Presentiamo un protocollo che utilizza il simulatore di manipolazione del tuina per eseguire la terapia tuina "a tre manipolazioni e tre agopunti" per ratti con lesioni da costrizione cronica minori e valutiamo i punti temporali analgesici efficaci del tuina entro 24 ore testando i cambiamenti del dolore attraverso l'analisi comportamentale e i cambiamenti nell'espressione dei fattori infiammatori utilizzando il saggio di immunoassorbimento enzimatico.
Articolo metodologico
Caratteristiche dei cambiamenti del dolore nei ratti con lesione nervosa entro 24 ore dall'intervento Tuina una tantum
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il tuina, come metodo di trattamento esterno della medicina tradizionale cinese, ha dimostrato di avere un effetto analgesico sul dolore neuropatico periferico (pNP) nella ricerca clinica e di base. Tuttavia, il momento ottimale per l'effetto analgesico del tuina può variare in base alle diverse sensazioni di lesione, influenzando l'esplorazione del meccanismo di inizio dell'analgesia del tuina.
La ricerca ha utilizzato ratti modello di lesione cronica da costrizione minore (CCI minore) per simulare la pNP e ha utilizzato il simulatore intelligente di manipolazione del tuina per simulare i tre metodi (pressione del punto, spiumatura e impasto) e tre punti di agopuntura (Yinmen BL37, Chengshan BL57 e Yanglingquan GB34) per l'esecuzione della terapia tuina. Lo studio ha valutato i cambiamenti del dolore entro 24 ore e il punto temporale ottimale per l'efficacia dell'analgesia del tuina nei ratti con modelli CCI minori testando la soglia di sensibilità al freddo (CST), la soglia di prelievo meccanico (MWT) e la latenza di ritiro termico (TWL). Inoltre, lo studio ha valutato i cambiamenti di espressione di IL-10 e TNF-α attraverso il rilevamento di Elisa. I risultati mostrano che il tuina ha effetti analgesici sia immediati che prolungati. Per le tre diverse soglie di sensibilità al danno di CST, MWT, TWL e due citochine di IL-10 e TNF-α, l'efficacia analgesica di tuina entro 24 ore dall'intervento è significativamente diversa in diversi punti temporali.
Introduzione
Il dolore neuropatico periferico (pNP) si riferisce al dolore causato da una lesione o malattia del sistema nervoso somatosensoriale periferico, manifestato come una serie di sintomi e segni, con l'iperalgesia come uno dei sintomi principali 1,2. L'iperalgesia è un'esperienza intensificata di dolore causato da uno stimolo nocivo, tra cui puntura di spillo, freddo e caldo3. Sono stati condotti ampi studi epidemiologici, che mostrano che la pNP è la più comune, con un tasso di prevalenza del 6,9%-10% nel dolore neuropatico4. La pNP può essere causata da molteplici malattie, tra cui lesioni del nervo, nevralgia post-erpetica, polineuropatia diabetica dolorosa, sclerosi multipla, ictus, cancro, ecc.5. Al giorno d'oggi, il metodo principale per il trattamento della pNP sono i farmaci, ma l'effetto non è ideale; e gli effetti collaterali sono significativi, il che è la ragione principale dell'elevato onere economico per gli individui e la società6.
Tuina è un metodo di trattamento esterno ecologico, economico, sicuro ed efficace della medicina tradizionale cinese7. Molti studi clinici hanno dimostrato l'effetto analgesico del tuina sulla pNP e studi di base hanno verificato gli effetti analgesici immediati e cumulativi del tuina 8,9. Il principale meccanismo analgesico cumulativo del tuina è quello di ridurre i livelli di fattori infiammatori e inibire l'attivazione delle cellule gliali10,11. La ricerca precedente ha confermato l'effetto analgesico cumulativo del tuina e ha trovato geni differenzialmente espressi (DEG) nei gangli della radice dorsale (DRG) e nel corno dorsale spinale (SDH) di ratti con lesione del nervo sciatico dopo 20 volte il trattamento con tuina, principalmente correlati al legame proteico, alla risposta alla pressione e alla proiezione neuronale12. In studi recenti, è stato confermato che il tuina ha un effetto analgesico immediato e che l'intervento 1-time del tuina potrebbe alleviare l'iperalgesia dei ratti CCI minori e soprattutto facilitare l'iperalgesia termica in modo più efficace13. Tuttavia, il momento ottimale per l'effetto analgesico del tuina può variare a seconda della sensazione di lesione (freddo, caldo, meccanica), influenzando l'esplorazione del meccanismo di inizio dell'analgesia del tuina.
