Articolo metodologico

Migliorare lo sviluppo e la crescita dei ratti con paralisi cerebrale infantile utilizzando manipolazioni spinali selettive

DOI:

10.3791/65659

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2 febbraio 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo studio illustra l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale, sottolineando la procedura specifica e il protocollo standardizzato. Per valutare il protocollo sono stati eseguiti la misurazione del peso corporeo, il test di Rotarod, il punteggio del difetto del piede, altri test comportamentali e il rilevamento dell'ormone della crescita.

Abstract

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La paralisi cerebrale infantile (CP) è una malattia pediatrica refrattaria con un'alta prevalenza, un alto tasso di disabilità e un trattamento difficile. Una varietà di trattamenti sono attualmente utilizzati per la paralisi cerebrale. Il trattamento prevede una terapia farmacologica e non farmacologica. La terapia esterna della medicina tradizionale cinese è un metodo di trattamento molto distintivo nella terapia non farmacologica. Come una delle terapie esterne della medicina tradizionale cinese, il massaggio viene utilizzato nel trattamento della paralisi cerebrale e ha una buona efficacia, piccoli effetti collaterali e una forte operatività. Come parte della terapia esterna della MTC, la manipolazione spinale selettiva può promuovere efficacemente la crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. L'operazione è stata principalmente suddivisa in quattro fasi: in primo luogo, il metodo di sfregamento è stato applicato alla colonna vertebrale e ad entrambi i lati della colonna vertebrale per 1 minuto. Il metodo di pressatura e impastamento è stato applicato alla colonna vertebrale per 5 minuti e ai muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per 5 minuti. In secondo luogo, sono stati eseguiti la pressione e l'impasto dei sensibili punti di agopuntura locali nella colonna vertebrale per 2 minuti. In terzo luogo, l'arto interessato è stato trattato con il metodo della torsione per 1 minuto. In quarto luogo, il metodo di sfregamento è stato applicato a una linea mediana dalla fronte alla parte posteriore del cervello per 1 minuto. Questo studio mirava a utilizzare la manipolazione spinale selettiva per trattare ratti neonati con paralisi cerebrale. Il peso, il test di Rotarod, il punteggio del difetto del piede e l'ormone della crescita dei ratti neonati con paralisi cerebrale sono stati rilevati per comprendere l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. I risultati hanno mostrato che può promuovere l'aumento di peso, migliorare la capacità di equilibrio e la funzione motoria, promuovere la crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale, promuovere la secrezione dell'ormone della crescita e aumentare la temperatura delle parti sensibili della schiena.

Introduzione

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La paralisi cerebrale infantile (CP), causata da un danno non progressivo al cervello nel feto o nell'infanzia, è un gruppo di disturbi caratterizzati da uno sviluppo motorio e posturale anormale1, disturbi dello sviluppo tra cui un lento aumento di peso 2,3,4 e disfunzione motoria. L'incidenza della paralisi cerebrale infantile in Cina è del 2,48% e la prevalenza è rispettivamente del 2,46‰ (1-6 anni)5. Studi stranieri hanno riportato una prevalenza del 2,4%-3,6%6. La paralisi cerebrale infantile è una delle principali cause di lesioni fisiche e disabilità nei bambini, tra cui i disturbi dell'equilibrio e del movimento hanno un impatto significativo sulle attività della vita quotidiana1. La paralisi cerebrale infantile può essere causata da parto prematuro, infezione, genetica, ischemia e ipossia neonatale, ittero neonatale e altri fattori patogeni complessi e diversificati7. L'obiettivo del trattamento per la paralisi cerebrale è migliorare la funzione fisica e la qualità della vita 8. Attualmente, i metodi di trattamento per la paralisi cerebrale includono la stimolazione cerebrale profonda9, l'allenamento della deambulazione assistito da robot10, l'agopuntura del polso e della caviglia11 e l'agopuntura dei meridiani combinata con il massaggio12.

La medicina tradizionale cinese (MTC) è stata sempre più utilizzata come trattamento efficace per la CP 13,14. Anche il massaggio, come parte di esso, gioca un certo ruolo. Ad esempio, la manipolazione spinale selettiva può regolare lo stato dell'idrossimetilazione del DNA per regolare lo sviluppo neurale e migliorare l'apprendimento e la funzione della memoria15. Nel trattamento di ratti neonati con paralisi cerebrale, la manipolazione spinale selettiva può migliorare l'omeostasi infiammatoria della corteccia e dell'ippocampo regolando il livello di metilazione delle citochine infiammatorie TNF-α e della regione16 del promotore del gene IL-10 e svolgere un ruolo terapeutico positivo nella capacità di equilibrio del ratto neonato con paralisi cerebrale16. La manipolazione spinale selettiva può migliorare la funzione cognitiva dei ratti neonati con paralisi cerebrale17. La manipolazione spinale selettiva è stata utilizzata nel trattamento di ratti neonati con paralisi cerebrale infantile ed è stato osservato che aveva anche effetti terapeutici sulla loro crescita e sviluppo18.

Lo scopo di questo studio è illustrare l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo di ratti neonati con paralisi cerebrale misurando il peso corporeo, il test di Rotarod19, il punteggio di errore del piede20,21 e altri test comportamentali e il rilevamento dell'ormone della crescita, e di fornire idee di ricerca per il personale interessato.

Protocollo

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Questo studio è stato approvato dal Comitato Etico Animale Sperimentale dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan. Tutte le operazioni sperimentali sugli animali hanno seguito il principio 3R della riduzione, ottimizzazione e sostituzione degli animali da esperimento (n. R-06202018). In questo esperimento sono stati utilizzati ratti Sprague Dawley (SD) sani (14 maschi e 7 femmine) di grado libero da patogeni specifici (SPF) con un peso corporeo medio di 250-300 g. I ratti sono stati allevati nella stanza degli animali SPF dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan, numero di certificato: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Tutti i ratti sono stati alloggiati in un ciclo luce/buio di 12 ore con un ambiente controllato dalla luce naturale a una temperatura ambiente di 22-26 °C e un'umidità relativa del 40%-50%. Dopo 1 settimana di alimentazione adattativa, il rapporto maschi/femmine è stato mantenuto a 1:2. Dopo 1 settimana, i ratti gravidi sono stati alloggiati in un'unica gabbia, nutriti normalmente, mangiando e bevendo liberamente. Dopo il parto naturale, sono stati selezionati i ratti neonati sani nati dai ratti gravidi. I ratti neonati sono stati divisi nei gruppi Sham, Controllo e Trattamento per osservare l'effetto della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. Da ogni gruppo, 6 cuccioli maschi sono stati selezionati per l'esperimento. Il gruppo di trattamento è stato trattato con manipolazione spinale selettiva dal 5° giorno dopo la nascita e il trattamento è stato somministrato per 6 giorni seguiti da riposo per 1 giorno.

