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Articolo metodologico

Istituzione e conferma di un modello murino postnatale di sovraccarico del volume ventricolare destro

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DOI:

10.3791/65372

9 giugno 2023

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo presenta la creazione e la conferma di un modello postnatale di sovraccarico del volume ventricolare destro (VO) in topi con fistola arterovenosa addominale (AVF), che può essere applicato per studiare come il VO contribuisce allo sviluppo cardiaco postnatale.

Abstract

Il sovraccarico di volume (VO) del ventricolo destro (RV) è comune nei bambini con cardiopatia congenita. In considerazione delle diverse fasi di sviluppo, il miocardio del ventricolo destro può rispondere in modo diverso al VO nei bambini rispetto agli adulti. Il presente studio mira a stabilire un modello postnatale di RV VO nei topi utilizzando una fistola arterovenosa addominale modificata. Per confermare la creazione del VO e le successive alterazioni morfologiche ed emodinamiche del ventricolo destro, sono stati eseguiti per 3 mesi l'ecografia addominale, l'ecocardiografia e la colorazione istochimica. Di conseguenza, la procedura nei topi postnatali ha mostrato un tasso di sopravvivenza e di successo della fistola accettabile. Nei topi VO, la cavità del ventricolo destro è stata ampliata con una parete libera ispessita e il volume sistolico è aumentato di circa il 30%-40% entro 2 mesi dall'intervento chirurgico. Successivamente, la pressione sistolica del ventricolo destro è aumentata, è stato osservato un corrispondente rigurgito della valvola polmonare ed è apparso un rimodellamento della piccola arteria polmonare. In conclusione, la chirurgia della fistola arterovenosa modificata (AVF) è fattibile per stabilire il modello RV VO nei topi postnatali. Considerando la probabilità di chiusura della fistola e l'elevata resistenza dell'arteria polmonare, è necessario eseguire un'ecografia addominale e un'ecocardiografia per confermare lo stato del modello prima dell'applicazione.

Introduzione

Il sovraccarico di volume (VO) del ventricolo destro (RV) è comune nei bambini con cardiopatia congenita (CHD), che porta a un rimodellamento miocardico patologico e a una prognosi sfavorevole a lungo termine 1,2,3. Una comprensione approfondita del rimodellamento del ventricolo destro e dei relativi interventi mirati precoci è essenziale per un buon risultato nei bambini con CHD. Ci sono diverse differenze nelle strutture molecolari, nelle funzioni fisiologiche e nelle risposte agli stimoli nel cuore di adulti e bambini 1,4,5,6.

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Protocollo

Tutte le procedure qui presentate sono conformi ai principi delineati nella Dichiarazione di Helsinki e sono state approvate dal Comitato per il benessere degli animali e gli studi umani presso lo Shanghai Children's Medical Center (SCMC-LAWEC-2023-003). Per il presente studio sono stati utilizzati cuccioli di topo C57BL/6 (P7, maschi, 3-4 g). Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). I cuccioli di topo e le loro madri che allattano (cuccioli:madri = 6:1 in una singola gabbia) sono stati tenuti in condizioni di laboratorio prive di agenti patogeni specifici in un ciclo di luce e buio di 12 ore a 22 ± 2 °C c....

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Risultati

Tasso di sopravvivenza e pervietà AVF entro 3 mesi
Un totale di 30 (75%) topi nel gruppo VO e 19 (95%) topi nel gruppo sham sono sopravvissuti all'intervento chirurgico AVF (Figura 4A). Nel gruppo VO, otto topi sono morti entro 1 giorno dall'intervento chirurgico a causa di sanguinamento eccessivo (n = 5) o cannibalizzazione (n = 3), mentre due topi sono morti per cause sconosciute a 1 mese.

Dei topi VO sopravvissuti (n = 30), l'ecografia ha co.......

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Discussione

In precedenza, il classico modello RV VO veniva creato utilizzando il rigurgito della valvola21; tuttavia, rispetto alla FAV, la chirurgia della valvola a cuore aperto può richiedere tecniche più sofisticate e può essere associata a una mortalità significativamente più elevata, in particolare nei topi postnatali. Poiché gli studi sugli animali hanno dimostrato che lo stesso effetto del VO è stato ottenuto dall'AVF22, in questo studio è stata utilizzata la chirurgia della fi.......

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Dichiarazioni

Non ci sono conflitti di interesse da dichiarare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Science Foundation of China (n. 82200309) e dall'Innovation Project of Distinguished Medical Team di Ningbo (n. 2022020405)

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
70% etanoloTiandz, chia
ACETAMINOFENE soluzione oraleVistaPharm, Inc. Largo, FL 33771, USANDC 66689-054-01
Macchina per anestesiaRWD Life Science, CinaR550IP
Maschera per anestesiaRWD Life Science, Cina68680
C57BL / 6 topiXipu' er-bikai Experimental Animal Co., Ltd (Shanghai, Cina)
Crema depilatoriaVeet, FranciaVT-200
Kit ematossilina ed eosina Beyotime biotech C0105M 
IsofluranoRWD Life Science, CinaR510-22-10
Microscopio  Yuyan Instruments, CinaSM-301
Aghi da sutura chirurgiciNINGBO MEDICAL NEEDLE CO., LTD, Cina
Piattaforma di riscaldamento termostaticoQingdao Juchuang Environmental Protection Group Co., Ltd, Cina
Dispositivo a ultrasuoniFUJIFILM VisualSonics, Inc.Vevo 2100includono la modalità B, la modalità Color Doppler e la modalità Doppler a onde pulsate
Gel per ultrasuoniParker Laboratories, Stati UnitiREF 01-08
Trasduttore a ultrasuoniFUJIFILM VisualSonics, Inc.MS 400
Le modalità di immagine

Riferimenti

  1. Sanz, J., Sanchez-Quintana, D., Bossone, E., Bogaard, H. J., Naeije, R. Anatomy, function, and dysfunction of the right ventricle: JACC state-of-the-art review. Journal of the American College of Cardiology. 73 (12), 1463-1482 (2019).
  2. Alonso-Gonzalez, R., Dimopoulos, K., Ho, S., Oliver, J. M., Gatzoulis, M. A.

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Ristampe e permessi

Tag

Sovraccarico del ventricolo destroFistola arterovenosaModello murino postnataleCardiopatia congenitaEcografia addominaleEcocardiografiaAlterazioni emodinamicheRimodellamento dell'arteria polmonareColorazione istochimicaGittata sistolica