I mediatori dell'infiammazione possono sensibilizzare e attivare i recettori del dolore, portando a una diminuzione delle soglie di scarica e delle scariche ectopiche, contribuendo così alla sensibilizzazione periferica14,15. Dopo la lesione dei nervi periferici, il TNF-α è un iniziatore della risposta infiammatoria, che può promuovere la sintesi di fattori infiammatori come IL-10 e IL-1β, causando lesioni infiammatorie tissutali dirette, stimolando le terminazioni nervose locali e causando dolore 16,17,18. Tuina può ottenere effetti analgesici riducendo l'espressione di fattori infiammatori come TNF-α, IL-10, IL-6 e IL-1β 19,20,21. Lo studio ha selezionato ratti modello CCI minori per simulare la pNP clinica e ha selezionato diversi punti temporali per i test comportamentali del dolore da stimolazione fredda, termica e meccanica dopo un intervento tuina 1 volta per soglia di sensibilità al freddo (CST), soglia di prelievo meccanico (MWT), latenza di prelievo termico (TWL) e scegliere IL-10 e TNF-α nel siero mediante saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), Al fine di selezionare il punto temporale in cui l'effetto analgesico di Tuina è significativo, fornendo una base per lo studio del meccanismo di inizio dell'analgesia di Tuina nella fase successiva.
Protocollo
Il Comitato per la protezione e l'uso degli animali dell'Università di Medicina Cinese di Pechino (BUCM-4-2022082605-3043) ha approvato tutte le procedure utilizzate in questo studio.
1. Animali e disegno dello studio
- Procurarsi 49 ratti maschi di Sprague-Dawley (SD) di 8 settimane, del peso di 200 ± 10 g.
- Utilizzando un metodo della tabella dei numeri casuali, dividere i ratti in un gruppo di operazioni fittizie (n = 7), un gruppo modello (n = 7) e immediatamente dopo il gruppo tuina (n = 7), 6 ore dopo il gruppo tuina (n = 7), 12 ore dopo il gruppo tuina (n = 7), 18 ore dopo il gruppo tuina (n = 7) e 24 ore dopo il gruppo tuina (n = 7).
2. Definizione di un modello di ratto di ICC minore (Figura 1)
NOTA: Il metodo di modellazione della CCI minore era quello descritto in studi precedenti 22,23,24.
- Consentire l'alimentazione adattativa del ratto SD per 7 giorni. Lascia che il topo digiunisca per 2-3 ore prima di modellare.
- Metti il ratto in una scatola riempita con isoflurano al 3-5% per l'anestesia da una macchina per anestesia. Dopo l'anestesia, applicare un unguento oftalmico su entrambi gli occhi per prevenire la secchezza.
- Fissare il ratto in posizione prona su un tavolo, radere il pelo dell'area dell'articolazione dell'anca destra e disinfettare l'area con iodio (Figura 1B).
- Confermare il piano chirurgico dell'anestesia con un pizzico di punta. Praticare un'incisione cutanea di circa 0,5-1 cm lungo la direzione di camminata del nervo sciatico, separare bruscamente lo strato muscolare ed esporre completamente il bordo inferiore del muscolo piriforme (Figura 1C).
- Legare liberamente una sutura intestinale cromata assorbibile (tipo 4-0) attorno al nervo senza interrompere la circolazione sanguigna dei vasi extraneurali. Esporre il nervo sciatico di ratti del gruppo fittizio per 3 minuti senza legatura (Figura 1A, D, E).