1. Stabilire il modello di paralisi cerebrale

  1. Sterilizzare il microscopio, le forbici oftalmiche, le pinze, la sutura, la placca chirurgica, le forbici, i tamponi di cotone e i guanti necessari per l'intervento chirurgico e posizionarli in sala operatoria.
  2. Separare temporaneamente un cucciolo dalla madre il terzo giorno di vita, posizionarlo in un unico telaio e trasportarlo in sala operatoria sterile.
  3. Misura il peso corporeo. Includere nello studio ratti neonati con peso corporeo compreso tra 7 e 9 g ed escludere quelli che non si conformavano al peso corporeo. Dividi casualmente i ratti neonati in gruppi Sham, Controllo e Trattamento.
  4. Indurre l'anestesia con isoflurano a una concentrazione del 2% e mantenere l'anestesia all'1% utilizzando una macchina per anestesia a gas per inalazione di piccoli animali.
    NOTA: Questo esperimento serve principalmente ad osservare gli effetti della manipolazione spinale selettiva sulla crescita e lo sviluppo di ratti neonati con paralisi cerebrale. L'anestesia è stata eseguita in conformità con i requisiti generali durante il processo di modellazione e un'ulteriore analgesia influenzerà i risultati dell'osservazione.
    1. Collegare l'anestetico gassoso per piccoli animali all'alimentazione e aprire la valvola collegata alla scatola di induzione.
    2. Metti il ratto neonato nella scatola di induzione, ruota la manopola di regolazione della concentrazione e regola la concentrazione di isoflurano al 2% per indurre l'anestesia.
    3. Quando il ratto neonato è incosciente, rimuoverlo dalla scatola di induzione. Posizionarlo sulla piastra operativa e chiudere il canale 1 della macchina per anestesia.
    4. Posiziona il ratto neonato supino. Fissare la maschera per inalazione dell'anestesia per mantenere l'anestesia.
    5. Aprire il canale collegato alla maschera di inalazione per anestesia. Mantenere l'anestesia ruotando la manopola di regolazione della concentrazione e regolando la concentrazione di isoflurano all'1%.
      NOTA: Dopo l'anestesia, valutare la profondità dell'anestesia sollevando e pizzicando con forza le dita dei piedi e la coda dei ratti neonati. Una mancata risposta quando le dita dei piedi e la coda sono state sollevate e pizzicate conferma che la profondità dell'anestesia è stata raggiunta.
  5. Disinfettare la pelle del collo del ratto neonato tre volte con alcol al 75% e praticare un'incisione longitudinale di 1 cm sulla pelle del collo per esporre il tessuto sottocutaneo.
    NOTA: L'incisione longitudinale della pelle del collo non causa difetti cutanei.
  6. Taglia la pelle del collo sinistro con un microscopio da dissezione e usa una pinzetta oftalmica per separare senza mezzi termini il muscolo sternoioide e il muscolo sternomastoideo sinistro.
    1. Trova l'arteria carotide comune sinistra e il nervo vago e separa l'arteria carotide comune sinistra e il nervo vago.
    2. Nel gruppo Modello, tagliare l'arteria carotide comune sinistra con una penna elettrica per la coagulazione. Pulire e suturare l'incisione del collo.
    3. Nel gruppo Sham, separare l'arteria carotide comune sinistra dal nervo vago.
  7. Dopo l'operazione, mettere il ratto neonato nel bagnomaria termostatico in posizione prona per la rianimazione per 1 ora.
    NOTA: Dopo il recupero naturale, il colore della pelle degli arti e di tutto il corpo era rubicondo. Il ratto neonato poteva muovere gli arti in modo autonomo e gattonare in modo indipendente.
  8. Collocare i ratti rianimati dei gruppi di controllo e trattamento in un'incubatrice chiusa a 37 °C in posizione prona. Introdurre una miscela di ossigeno al 5% e azoto gassoso al 95% per indurre l'ipossia e rimuovere i ratti dopo 2 ore.
  9. Rimuovere il ratto neonato che ha completato il processo di ipossia dalla scatola dell'ipossia e posizionarlo in posizione prona in una scatola con un normale contenuto di ossigeno atmosferico. Metterli a bagnomaria termostatico a 37 °C per 1 ora. Dopo il completo recupero, trasferisci il ratto neonato nella gabbia della madre.
    NOTA: Dopo il recupero naturale, il colore della pelle degli arti e di tutto il corpo era rosso. Il ratto neonato poteva muovere gli arti in modo autonomo e poteva gattonare in modo indipendente.
  10. Mettere il ratto neonato del gruppo Sham in una scatola con un normale contenuto di ossigeno atmosferico e mettere la scatola in un bagno d'acqua termostatico a 37 °C per 1 ora. Dopo il completo recupero, rimetti il ratto neonato nella gabbia della madre per l'alimentazione.
    NOTA: Dopo il recupero naturale, il colore della pelle degli arti e di tutto il corpo era rosso. Il ratto neonato poteva muovere gli arti in modo autonomo e poteva gattonare in modo indipendente. L'intero processo operatorio è stato completato nella sala operatoria speciale della sala animali SPF dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan. Durante la rianimazione e l'ipossia, l'operatore osserva il ratto neonato in ogni momento per prevenire la morte causata da una postura scorretta. Le femmine di ratto in allattamento sono state alimentate con mangimi da riproduzione privi di patogeni specifici (SPF) e, quando i cuccioli sono stati in grado di alimentarsi da soli, i cuccioli sono stati svezzati (21° giorno postnatale) e nutriti con mangime di mantenimento SPF.

2. Esperimento del riflesso raddrizzante

  1. Il 4° giorno dopo la nascita (il 2° giorno dopo la modellazione), eseguire l'esperimento del riflesso di raddrizzamento per verificare se il modello ha avuto successo (Figura 1 e Tabella 1).
    1. Solleva la coda del ratto neonato, appoggia la schiena su una tavola orizzontale e usa il pollice e l'indice per fissare la pancia e il collo. Controlla se il ratto può tornare alla sua posizione normale. L'incapacità del ratto di tornare alla posizione normale dalla posizione anormale a causa della perdita del riflesso raddrizzante è registrata come un modello di successo 16,22.
    2. Registra il tempo impiegato da ciascun gruppo di cuccioli per passare dalla posizione supina a quella prona. Inizia a registrare il momento in cui il pollice e l'indice vengono rilasciati contemporaneamente in posizione supina, consenti al ratto neonato di girarsi in posizione prona e smetti di registrare quando le zampe anteriori e posteriori sono posizionate sul pavimento. Se il ratto neonato non è riuscito a tornare alla posizione normale per più di 20 s, registrare il tempo di raddrizzamento a 20 s.

