Stabilire colture cellulari miste neuronali e gliali da cervelli di topo embrionali per studiare l'infezione e l'immunità innata

Alistair Gamble; Maria Suessmilch; Anniek Bonestroo; Andres Merits; Gerard J. Graham; Jonathan Cavanagh; Julia M. Edgar; Marieke Pingen

doi:10.3791/65331

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Articolo metodologico

Stabilire colture cellulari miste neuronali e gliali da cervelli di topo embrionali per studiare l'infezione e l'immunità innata

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DOI:

10.3791/65331

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30 giugno 2023

Alistair Gamble¹ , Maria Suessmilch¹ , Anniek Bonestroo¹ , Andres Merits² , Gerard J. Graham¹ , Jonathan Cavanagh¹ , Julia M. Edgar¹ , Marieke Pingen¹

¹School of Infection and Immunity, University of Glasgow, ²Faculty of Science and Technology, Institute of Technology, University of Tartu

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo presenta un modo unico di generare colture cellulari del sistema nervoso centrale da cervelli di topo embrionali del giorno 17 per la ricerca neuro(immuno)logica. Questo modello può essere analizzato utilizzando varie tecniche sperimentali, tra cui RT-qPCR, microscopia, ELISA e citometria a flusso.

Abstract

I modelli del sistema nervoso centrale (SNC) devono ricapitolare la complessa rete di cellule interconnesse trovate in vivo. Il SNC è costituito principalmente da neuroni, astrociti, oligodendrociti e microglia. A causa dei crescenti sforzi per sostituire e ridurre l'uso di animali, sono stati sviluppati una varietà di sistemi di coltura cellulare in vitro per esplorare le proprietà cellulari innate, che consentono lo sviluppo di terapie per infezioni e patologie del SNC. Mentre alcune domande di ricerca possono essere affrontate da sistemi di coltura cellulare basati sull'uomo, come le cellule staminali pluripotenti (indotte), lavorare con cellule umane ha i suoi limiti per quanto riguarda la disponibilità, i costi e l'etica. Qui, descriviamo un protocollo unico per isolare e coltivare cellule da cervelli di topo embrionali. Le colture di cellule neurali miste risultanti imitano diverse popolazioni cellulari e interazioni trovate nel cervello in vivo. Rispetto agli attuali metodi equivalenti, questo protocollo imita più da vicino le caratteristiche del cervello e raccoglie anche più cellule, consentendo così di studiare più condizioni sperimentali da un topo gravido. Inoltre, il protocollo è relativamente facile e altamente riproducibile. Queste colture sono state ottimizzate per l'uso su varie scale, tra cui schermi ad alta produttività basati su 96 pozzetti, analisi al microscopio a 24 pozzetti e colture a 6 pozzetti per la citometria a flusso e l'analisi della reazione a catena quantitativa della polimerasi a trascrizione inversa (RT-qPCR). Questo metodo di coltura è un potente strumento per studiare l'infezione e l'immunità nel contesto di alcune delle complessità del SNC con la comodità dei metodi in vitro .

Introduzione

Migliorare la nostra comprensione del sistema nervoso centrale (SNC) è fondamentale per migliorare le opzioni terapeutiche per molte malattie neuroinfiammatorie e neurodegenerative. Il SNC, una complessa rete di cellule interconnesse all'interno del cervello, del midollo spinale e dei nervi ottici, comprende neuroni, oligodendrociti, astrociti e le loro cellule immunitarie innate, la microglia¹. Un approccio in vitro può spesso ridurre drasticamente il numero di topi necessari per eseguire ricerche significative; tuttavia, la natura complessa del SNC rende impossibile ricapitolare la situazione in vivo utilizzando linee cellul....