- Utilizzare una siringa senza ago per applicare 1 goccia di soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% sul nervo sciatico per aiutare a ripristinarlo. Suturare strato per strato, somministrare una quantità adeguata di farmaco antinfiammatorio come la polvere di amoxicillina, suturare lo strato muscolare con 1 punto e suturare la pelle con 2 punti (Figura 1F).
NOTA: Dal passaggio 2.3 al passaggio 2.6, mantenere il flusso di isoflurano al 2%-3% nella bocca e nel naso dei ratti per mantenere l'anestesia. - Tieni il topo al caldo e aspetta che si svegli. Riporta i topi nella stanza di riproduzione.
3. Intervento intelligente con il simulatore di manipolazione del tuina (Figura 2)
NOTA: Il trattamento è iniziato il 7° giorno dopo la definizione del modello.
- Regolare i parametri dello strumento su una forza di stimolazione di 4 N, una frequenza di stimolazione di 60 volte/min e una temperatura di 36 °C sull'interfaccia operativa del computer. Posizionare il ratto nel fissatore per ratti ed esporre la posizione dei punti di agopuntura degli arti posteriori (Figura 2A, macchina auto-sviluppata, brevetto n. ZL 2023 20511277.5)25.
- Attivare lo strumento per eseguire i metodi di pressatura a punti, pizzicamento e impastamento (Tabella 1). Fare clic su Point-Pressing, Plucking, and Kneading visualizzati sullo schermo del computer nella sequenza sui punti Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) e Yanglingquan (GB34) (Tabella 2) sul lato del modello del ratto del gruppo tuina (Figura 2B, C)26.
- Per il gruppo tuina, eseguire un intervento una volta al giorno per 1 giorno, con una forza di 4 N, una frequenza di 60 volte/min e un totale di 9 min per punto per metodo.
- Trattenere i gruppi sham e model per 9 minuti, con lo stesso numero di volte del gruppo tuina.
4. Misurazione comportamentale
NOTA: Dopo l'intervento, la soglia di sensibilità al freddo (CST), la soglia di prelievo meccanico (MWT) e la latenza di ritiro termico (TWL) sono state testate rispettivamente nei 5 sottogruppi tuina, nel gruppo modello e nel gruppo operativo fittizio. Il tempo di test per il modello e il gruppo sham è lo stesso di quello per il gruppo tuina (cioè 24 ore).
- Soglia di sensibilità al freddo (CST)
- Posiziona il ratto su un rilevatore di dolore intelligente a piastra fredda e calda con una temperatura superficiale di 4 ± 1 °C (clicca su START > SET) e coprilo con una gabbia di plastica trasparente.
- Osservare le attività esplorative dei ratti per 5 minuti fino a quando non si sono acclimatati alla gabbia di plastica trasparente.
- Osservare e registrare il numero di sollevamenti del piede nel lato operativo dell'arto posteriore entro i successivi 5 minuti.
NOTA: Il numero di sollevamenti del piede causati da cambiamenti nell'attività o nella postura del ratto non è incluso.
- Soglia di prelievo meccanico (MWT)
- Posiziona il ratto sulla superficie inferiore come una griglia (0,5 cm × 0,5 cm) in una scatola di prova per 15-30 minuti prima del test.
- Spostare la sonda del dolore (tipo EVF 5) al centro della regione plantare posteriore destra del ratto, aumentare linearmente la pressione a mano e registrare la soglia visualizzata sullo schermo dello strumento quando il ratto solleva e si lecca le zampe. Misurare continuamente 5 volte, con un intervallo di misurazione di 10 minuti ciascuna.
- Latenza di prelievo termico (TWL)
- Metti il ratto in una scatola di prova con una superficie inferiore in vetro e lascialo adattare per 15 minuti prima di iniziare il test.