3. Preparazione prima dell'operazione

  1. Dopo la modellazione, separare il ratto neonato con paralisi cerebrale dalla madre e portarlo in una sala operatoria con una temperatura ambiente costante di 22-26 °C per 2 minuti per adattarsi all'ambiente circostante.
  2. Indossare guanti monouso per mantenere il palmo della mano delicato e morbido e la temperatura tra i 36-37 °C.
  3. Posiziona delicatamente il topo nel palmo della mano sinistra. Piega il pollice sinistro per coprire gli occhi del ratto per 2 minuti per formare un campo visivo scuro in modo che il ratto possa adattarsi all'ambiente del palmo dell'operatore. Usa l'indice e il medio destro per la manipolazione.
    NOTA: Coprire gli occhi del ratto neonato può creare un ambiente buio. Ciò impedirà al ratto neonato di agitarsi a causa dell'ambiente insicuro e incerto che influisce sui risultati sperimentali.

4. Divisione dei ratti nei gruppi di controllo e di trattamento

  1. Il secondo giorno dopo la modellazione (P5), verificare il modello mediante il test del riflesso di raddrizzamento e dividere casualmente i ratti neonati nei gruppi di controllo e trattamento. Eseguire la manipolazione spinale selettiva sui ratti neonati del gruppo di trattamento.
  2. Metti il ratto neonato in posizione prona. Assicurarsi che la colonna vertebrale sia sempre mantenuta a un livello dritto (Figura 2A).
  3. Massaggiare la colonna vertebrale ed entrambi i lati della colonna vertebrale per 1 minuto utilizzando il metodo di sfregamento e utilizzare il metodo di pressatura e impastamento sulla colonna vertebrale e sui muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per 5 minuti.
    1. Massaggia la colonna vertebrale e la pelle su entrambi i lati usando il metodo di sfregamento per rilassare il ratto neonato e alleviare completamente la sua tensione. Assicurarsi che la frequenza dello sfregamento sia di 100-120 volte/min per 1 minuto dopo che il ratto neonato è tranquillo e senza agitazione.
      1. Usa l'indice, il medio e l'anulare destro come superficie di contatto e fai un movimento circolare di sfregamento sulla pelle superficiale del rachide cervicale, del rachide toracico e della colonna lombare dalla testa alla coda senza disturbare il tessuto sottocutaneo.
      2. Con l'indice destro, il medio e l'anulare come superfici di contatto, eseguire movimenti circolari sulla superficie cutanea del muscolo trapezio, del muscolo gluteo superficiale, del muscolo romboidale cervicale, del muscolo romboide pettorale, del muscolo gran dorsale e del muscolo obliquo esterno in ordine dalla testa alla coda secondo lo standard anatomico animale23, senza disturbare il tessuto sottocutaneo.
    2. Trattare prima la colonna vertebrale con la pressione e l'impasto per 5 minuti, quindi premere e impastare i muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per 5 minuti.
      1. Applicare il metodo di impasto sulla colonna vertebrale a una frequenza di 120 volte/min per 5 minuti. Usa l'indice o il medio destro come superficie di contatto. Dalla testa alla coda, eseguire un impasto circolare sulla pelle superficiale delle vertebre cervicali, toraciche e lombari, combinato con una pressione verso il basso (1,77 ± 0,54 N). Assicurarsi che la forza raggiunga le vertebre cervicali, le vertebre toraciche, le vertebre lombari e i legamenti sovraspinosi.
      2. Applicare il metodo di pressatura e impastamento sui muscoli di entrambi i lati della colonna vertebrale a una frequenza di 120 volte/min per 5 minuti. Utilizzare l'indice o il medio destro come superficie di contatto. Secondo lo standard anatomico animale23, premere verso il basso la superficie della pelle del trapezio, del gluteo superficiale, del collo romboidale, del pettorale romboide, del gran dorsale e dei muscoli addominali obliqui esterni in un movimento rotondo di impasto dalla testa alla coda, con una forza di 1,77 ± 0,54 N, in modo che la forza raggiunga il trapezio, il gluteo superficiale, il collo romboidale, il pettorale romboide, gran dorsale e muscoli addominali obliqui esterni (Figura 2B)23.
  4. Premere e impastare i punti di agopuntura spinali sensibili (come Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu24) a una frequenza di 100-120 volte/min per 2 minuti. Usando l'indice o il medio destro come superficie di contatto, eseguire l'impasto circolare e la pressione verso il basso (1,77 ± 0,54 N) sulla pelle superficiale dei punti di agopuntura locali (come Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu e Feishu) nei ratti neonati con paralisi cerebrale.
    NOTA: I punti di agopuntura sono stati selezionati in base alla "Mappa dei punti di agopuntura animale" formulata dal ramo di ricerca sull'agopuntura sperimentale della Società cinese di agopuntura) (Figura 3)25.
  5. Stimolare localmente l'arto interessato con il metodo della torsione a una frequenza di 25 volte/min per 1 minuto.
    1. Con il pollice e l'indice destri, pizzicare l'arto interessato del ratto neonato con paralisi cerebrale, esercitando una forza simmetrica sulle due dita. Assicurarsi che la forza sia delicata e che l'azione sia leggera e delicata. Strofinare avanti e indietro l'estensore radiale del carpo destro, l'estensore delle dita comune, l'estensore ulnare del carpo, la falange, l'articolazione interfalangea, il muscolo gastrocnemio, il muscolo semitendinoso, l'osso metatarsale e l'articolazione intermetatarsale del ratto neonato.
  6. Applicare il metodo di sfregamento sulla linea mediana della fronte fino alla parte posteriore del cervello a una frequenza di 100-120 volte/min per 1 minuto. Usa l'indice destro come superficie di contatto e usa il metodo di sfregamento su una linea immaginaria dalla fronte al centro del cervello posteriore del ratto neonato (vale a dire, una linea di Baihui, Fengfu e Dazhui) (Figura 3).
    NOTA: Il massaggio viene applicato principalmente sulla pelle. È un movimento circolare sulla superficie della pelle della testa del ratto neonato con paralisi cerebrale. Non ha bisogno di guidare il movimento muscolare sottocutaneo di un ratto neonato con paralisi cerebrale.
  7. Al termine della procedura, lasciare il ratto neonato da solo per 30 minuti prima di rimetterlo nella gabbia madre per topi.
    NOTA: Con l'età, i peli dei ratti neonati diventano spessi, quindi è necessario rimuovere i peli posteriori di tutti i gruppi di ratti neonati durante l'operazione di massaggio per evitare di compromettere l'effetto sperimentale.

