni di afidi, l'uso frequente di questi insetticidi solleva preoccupazioni sulla resistenza ai pesticidi 2,3. Pertanto, in termini di gestione ecologica dei parassiti, i funghi entomopatogeni (EPF) potrebbero fungere da adeguata strategia di controllo alternativa. L'EPF è un insetto patogeno con la capacità di infettare gli ospiti penetrando nelle lor....
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Protocollo
NOTA: Il diagramma di flusso completo è mostrato nella Figura 1.
1. Raccolta e manutenzione dell'afide della senape
- Collezione di afidi della senape
- Capovolgi le foglie e controlla visivamente l'infestazione di afidi della senape sulle colture crocifere nel campo.
- Registrare le informazioni sul sito di campionamento (ad es. GPS) e sulle piante ospiti e confermare la cronologia delle applicazioni di insetticidi con gli agricoltori.
- Utilizzare un aspiratore per insetti o un pennello da pittura fine (vedere Tabella dei materiali) per....
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Risultati
Il diagramma di flusso presentato illustra le condizioni stabili degli afidi della senape dalla raccolta sul campo allo screening della virulenza. Il mantenimento degli afidi provenienti dalla raccolta in campo ha garantito un aumento stabile delle colonie di afidi con un adeguato approvvigionamento alimentare. Gli afidi raccolti sul campo sono stati confermati come afidi della senape attraverso l'uso di marcatori molecolari, tra cui la dimensione dell'amplicone della PCR e il sequenziamento di LeCO1. Lo screening della .......
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Discussione
Le crucifere, un gruppo di ortaggi, sono spesso infestate da diverse specie di afidi, tra cui l'afide della senape (L. erysimi) e l'afide del cavolo (Brevicoryne brassicae)26. Entrambe le specie sono state segnalate a Taiwan27 ed è possibile che coesistano nel sito di raccolta. Per distinguere le specie di afidi strettamente correlate, questo studio ha impiegato una tecnica di identificazione molecolare utilizzando un set di primer multiplex
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano che non c'è alcun conflitto di interessi coinvolto in questo lavoro.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata supportata dal numero 109-2313-B-005 -048 -MY3 del Ministero della Scienza e della Tecnologia (MOST).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Anello di inoculazione | NEST Scientific 718201 | ||
| 100 bp DNA Ladder III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| Provetta da centrifuga da 50 ml | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| Piastra di Petri da 6 cm | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| Aspiratore per insetti da 6 mm | MegaView Science | BA6001 | |
| Carta da filtro da 70 mm NO.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% etanolo | |||
| 9 cm Piastra di Petri | Alpha Plus Scientific | 16001 | |
| Agar | Bioman Scientific | AGR001.1 | Grado microbiologico |
| Agarosio | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Safe DNA Gel Buffer | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| Kit GenepHlow Gel/PCR | Geneaid | DFH300 | |
| https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf Gene-Spin Kit di isolamento del DNA genomico | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Emocitometro | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Komatsuna foglie (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Microsprayer | |||
| MiniAmp Termociclatore | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Afide della senape (Lipaphis erysimi)Pennello | |||
| pittura | Tian Cheng azienda di pennelli | 4716608400352 | |
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Pestello a pellet | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Brodo di destrosio | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS Statistiche | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
Riferimenti
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
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Ristampe e permessi