NOTA: Il periodo di latenza del riflesso del piede di contrazione termica è stato rilevato utilizzando uno strumento per la stimolazione termica del dolore (tipo PL200). - Imposta i parametri: il tempo massimo di test è di 30 s e l'intensità è del 50%. Fare clic sui pulsanti START e direzione.
- Spostare la sonda a infrarossi al centro della regione plantare posteriore destra del ratto e avviare il rilevamento.
- Registra la latenza del riflesso di retrazione del piede quando il ratto solleva e si lecca i piedi. Misura la latenza continuamente 5 volte, con un intervallo di 10 minuti tra ogni misurazione.
- Metti il ratto in una scatola di prova con una superficie inferiore in vetro e lascialo adattare per 15 minuti prima di iniziare il test.
5. ELISA
- Anestetizzare il ratto con una dose di 35 ml/100 g di idrato di cloro al 4% per l'anestesia per iniezione intraperitoneale dopo test comportamentali. Taglia la pelle e i muscoli longitudinalmente lungo il centro dell'addome del ratto per esporre i suoi organi interni.
- Utilizzare una zavorra e un portaago per la separazione pura, identificare l'aorta addominale, prelevare sangue fresco e conservare un campione per il test. Utilizzare un tubo di separazione per separare il siero. Prelevare il campione di siero per la rilevazione immediata, oppure imballarlo separatamente e conservarlo in frigorifero a -80°C.
NOTA: Prima di separare, lasciare che il campione di sangue si agglutini per 30 minuti. - Preparare il siero dei ratti per il processo di analisi e conservarlo a temperatura ambiente (RT) per almeno 30 minuti.
- Impostare pozzetti vuoti e pozzetti campione standard per il campione da testare. Aggiungere un totale di 50 μl dei campioni standard alla piastra enzimatica. Aggiungere prima 40 μl di diluente, quindi aggiungere 10 μl di campione al pozzetto del campione da testare.
NOTA: Quando si aggiungono campioni, è necessario aggiungerli sul fondo del pozzetto marcato con l'enzima, assicurandosi che non tocchino il più possibile la parete del pozzetto, e agitare delicatamente e mescolare bene. Il pozzetto bianco non contiene campioni o reagenti marcati con enzimi e gli altri passaggi sono gli stessi. La diluizione finale del campione è di 5 volte. - Dopo aver sigillato la piastra con una pellicola sigillante, metterla in un'incubatrice a 37 °C per 30 minuti.
- Diluire 30 volte la soluzione di lavaggio concentrata con acqua distillata e metterla da parte.
- Rimuovere la pellicola sigillante, versare il liquido dal pozzetto e scuoterlo per asciugarlo. Riempi ogni pozzetto con il detersivo, lascialo riposare per 30 secondi e poi versalo. Ripeti questo passaggio 5 volte e, infine, scuotilo per asciugarlo.
- Aggiungere avidina marcata con perossidasi di rafano (100 μl per pozzetto).
- Aggiungere 50 μl di sviluppatore di colore A a ciascun pozzetto, quindi aggiungere 50 μl di sviluppatore di colore B. Agitare delicatamente e mescolare e posizionare il prodotto in un ambiente a 37 °C per 10 minuti al buio.
- Aggiungere 50 μl della soluzione di arresto per pozzetto per terminare la reazione.
NOTA: A questo punto, il colore blu diventerà giallo. - Azzerare i pozzetti bianchi e misurare la densità ottica (valore OD) di ciascun pozzetto in sequenza a una lunghezza d'onda di 450 nm.
Risultati
CST: Rispetto al gruppo modello, il numero di sollevamenti del piede nel gruppo 6 ore dopo il tuina era significativamente ridotto e la differenza era statisticamente significativa (P < 0,05). Rispetto al gruppo sham, il numero di sollevamenti del piede nel gruppo modello è stato significativamente aumentato e la differenza è stata statisticamente significativa (P < 0,05) (Tabella 3, Figura 3).