5. Rilevamento della temperatura dei punti di agopuntura locali

  1. Utilizzare una termocamera a infrarossi per rilevare la temperatura dell'area locale del punto di agopuntura prima e dopo l'operazione.
    1. Prima del massaggio spinale selettivo, collegare l'interfaccia di tipo C del telefono cellulare con l'interfaccia USB del dispositivo di imaging a infrarossi con un cavo dati e accendere il pulsante di accensione.
    2. Fare clic su Analizza per accedere al terminale del telefono cellulare del software, selezionare Foto per accedere alla modalità foto e fare clic su Picture in Picture Mode nell'angolo in basso a destra.
    3. Focalizza la fotocamera sulle aree dei punti di agopuntura Dazhui, Xinshu e Shenshu (Figura 3) sulla schiena del ratto neonato per scattare foto della temperatura. Fare clic su Foto per completare l'acquisizione dell'immagine e salvarla in formato JPG.
    4. Collegare il computer con un cavo dati e caricare l'immagine salvata su un computer installato con il software Fotric per l'analisi.
      1. Apri il software Fotric sul PC, apri il file locale e trova la posizione dell'immagine.
      2. Selezionare l'area di lavoro Termogramma, selezionare l'immagine da analizzare e accedere all'interfaccia di analisi.
      3. Nella schermata Analisi , selezionare l'immagine nella casella Immagine termica a destra e aprire il lucchetto.
      4. Seleziona la funzione di zoom, regola le dimensioni dell'immagine termica e dell'immagine di sfondo della casella di sinistra in modo che coincidano e disattiva il blocco a destra.
      5. Trova il rettangolo Imposta misura nella barra degli strumenti in alto e contrassegna il punto di agopuntura da rilevare nella figura.
      6. Fare clic su Report a destra per registrare il valore della temperatura.

6. Rilevamento della funzione dell'equilibrio motorio di ratti neonati con paralisi cerebrale

  1. Utilizzare il test comportamentale di Rotarod19 per rilevare la funzione motoria dei ratti nei gruppi Sham, Controllo e Trattamento il 61° giorno dopo la nascita.
    1. Impostazioni dei parametri: Avviare l'interruttore di alimentazione, selezionare Fai esperimento per accedere al passaggio successivo, selezionare Positivo, Ratti, Temporizzazione 5 min per accedere al passaggio successivo e selezionare Tempo acc: 10 secondi, Velocità: 10 giri/min.
    2. Quindi, posiziona i ratti sulla pista da corsa e inizia il test facendo clic su Esegui dopo che si sono fermati. Regolare lo stato di esecuzione di ogni seduta su ON. Addestra ogni ratto una volta per 5 minuti, quindi inizia a eseguire il test tre volte.
    3. Dopo l'addestramento, posizionare i ratti neonati sulla pista da corsa rotarod. Dopo che è stabile, fare clic su Esegui e regolare lo stato di esecuzione su ON. Al termine dei 5 minuti, selezionare Data per registrare il tempo e la velocità di ogni ratto che cade per la prima volta dalla pista di corsa della rotarod, ovvero i dati del tempo di esecuzione.
  2. Utilizzare il test del difetto del piede20,21 per valutare la funzione motoria dell'equilibrio dell'arto anteriore destro dei gruppi Sham, Control e Treatment il 61° giorno dopo la nascita.
    1. Posiziona i ratti neonati all'inizio dell'estremità della scala orizzontale e registra un video di loro che la attraversano fino all'altra estremità (lunga 100 cm e la distanza tra ogni scala è di 2 cm). Dopo una sessione di addestramento, eseguire il test formale tre volte per ogni ratto a un intervallo di 5 minuti.
    2. Osservare l'arto anteriore destro quando l'animale attraversa la scala utilizzando la riproduzione a bassa velocità per ottenere un punteggio, come mostrato nello standard di punteggio (Tabella 2).

7. Western blotting

  1. Eseguire l'analisi del western blotting dei campioni di tessuto come descritto in precedenza26.
    NOTA: La quantità di lisato è stata determinata in base alle dimensioni del blocco di tessuto. Gli anticorpi utilizzati erano i seguenti: anticorpi primari contro l'ormone della crescita (0,5 μg [0,5 ng/corsia]); anticorpo anti-recettore dell'ormone della crescita (1/1000); anticorpo anti-beta actina di riferimento interno (1/2000) per gli anticorpi primari; Capra anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000) per anticorpi secondari.

8. Rilevare la forza della mano

  1. Indossare il dispositivo utilizzato per rilevare la forza di manipolazione sulla mano utilizzata per il massaggio. Inserire il dito utilizzato per massaggiare il ratto neonato con il chip del sensore del dispositivo e accendere il pulsante di accensione .
  2. Collegare l'interfaccia del disco rigido che memorizza il software del tester manuale al computer e immettere l'indirizzo IP dedicato del tester manuale nella casella di input URL .
  3. Installa il client SpringVR sul computer, fai clic per accedere all'interfaccia di raccolta e seleziona il modello di dita nell'angolo in basso a destra per testare la forza di manipolazione.
  4. Selezionare l'opzione Pressione e fare clic su Avvia per iniziare a registrare la forza manuale dell'operatore durante il funzionamento. Il software registrerà automaticamente l'intensità della manipolazione e genererà una tabella di dati sul disco locale in cui si troveranno i dati nel nome del file PressureSensor .

9. Statistiche dei dati

NOTA: Il software SPSS26.0 è stato utilizzato per l'analisi statistica, Graphpad Prism9.0.0 per la produzione di grafici a barre e l'immagine J per l'analisi del valore di grigio delle bande proteiche.

  1. Analizza e presenta tutti i dati come media ± deviazione standard (media ± SD).
    NOTA: Lo standard del test era α = 0,05 e P ≤ 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. Il test di Fisher è stato utilizzato perché i dati sono stati analizzati mediante analisi della varianza e della normalità e conformi alle caratteristiche di distribuzione normale e all'omogeneità della varianza.

Risultati

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La manipolazione spinale selettiva può promuovere l'aumento di peso corporeo nei ratti neonati con paralisi cerebrale.
Durante il trattamento, il peso corporeo è stato misurato nei giorni postnatali 3, 14, 28, 42 e 61 (Figura 4, Tabella 3). Il terzo giorno dopo la nascita, il peso corporeo del gruppo Sham era di 5,53 ± 0,035 g e il peso corporeo del gruppo di controllo era di 3,15 ± 0,43 g. Il peso corporeo del gruppo di trattamento era di 4,42 ± 0,13 g e non era significativamente diverso da quello dei gruppi Sham e Control prima del modello.

Il 14° giorno postnatale, il peso corporeo del gruppo Sham era di 35,97 ± 1,019 g, il peso corporeo del gruppo di controllo era di 28,00 ± 0,7403 g e il peso corporeo del gruppo di trattamento era di 33,78 ± 3,705 g. Non c'è stata alcuna differenza significativa nel peso corporeo tra i gruppi di trattamento e sham. Il peso del gruppo di trattamento rispetto al gruppo di controllo è stato statisticamente significativo (P < 0,01).

Il 28° giorno dopo la nascita, il peso corporeo del gruppo Sham era di 104,9 ± 3,534 g, il peso corporeo del gruppo di controllo era di 80,35 ± 6,767 g e il peso corporeo del gruppo di trattamento era di 96,73 ± 7,638 g. Il gruppo di trattamento è stato confrontato con il gruppo di controllo ed è risultato statisticamente significativo (P < 0,01).

Il giorno 42 dopo la nascita, il peso corporeo del gruppo Sham era di 194,1 ± 4,333 g, il peso corporeo del gruppo di controllo era di 138,0 ± 6,029 g e il peso corporeo del gruppo di trattamento era di 173,9 ± 5,433 g. C'è stata una differenza statisticamente significativa nel peso corporeo tra i gruppi di trattamento e di controllo (P < 0,0001).

Il giorno 61 dopo la nascita, il peso corporeo del gruppo Sham era di 321,5 ± 5,675 g, il peso corporeo del gruppo di controllo era di 230,3 ± 5,198 g e il peso corporeo del gruppo di trattamento era di 268,9 ± 15,22 g. P < 0,0001 è stato considerato statisticamente significativo. C'era una differenza statisticamente significativa nel peso corporeo tra i gruppi di trattamento e di controllo a P < 0,0001.

La manipolazione spinale selettiva può migliorare l'efficace funzione di equilibrio motorio della paralisi cerebrale.
Il 61° giorno dopo la nascita, dopo la fine del trattamento, abbiamo eseguito il test rotarod da fatica. Il primo tempo di caduta di ciascun gruppo è stato di 296,1 ± 1,65 s nel gruppo Sham, 102,7 ± 7,73 s nel gruppo di controllo e 220,1 ± 8,04 s nel gruppo di trattamento. C'era una differenza significativa tra il gruppo fittizio e quello di controllo (P < 0,0001). La differenza tra il gruppo di trattamento e il gruppo di controllo era statisticamente significativa (P < 0,0001) e la differenza tra il gruppo di trattamento e il gruppo fittizio era statisticamente significativa (P < 0,0001) (Figura 5, Tabella 4)

Il 61° giorno dopo la nascita, dopo la fine del trattamento, i punteggi di Foot-fault dei gruppi Sham e Control erano rispettivamente 5,53 ± 0,03 e 3,15 ± 0,43. Il punteggio del gruppo di trattamento, 4,42 ± 0,13, era significativamente inferiore a quello del gruppo Sham (P < 0,0001). Il punteggio del gruppo di trattamento era significativamente più alto di quello del gruppo di controllo (P < 0,0001). Rispetto al gruppo di trattamento e al gruppo Sham, la differenza era statisticamente significativa (P < 0,0001) (Figura 6, Tabella 5).

La manipolazione spinale selettiva può regolare il livello di secrezione dell'ormone della crescita nella paralisi cerebrale.
I campioni di tessuto sono stati prelevati il giorno 32 postnatale e l'ipotalamo dei ratti con paralisi cerebrale è stato selezionato per il Western blot e sono stati selezionati gli anticorpi primari e secondari corrispondenti: gli anticorpi utilizzati erano l'anticorpo primario anti-ormone della crescita, l'anticorpo anti-recettore dell'ormone della crescita, l'anticorpo anti-beta actina di riferimento interno per gli anticorpi primari e l'anti-IgG H&L (HRP) di capra (1/10000) per l'anticorpo secondario. La manipolazione spinale selettiva può promuovere la crescita e lo sviluppo di ratti neonati con paralisi cerebrale regolando l'espressione dell'ormone della crescita (GH) e del recettore dell'ormone della crescita (GHR) (Figura 7, Tabella 6)26.

Promuovere la crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale può migliorare il contenuto di serotonina e noradrenalina nell'ippocampo, migliorando così la capacità di apprendimento e la memoria27.

La manipolazione spinale selettiva può migliorare efficacemente la temperatura locale dei punti di agopuntura (Figura 8, Tabella 7).
La termografia a infrarossi è stata utilizzata per rilevare la temperatura dell'area locale dei punti di agopuntura prima e dopo il trattamento nel gruppo di trattamento. È stato riscontrato che la temperatura è stata mantenuta a 32,92 ± 0,55 °C prima del trattamento, 36,32 ± 0,15 °C subito dopo il trattamento e 35,32 ± 0,28 °C 2 minuti dopo il trattamento. La temperatura era di 34,61 ± 0,17 °C 5 minuti dopo la fine del trattamento e di 34,28 ± 0,60 °C 10 minuti dopo la fine del trattamento. Le differenze erano statisticamente significative rispetto alla temperatura immediata prima della fine del trattamento e all'area locale dei punti di agopuntura 2 minuti, 5 minuti e 10 minuti dopo il trattamento (P < 0,05). Dopo la manipolazione spinale selettiva, la temperatura dell'area locale dei punti di agopuntura nel gruppo di trattamento è stata aumentata e mantenuta in una certa misura.

figure-results-1
Figura 1: Riflesso raddrizzante. (A) Rappresentazione schematica dell'esperimento del riflesso raddrizzante. Il test del riflesso di raddrizzamento è stato eseguito il 4° giorno dopo la nascita (il secondo giorno dopo la modellazione) per verificare il successo della modellazione. (B) Grafico a barre del test del riflesso di raddrizzamento in ciascun gruppo (n = 6, media ± SD). Nota: ns indica P > 0,05 e nessuna differenza statistica. indica un P < 0,0001, che indica una differenza molto significativa. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 2: Manipolazione spinale selettiva. (A) Manipolazione dei cuccioli prima della manipolazione. I ratti neonati venivano messi nel palmo della mano dell'operatore e tenuti tranquilli, che era l'ambiente del campo. (B) Rappresentazione della manipolazione spinale selettiva. Premere e impastare i muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 3: Mappa dei punti di agopuntura sul dorso del ratto umano rispetto a quello SD. (A) Ratto umano e (B) ratto SD. C7: settima vertebra cervicale; GV14: Dazhui (GV14), localizzazione: tra la settima vertebra cervicale e la prima vertebra toracica, linea mediana dorsale; T3: terza vertebra toracica; BL13: Feishu (BL13), posizione: tra le due costole al di sotto della terza vertebra toracica; T5: quinta vertebra toracica; BL15: punto Xinshu, situato tra i due lati della costola inferiore della quinta vertebra toracica; T7: settima vertebra toracica; BL17: Punto Geshu, posizione: costole inferiori e inferiori della settima vertebra toracica; BL18: Punto di Ganshu, posizione: costole inferiori e inferiori della settima vertebra toracica; T11: undicesima vertebra toracica; GV6: punto di Jizhong, situato tra l'undicesimo e il dodicesimo processo spinoso della vertebra toracica; BL20: Punta Pishu, situata tra le due costole al di sotto della dodicesima vertebra toracica; L2: seconda colonna lombare; GV4: Mingmen (GV4), localizzazione: la linea mediana dorsale, la depressione sotto il secondo processo spinoso lombare; BL23: Punto Shenshu, situato su entrambi i lati della seconda colonna lombare. GV20: Baihui (GV20), ubicazione: osso parietale mediano; GV16, punto Fengfu, posizione: depressione dorsale dell'articolazione occipito-atlantoassiale dietro la cresta occipitale. La posizione dei punti di agopuntura nel corpo umano è altamente coerente con la posizione dei punti di agopuntura negli animali dalla posizione anatomica. Il punto di risposta anomalo era vicino al punto di proiezione della superficie corporea innervata. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 4: Grafico a barre della misurazione del peso in ciascun gruppo (n = 6, media ± DS). Nota: ns P >0,05, nessuna differenza statistica; **P < 0,01, ***P < 0,001,****P < 0,0001, la differenza era statisticamente significativa. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