MWT: Rispetto al gruppo modello, l'MWT di ciascun sottogruppo di tuina era significativamente superiore a quello del gruppo modello, ad eccezione delle 18 ore dopo tuina, e l'MWT delle 24 ore dopo il tuina era significativamente superiore a quello del gruppo modello, con una differenza statisticamente significativa (P < 0,05). Rispetto al gruppo di operazioni fittizie, il MWT nel gruppo modello era significativamente più basso, con una differenza statisticamente significativa (P < 0,01) (Tabella 3, Figura 4).
TWL:
Rispetto al gruppo modello, c'è stato un aumento significativo immediatamente dopo la tuina, 6 ore dopo la tuina e 18 ore dopo la tuina, con una differenza statisticamente significativa. Rispetto al gruppo dell'operazione fittizia, il gruppo modello è diminuito significativamente, con una differenza statisticamente significativa (P < 0,01) (Tabella 3, Figura 5)
ELISA
IL-10: Rispetto al gruppo modello, c'è stata una diminuzione significativa 6 ore e 24 ore dopo la tuina, con una differenza statisticamente significativa (P < 0,01) (Tabella 4, Figura 6).
TNF-α: Rispetto al gruppo modello, c'è stata una diminuzione significativa immediatamente dopo il tuina (**P < 0,01), 6 ore dopo il tuina (**P < 0,01) e 24 ore dopo il tuina (**P < 0,05), con una differenza statisticamente significativa (Tabella 4, Figura 6)
Figura 1: Definizione di un modello di ratto di CCI minore. (A) Una sutura intestinale cromica (4-0). (B) Preparazione della pelle. (c) Incisione. (D) Esposizione del nervo sciatico. (E) Sutura intestinale cromica assorbibile (tipo 4-0) attorno al nervo. (F) Sutura dello strato muscolare e della pelle. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Trattamento del simulatore di manipolazione intelligente del tuina. (A) Il simulatore intelligente di manipolazione del tuina (brevetto n. ZL ZL 2023 20511277.5). (B) Le posizioni di Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) e Yanglingquan (GB34). (c) Yinmen stimolante (BL37). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Risultati della soglia di sensibilità al freddo (CST) dei ratti in ciascun gruppo. *P < 0,05, rispetto al gruppo modello, #P <0,05, rispetto al gruppo fittizio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: Risultati della soglia di ritiro meccanico (MWT) dei ratti in ciascun gruppo. *P <0,05, rispetto al gruppo modello, #P < 0,05, rispetto al gruppo fittizio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5: Risultati della latenza di ritiro termico (TWL) dei ratti in ciascun gruppo. *P < 0,05, **P < 0,01, rispetto al gruppo modello; #P <0,05, ##P < 0,01, rispetto al gruppo fittizio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 6: Variazioni dei livelli sierici di IL-10 e TNF-α dei ratti in ciascun gruppo (media ± SD, n = 7), "*P<0,05, **P<0,01, rispetto al gruppo modello. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Tre metodi | Metodi | Classificazioni | Funzioni |
| Pressatura a punti | Riscaldamento e sblocco | Riscaldamento dei meridiani e sblocco delle garanzie | |
| Coglitura | Rilassamento | Agisce sul tronco nervoso e tratta l'intorpidimento o il dolore agli arti | |
| Gramolatura | Rilassamento | Alleviare gli spasmi muscolari |
Tabella 1: Tre metodi di stimolazione.
| Tre agopunti | Agopunti | Meridiani | Nervi | Muscoli |
| Yinmen (BL37) | Meridiano della vescica del piede-Taiyang | Tronco del nervo sciatico | Muscolo bicipite femorale | |
| Chengshan(BL57) | Nervo tibiale | Muscolo gastrocnemio | ||
| Yanglingquan (GB34) | Cistifellea Meridiano del piede-Shaoyang | Nervo peroneo comune | Muscoli tibiali anteriori |
Tabella 2: Tre punti di agopuntura utilizzati in questo studio.