figure-results-5
Figura 5: Grafico a barre del tempo della prima caduta del test Roat-rod in ciascun gruppo (n = 6, media ± SD). Nota: ****P < 0,0001, la differenza era statisticamente significativa. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 6: Grafico a barre dei punteggi di Foot-fault in ciascun gruppo (n = 6, Media ± SD). Nota: ****P < 0,0001, la differenza era statisticamente significativa. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

figure-results-7
Figura 7: Bande di western blot del GH e del recettore del GH. Il western blot è stato utilizzato per rilevare la secrezione dell'ormone della crescita a livello biologico molecolare in ciascun gruppo ed è stato osservato l'effetto della manipolazione spinale selettiva sull'ormone della crescita. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

figure-results-8
Figura 8: Monitoraggio della temperatura prima e dopo il trattamento. (Pannello superiore) Immagini termiche scattate da una termocamera a infrarossi. La temperatura (°C) dell'area locale dei punti di agopuntura è stata registrata da una termocamera a infrarossi prima e dopo il trattamento con tuina. (A) Prima del trattamento tuina. (B) Temperatura immediatamente al termine del trattamento. (C) Temperatura locale dei punti di agopuntura 2 minuti dopo il trattamento. (D) Temperatura locale del punto di agopuntura 5 minuti dopo la fine del trattamento. (E) temperatura locale del punto di agopuntura 10 minuti dopo il trattamento. (Pannello inferiore) Grafico a barre del monitoraggio della temperatura prima e dopo il trattamento (n = 3, media ± DS). *P < 0,05, P < 0,01, * * * * * *P < 0,001, * * * *P < 0,0001, la differenza è statisticamente significativa. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

GruppoNumero di casi (n)Riflesso/i raddrizzante/i
Finto60,77 ± 0,10
Controllo619.00 ± 2.04*
Trattamento619,77 ± 0,55 #

Tabella 1: Le statistiche temporali del riflesso di raddrizzamento nei ratti neonati con paralisi cerebrale (media ± DS; n = 6). I cuccioli di ogni gruppo sono stati sottoposti al test del riflesso di raddrizzamento il 4° giorno dopo la nascita (il 2° giorno dopo il modellamento) per verificare se il modello aveva successo. * Rispetto al gruppo Sham, P < 0,0001; # rispetto al gruppo di controllo, P < 0,0001.

PunteggioStandard per la valutazione
1Quando il giovane ratto viene posizionato sulla scala orizzontale, il piede scivola via quando sopporta il peso, influenzando la deambulazione
2Quando il giovane ratto viene posizionato sulla scala, il piede scivola quando sopporta il peso, ma non influisce sulla deambulazione
3Quando il giovane ratto viene posizionato sulla scala orizzontale, il ratto sposta rapidamente il piede al gradino successivo della scala che sopporta il peso
4Quando il giovane ratto viene posizionato sulla scala orizzontale, il ratto posiziona parzialmente il piede e si muove attraverso la scala portando il peso
5Quando il giovane ratto viene posizionato sulla scala orizzontale, il ratto mette il piede su un gradino e si sposta rapidamente su un altro gradino
6Quando il giovane ratto viene posizionato sulla scala orizzontale, il ratto posiziona correttamente i cuscinetti delle zampe e sopporta completamente il peso corporeo

Tabella 2: Tabella standard dei punteggi del test del foot-fault

Ora (giorno)Numero di casi (n)Gruppo
FintoControlloTrattamento
P368,52 ± 0,278,60 ± 0,088,45 ± 0,28D
P14635,97 ± 1,0128,00 ± 0,74*33,78 ± 3,70Ñ
P286104,9 ± 3,5380,35 ± 6,76*96.73 ± 7.63Ñ
P426194,1 ± 4,33138,0 ± 6,02*173,9 ± 5,43#D
P616321,5 ± 5,67230,3 ± 5,19*268.9 ± 15.22#D

Tabella 3: I risultati della prova di peso di ciascun gruppo (media ± DS) (g). Nota: Ñ Rispetto al gruppo di controllo, P < 0,01; ° Rispetto al gruppo Sham, P < 0,01; à Rispetto al gruppo di controllo, P < 0,001; * Rispetto al gruppo Sham, P < 0,0001; # Rispetto al gruppo di controllo, P < 0,0001; D Rispetto al gruppo Sham, P < 0,0001.

GruppoNumero di casi (n)Barra di rotazione/tempo/s
Finto6296,1 ± 1,65
Controllo6102,7 ± 7,73*
Trattamento6220,1 ± 8,04#D

Tabella 4: Il test Rotarod dei ratti neonati in ciascun gruppo (media ± DS) (s). Nota: * Rispetto al gruppo Sham, P < 0,0001; # Rispetto al gruppo di controllo, P < 0,0001; D Rispetto al gruppo fittizio, P < 0,0001.

GruppoNumero di casi (n)Punteggio Foot-Fault
Finto65,53 ± 0,03
Controllo63,15 ± 0,43*
Trattamento64,42 ± 0,13#D

Tabella 5: I punteggi di errore del piede di ciascun gruppo (media ± SD). Nota: * Rispetto al gruppo Sham, P < 0,0001; # Rispetto al gruppo di controllo, P < 0,0001; D Rispetto al gruppo fittizio, P < 0,0001.

GruppoGHGHR
Finto2,325 ± 0,8301,469 ± 0,265
Controllo1,563 ± 0,070#1,563 ± 0,070Ñ
Trattamento2,471 ± 0,956*2,471 ± 0,956&

Tabella 6: Dati sul valore di grigio della banda di Western blot dell'ormone della crescita e dell'ormone della crescita (n = 10). GH:* Il confronto a coppie tra il gruppo di trattamento e il gruppo di controllo (P = 0,020 < 0,05) ha mostrato una differenza statisticamente significativa; # Il confronto a coppie tra il gruppo fittizio e il gruppo di controllo (P = 0,022 < 0,05) ha mostrato una differenza significativa; Il confronto a coppie tra il gruppo di trattamento e il gruppo Sham non ha mostrato alcuna significatività statistica (P = 0,076 > 0,05); GHR: e il confronto a coppie tra il gruppo di trattamento e il gruppo di controllo (P = 0,024 < 0,05) ha mostrato una differenza significativa; Ñ Il confronto a coppie tra il gruppo Sham e il gruppo Model (P = 0,021 < 0,05) ha mostrato una differenza statisticamente significativa; Il confronto a coppie tra il gruppo di trattamento e il gruppo Sham non ha mostrato alcuna significatività statistica (P = 0,085 > 0,05).