| Finto | Modello | Tuina | |||||
| 0 h | 6 h | 12 h | 18 h | 24 h | |||
| CST | 12,8 ± 2,38 | 25 ± 5.15# | 19.6 ± 10.99 | 13,2 ± 2,49* | 16,4 ± 8,41 | 17 ± 5.57 | 19 ± 8.34 |
| MWT | 69.47 ± 10.35 | 40.63 ± 9.65## | 44.19 ± 10.72 | 46,58 ± 9,47 | 42.83 ± 11.41 | 40,1 ± 5,59 | 48,33 ± 8,7* |
| TWL | 12.06 ± 3.45 | 8.16 ± 2.09## | 12.09 ± 3.86** | 10.07 ± 2.7* | 9.44 ± 2.52 | 10.42 ± 2.49** | 9,72 ± 2,29 |
Tabella 3: Risultati CST, MWT e TWL dei ratti in ciascun gruppo (media ± SD, n = 7). *P<0,05, **P<0,01, rispetto al gruppo di modelli; #P<0,05, ##P<0,01, rispetto al gruppo fittizio.
| Finto | Modello | Tuina | |||||
| 0 h | 6 h | 12 h | 18 h | 24 h | |||
| IL-10 | 55,10 ± 1,37** | 70.27 ± 6.22 | 67,28 ± 1,28 | 61,41 ± 3,36** | 67,98 ± 1,85 | 69.03 ± 6.29 | 57.16 ± 1.30** |
| TNF-α | 311.52 ± 13.45** | 339,33 ± 24,50 | 309,47 ± 8,37** | 309,99 ± 14,95** | 334,62 ± 21,85 | 319,22 ± 10,38 | 316,24 ± 8,72* |
Tabella 4: Variazioni dei livelli sierici di IL-10 e TNF-α dei ratti in ciascun gruppo (media ± SD, n = 7, pg/mL). *P < 0,05, **P < 0,01, rispetto al modello di gruppo (*P < 0,05, **P < 0,01.)
Discussione
Lo studio ha utilizzato il modello CCI minore per simulare la pNP causata da una lesione clinica del nervo sciatico. Il modello minore di CCI prevede la compressione e la restrizione continua e cronica del tronco nervoso attraverso la legatura, accompagnata dal graduale rigonfiamento della legatura, con conseguente edema all'interno del nervo sciatico e formazione di dolore cronico stabile in 3-5 giorni27,28. Nello studio preliminare, il gruppo di ricerca ha scoperto che il gruppo modello CCI minore era più stabile del gruppo modello classico il 7° giorno dopo la modellazione, rendendolo più adatto per il disegno sperimentale a breve termine. Pertanto, abbiamo scelto questo punto temporale per l'intervento del tuina.
La ricerca precedente ha verificato che il simulatore intelligente di manipolazione del tuina (animale) può alleviare efficacemente il dolore nei ratti con lesione del nervo sciatico dopo 20 sessioni di trattamento con tuina utilizzando il "metodo a tre e tre agopunti"29,30,31. Inoltre, il gruppo di ricerca ha scoperto che il tuina once può alleviare efficacemente i sintomi di ipersensibilità al dolore dei ratti CCI minori, in particolare l'iperalgesia termica13. Lo studio adotta i metodi di pressatura a punta, spiumatura e impastamento come i tre metodi di trattamento. Il metodo della pressione puntuale è una tecnica di riscaldamento e sblocco che ha la funzione di riscaldare i meridiani e sbloccare i collaterali. Il metodo di spiumatura è una tecnica di rilassamento che agisce sul tronco nervoso e può trattare l'intorpidimento o il dolore agli arti. Il metodo dell'impasto è una tecnica di rilassamento che può alleviare gli spasmi muscolari, eliminare l'affaticamento e alleviare il dolore nella zona lesa (Tabella 1). Lo studio seleziona Yinmen (BL37), Chengshan (BL57) e Yanglingquan (GB34) come i tre punti di agopuntura per il trattamento (Tabella 2). Secondo il principio della selezione dei punti di agopuntura lungo i meridiani e localmente in agopuntura e moxibustione, tre punti di agopuntura appartengono al meridiano della vescica del piede-Taiyang e al meridiano della cistifellea del piede-Shaoyang. Secondo la localizzazione anatomica del nervo, Yinmen (BL37) si trova sul nervo sciatico e sui suoi rami, Chengshan (BL57) si trova sul nervo tibiale e Yanglingquan (GB34) si trova sul nervo peroneo comune. In base alla posizione anatomica del muscolo, i tre punti di agopuntura si trovano attorno al muscolo bicipite femorale, al muscolo gastrocnemio e ai muscoli tibiali anteriori (Tabella 2). Pertanto, attraverso l'intervento dei tre metodi e dei tre punti di agopuntura, le aree rilevanti di agopunto-nervo-muscolo possono essere stimolate. In questo studio, dopo aver formato un dolore cronico stabile e un intervento con tuina, sono stati rilevati cambiamenti comportamentali nel dolore, verificando ulteriormente che il tuina ha un effetto analgesico immediato e ha diversi punti temporali di significato terapeutico per diversi recettori di lesione, fornendo supporto terapeutico per il passo successivo nello studio del meccanismo di inizio dell'analgesia del tuina.
Lo studio ha utilizzato CST, MWT e TWL come indicatori per esplorare l'efficacia del tuina per diverse sensazioni di lesione. Le manifestazioni cliniche del dolore indotto nella pNP includono principalmente iperalgesia e allodinia, vale a dire, dolore indotto dalla stimolazione fredda e caldae dolore meccanico indotto dal tatto 4. Attualmente, i classici indicatori quantitativi di ricerca comportamentale per queste due sensazioni di dolore sono CST, MWT e TWL. Nei test CST, il test della piastra fredda, il tester intelligente del dolore della piastra fredda e calda ZH-6C utilizzato in questo esperimento, è relativamente oggettivo, meno influenzato dai fattori ambientali circostanti, ha una temperatura costante e ha un'alta precisione32,33. Nella ricerca di base, i filamenti di Von Frey sono comunemente usati per stimare l'MWT, che è uno degli indicatori classici per valutare il dolore neuropatico. Si rivolge principalmente al dolore da agopuntura indotto dalla stimolazione meccanica per valutare il dolore meccanico indotto dal tatto nei roditori34,35. Il test di Hargreaves utilizza uno stimolatore del dolore termico per rilevare e valutare la risposta dei roditori alla sensibilità al dolore termico e viene utilizzato per valutare il recupero della sensibilità al dolore o della risposta al dolore termico dopo una lesione nervosa per osservare se le zampe posteriori dell'animale hanno una reazione di costrizione dovuta al calore. Lo strumento rileva il movimento delle zampe posteriori dell'animale36 e il controller spegnerà automaticamente il timer di arresto a infrarossi34, noto come TWL. Gli esperimenti mostrano che la sensibilità dei ratti modello CCI minori a TWL è ottimale38. Pertanto, il metodo di ricerca quantitativa per il comportamento dei ratti modello CCI minori questa volta consiste nell'utilizzare un esperimento su piastra fredda, un apparato di puntura meccanico elettronico e un apparecchio di puntura termica per rilevare.