Tempo di terapiaNumero di casi (n)Temperatura
Prima del trattamento332,92 ± 0,55
Immediatamente336,32 ± 0,15*
Dopo 2 minuti335.32 ± 0.28#
Dopo 5 min334,61 ± 0,17Ñ
Dopo 10 min334.28 ± 0.60Dà

Tabella 7: Risultati del monitoraggio della temperatura prima e dopo il trattamento (media ± DS) (°C). Nota: * Rispetto a quelli prima del trattamento, P < 0,0001; # Rispetto a quello prima del trattamento, P < 0,001; D Rispetto a 0 minuti dopo il trattamento, P <0,001; Ñ Rispetto a prima del trattamento, P < 0,01; à Rispetto al pretrattamento, P < 0,05.

Discussione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Poiché l'ischemia e l'ipossia sono importanti fattori patogenetici della paralisi cerebrale, il metodo riconosciuto a livello internazionale per stabilire il modello di paralisi cerebrale è combinato con l'ipossia per preparare il modello di paralisi cerebrale 16,28,29,30. Quando si sviluppa la paralisi cerebrale, provoca un ritardo dello sviluppo globale, compreso il peso e la funzione motoria, che può essere correlato al livello di secrezione dell'ormone della crescita31. La manipolazione spinale selettiva è stata utilizzata per trattare ratti neonati con paralisi cerebrale. Il peso corporeo è stato monitorato durante il trattamento e sono stati eseguiti test comportamentali come il test di Rotarod, il punteggio del difetto del piede e l'ormone della crescita. La temperatura dei punti di agopuntura locali è stata osservata prima e dopo il trattamento. Dopo che il modello di ischemia-ipossia è stato stabilito, il ratto neonato con paralisi cerebrale ha perso peso. Tuttavia, con l'estensione del massaggio, è stato riscontrato che l'aumento di peso del gruppo di trattamento era significativamente migliore di quello del gruppo di controllo. Aveva anche evidenti vantaggi nella regolazione della secrezione dell'ormone della crescita. Questi risultati indicano che la manipolazione spinale selettiva può migliorare efficacemente la crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale. Inoltre, poiché l'arteria carotide comune sinistra è stata utilizzata per stabilire il modello di ischemia e coagulazione combinata con ipossia, ci deve essere un danno alla corteccia sinistra, che porta a una compromissione della funzione motoria. Dopo il trattamento, abbiamo utilizzato il test Rotarod e il punteggio di errore del piede per rilevare la capacità comportamentale dei ratti neonati con paralisi cerebrale 32,33,34. È stato riscontrato che la funzione motoria dei ratti con paralisi cerebrale è migliorata dopo la manipolazione spinale selettiva35. La manipolazione spinale selettiva può migliorare efficacemente la crescita, lo sviluppo e la funzione motoria dei ratti neonati con paralisi cerebrale.

Il massaggio tradizionale cinese si basa sui punti di agopuntura e sul sistema dei meridiani. Il progetto di questo esperimento è principalmente quello di osservare l'influenza del massaggio tradizionale cinese sulla crescita e lo sviluppo di ratti neonati con paralisi cerebrale. Il trattamento di massaggio viene eseguito principalmente sul meridiano della vescica della prima e seconda linea laterale del piedi-taiyang e sul meridiano Du, ma a differenza dell'agopuntura, c'è una chiara posizione del punto di stimolazione. Il massaggio è un tipo di stimolazione facciale in cui le dita dell'operatore vengono utilizzate per l'operazione addominale e la superficie di contatto ha una certa area, un diametro di circa 1,0 cm circolare. Anche i meridiani hanno una certa portata; tuttavia, la superficie di contatto con le dita umane è più ampia dell'area dei punti di agopuntura del ratto SD. Ciò significa che esiste una procedura operativa inevitabile in alcune località non agopuntuali. Pertanto, non abbiamo impostato separatamente un gruppo di massaggio non meridiano come controllo quando abbiamo assegnato i gruppi per questo studio.

Il massaggio spinale selettivo seleziona la colonna vertebrale e i muscoli su entrambi i lati della colonna vertebrale per la stimolazione durante l'operazione, che può alleviare gli spasmi muscolari locali, promuovere la circolazione sanguigna locale e migliorare la funzione dell'area di innervazione corrispondente per ottenere l'effetto di alleviare il meridiano e i collaterali e la regolazione e il trattamento generali. Incarna pienamente l'integrazione del concetto olistico della medicina tradizionale cinese, la teoria dei meridiani della medicina tradizionale cinese e il principio dell'innervazione dei nervi spinali, e prende in considerazione l'insieme mentre esegue il trattamento locale della paralisi cerebrale8.

Nella procedura, il metodo di massaggio sulla colonna vertebrale e sui muscoli e sui legamenti su entrambi i lati del trattamento, ovvero il meridiano Du e il meridiano della vescica della prima e seconda linea laterale del piede-taiyang della stimolazione del massaggio, può svolgere un ruolo nel collegare i punti di agopuntura della schiena, il midollo spinale e il cervello. Pertanto, quando eseguiamo operazioni manipolative sui punti posteriori di un ratto neonato, possiamo stimolare i punti posteriori e i meridiani a far scorrere il qi e il sangue, regolare le funzioni dei visceri del corpo e quindi influenzare le funzioni del midollo spinale e del cervello per promuovere la crescita e lo sviluppo del ratto neonato. Nel complesso, stimolando il meridiano Du e il meridiano della vescica della prima e della seconda linea laterale del piede-taiyang, lo Yang di tutto il corpo può essere mobilitato e la resistenza complessiva alla malattia del corpo può essere migliorata, il che riflette il concetto generale della medicina tradizionale cinese 16,26,35,36,37,38 . Il meridiano Du ha origine dal basso ventre del corpo umano e raggiunge la sommità della testa lungo la colonna vertebrale, regolando il qi Yang del corpo umano36. Il meridiano della vescica del Piede-Taiyang corre principalmente lungo entrambi i lati del vaso governatore, e i punti back-shu di cinque organi zang si trovano sulla prima linea laterale del meridiano della vescica del Piede-Taiyang, coinvolto nel trattamento delle malattie degli organi zangfu39,40. I meridiani e i collaterali sono divisi in collaterali fluttuanti, collaterali minuti e regioni cutanee. Pertanto, quando eseguiamo la procedura sulla pelle posteriore di un ratto neonato con paralisi cerebrale, possiamo operare lungo la direzione dei meridiani e stimolare efficacemente i collaterali galleggianti, i collaterali minuti e le regioni cutanee. Pertanto, stimolando i punti di agopuntura e i meridiani a far scorrere il qi e il sangue, la funzione dei visceri del corpo viene regolata e si traduce in un aumento di peso dei cuccioli8.