I punti temporali significativi degli effetti curativi sulle diverse sensazioni nocicettive dopo l'intervento precoce del tuina sono diversi. Attualmente, sono state condotte esplorazioni preliminari sull'efficacia clinica e sul meccanismo dell'analgesia del tuina. Le nostre ricerche precedenti si sono concentrate principalmente sul meccanismo analgesico dopo un certo numero di tuina. Negli ultimi 2 anni, sono state condotte ricerche sul meccanismo analgesico nella fase iniziale del tuina per esplorare come viene avviata l'analgesia del tuina. In questo studio, "tre metodi e tre agopunti" sono stati utilizzati per intervenire una volta in ratti modello CCI minori. Quindi sono stati selezionati 5 punti temporali per il rilevamento CST, MWT e TWL per osservare i cambiamenti di temperatura e la sensazione tattile meccanica dei ratti modello CCI minori. Questo studio ha utilizzato l'ELISA per rilevare i cambiamenti nei livelli sierici di IL-10 e TNF-α dei ratti dopo test comportamentali. I risultati hanno mostrato che dopo un intervento con tuina, rispetto al gruppo modello, entrambi sono migliorati immediatamente. Ciò ha confermato ancora una volta i risultati delle ricerche precedenti secondo cui il tuina aveva un effetto analgesico immediato. Tuttavia, per diversi tipi di sensazioni di dolore, i punti temporali in cui l'effetto analgesico è significativo non sono gli stessi. In termini di CST, c'era una significatività statistica 6 ore dopo la tuina; In termini di MWT, c'era una significatività statistica 24 ore dopo la tuina; In termini di TWL, c'era una significatività statistica 6 ore dopo la tuina, e una significatività statistica immediatamente e 18 ore dopo la tuina; In termini di livello sierico di IL-10, c'è stata una diminuzione significativa 6 ore dopo la tuina e 24 ore dopo la tuina, con una differenza statisticamente significativa. In termini di livello sierico di TNF-α, c'è stata una diminuzione significativa immediatamente dopo la tuina, 6 ore dopo la tuina e 24 ore dopo la tuina, con una differenza statisticamente significativa. Indica che mentre l'effetto analgesico del tuina può essere sostenuto, c'è un ritardo significativo nel punto temporale di efficacia per il dolore indotto dalla stimolazione fredda e il dolore meccanico indotto dal tatto, ed è immediatamente efficace e ha un'efficacia più significativa e duratura per il dolore indotto dalla stimolazione termica. Il nostro laboratorio sta esplorando ulteriormente i cambiamenti nelle proteine e nei geni correlati alle proteine del potenziale recettoriale transitorio (TRP) e ai geni correlati al freddo, al caldo e alla sensibilità meccanica, nonché altri fattori infiammatori come TGF-β e IL-6, per esplorare ulteriormente il meccanismo di inizio analgesico del tuina.
In sintesi, sulla base dei risultati di questo studio, si può dedurre che i punti temporali in cui le proteine o le vie interessate dal tuina possono funzionare possono essere diversi, con conseguenti punti temporali diversi per effetti analgesici significativi. Sono necessarie ulteriori ricerche approfondite per esplorare il meccanismo di inizio dell'analgesia tuina e fornire una base per la ricerca sull'efficacia clinica di tuina.
Dichiarazioni
Gli autori non dichiarano conflitti di interesse, finanziari o di altro tipo.
Ringraziamenti
Gli autori hanno ricevuto finanziamenti per la ricerca, la scrittura e la pubblicazione di questo articolo dalla National Natural Science Foundation of China (n. 82074573 e 82274675) e dalla Beijing Natural Science Foundation (n. 7232278).
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Macchina per anestesia | Ruiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, Cina | R500 | Attrezzature per anestesia respiratoria animale |
| Sutura intestinale cromica | Shandong Boda Medical Products Co., Ltd., Cina | BD210903 | Una sutura chirurgica assorbibile composta principalmente da proteine del collagene elaborate dall'intestino di giovani capre sane |
| Strumento elettronico Von Frey | Bioseb, USA | BIO-EVF5 | Uno strumento per il rilevamento della soglia di astinenza meccanica |
| Rilevatore di dolore intelligente a piastra fredda e calda | Anhui Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd, Cina. | ZH-6C | Uno strumento per rilevare la soglia di sensibilità al freddo |
| Isoflurano | Ruiwode Life Technology Co., Ltd., Shenzhen, Cina | R510-22-10 | Un anestetico |
| Lettore di micropiastre multifunzione a lunghezza d'onda intera | Molecular Devices (Shanghai) Co., Ltd. | SpectraMax M2 | Uno strumento per il rilevamento della densità ottica (OD) |
| Dispositivo per analgesia termica | Chengdu Techman Software Co., Ltd., Cina | PL-200 | Uno strumento per il rilevamento della latenza di prelievo termico |
Riferimenti
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