Abbiamo trovato punti di reazione simili a cordoni cordonali sul meridiano della vescica urinaria del piedi-taiyang sulla schiena di bambini con paralisi cerebrale e la termografia a infrarossi è stata utilizzata per rilevare la temperatura anormale di alcuni punti di agopuntura. In combinazione con il principio dell'innervazione del nervo spinale, abbiamo scoperto che questi punti di reazione erano vicini ai punti di proiezione sulla superficie dell'innervazione nervosa, il che è anche coerente con il principio della resezione selettiva della radice del nervo spinale per il trattamento della paralisi cerebrale (Figura 3)41. I punti di agopuntura infondono meridiani, qi e sangue e collegano la superficie del corpo e gli organi zang-fu42,43. Pertanto, nel trattamento dei ratti neonati con paralisi cerebrale, la manipolazione spinale selettiva viene utilizzata per operare sui punti di agopuntura sulla schiena, attivando i punti di agopuntura locali, sbloccando i meridiani, il qi e il sangue e i punti di agopuntura sono in uno stato sensibile al calore44. Dopo l'operazione e il trattamento, è ancora possibile mantenere una certa temperatura.

L'uso del metodo del twirling sull'arto destro può alleviare lo spasmo del tessuto muscolare locale, diminuire i meridiani locali e migliorare la disfunzione locale. Infine, scegliamo di eseguire la massoterapia sulla testa perché la testa è la testa di tutto lo Yang, dove convergono l'essenza qi e il sangue dei cinque organi zang-fu. Il trattamento di questa parte può riconciliare Yin e Yang e ottenere l'effetto della riabilitazione generale16,18. In conclusione, la manipolazione spinale selettiva può migliorare efficacemente il peso corporeo, la funzione motoria e l'ormone della crescita dei ratti neonati con paralisi cerebrale per promuovere la crescita e lo sviluppo.

Ci sono ancora alcuni punti importanti a cui prestare attenzione durante l'operazione. Innanzitutto, va notato che il ratto neonato dovrebbe adattarsi alla temperatura del palmo e la condizione di agitazione è stabile prima del trattamento. Gli operatori devono utilizzare guanti monouso per evitare l'abbandono delle femmine di ratto a causa di anomalie dopo il contatto diretto con la pelle degli operatori. Prima dell'operazione, gli operatori devono essere uniformemente addestrati alle loro manipolazioni e possono operare dopo aver superato la valutazione. In questo caso, abbiamo utilizzato uno specifico tester di manipolazione per garantire la standardizzazione dell'operazione. Poiché abbiamo osservato variazioni di peso durante la crescita nei ratti neonati con paralisi cerebrale, la manipolazione deve essere controllata regolarmente. Quando si preme e si impasta, la pressione verso il basso deve essere verticale e la forza deve essere da leggera a pesante, stabile e continua in modo che la sensazione di stimolazione possa raggiungere completamente i tessuti profondi del corpo. Non usare la violenza rapida. La gamma di impasto dovrebbe essere piccola e grande e la forza dovrebbe essere prima leggera e pesante. La gamma di impasto dovrebbe essere piccola e grande e la forza dovrebbe essere prima leggera e pesante. Il funzionamento del metodo di impastamento deve raggiungere lo strato muscolare e legamentoso. La forza manuale era di 1,77 ± 0,54 N quando monitorata dal tester manuale. Al contrario, quando viene eseguito lo sfregamento, viene trattata solo la superficie della pelle. Inoltre, la pelle dei ratti neonati con paralisi cerebrale è delicata e un funzionamento improprio può portare a danni alla pelle.

Come trattamento esterno della medicina tradizionale cinese, la manipolazione spinale selettiva è un supplemento efficace ai metodi di trattamento esistenti della paralisi cerebrale ed è un metodo di trattamento diversificato della paralisi cerebrale. Prende in considerazione sia il trattamento globale che quello locale, che possono fornire ai bambini con paralisi cerebrale una riabilitazione completa e possono portare migliori benefici economici e effetti sociali alla famiglia e alla società dei bambini. Tuttavia, questa tecnica presenta anche alcune carenze perché gli operatori hanno diverse comprensioni e padronanze della tecnica, il grado di unità della tecnica è basso, può verificarsi la deviazione dell'effetto terapeutico e l'effetto curativo non è esatto. Il passo successivo è fare in modo che la manipolazione raggiunga uno standard uniforme. Sebbene abbiamo confermato che la manipolazione spinale selettiva influisce positivamente sulla crescita e lo sviluppo dei ratti neonati con paralisi cerebrale infantile e può svolgere un ruolo terapeutico regolando l'omeostasi infiammatoria, il suo meccanismo d'azione sulla neuroplasticità e sulla rigenerazione della sostanza bianca deve ancora essere studiato.

A causa della certezza dell'effetto curativo e della teoria scientifica della manipolazione spinale selettiva, basata sulla teoria operativa della manipolazione spinale selettiva, questo insieme di manipolazioni può essere esteso al trattamento di altre malattie pediatriche, come il ritardo della crescita dei bambini, il ritardo dello sviluppo del linguaggio, ecc. Fornire idee di ricerca arricchisce il sistema di trattamento per la maggior parte degli operatori sanitari e dei ricercatori. Pertanto, questo articolo è favorevole alla divulgazione e all'applicazione della tecnica.

Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori non hanno conflitti di interesse finanziari o di altro tipo concorrenti nell'ambito di questo lavoro.

Ringraziamenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo lavoro è stato sostenuto dal Programma Generale della Fondazione Nazionale di Scienze Naturali della Cina (82374614), dal Grande Progetto Biomedico del Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia dello Yunnan (202102AA100016), dal Grande Progetto Congiunto di Ricerca di Base Applicata del Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia dello Yunnan - Università di Medicina Tradizionale Cinese dello Yunnan (201901AI070004), Supportato dal Laboratorio chiave di agopuntura, moxibustione e massaggio per la prevenzione e il trattamento dell'encefalopatia nei college e nelle università della provincia dello Yunnan (2019YGZ04), Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia dello Yunnan - Progetto giovanile del Programma di ricerca di base della provincia dello Yunnan (202101AU070002), Programma di laurea del Fondo per la ricerca scientifica del Dipartimento dell'istruzione della provincia dello Yunnan, (2023Y0433); Fondazione per la ricerca scientifica del Dipartimento dell'Istruzione della provincia dello Yunnan, (2023Y0462).

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Piastre a 96 pozzettiBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determinazione della concentrazione proteica
Anticorpo anti-beta actinaAbacmAb8227Diluizione: 1/2000
Anticorpo anti-ormone della crescitaAbacmAb1268820,5 &; g (0,5 ng/corsia)
Anticorpo anti-recettore dell'ormone della crescitaAbacmAb202964Diluizione: 1/1000
Microscopio operatorio di baseShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101L'arteria carotide comune è stata isolata al microscopio durante la modellazione
BCA sviluppatoreBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determinazione della concentrazione
proteicaSistema di imaging a chemiluminescenzaShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Imaging a bande proteiche
Marcatore prestained a colori a carico direttoBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Produttore automatico di ghiaccio per neveHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023
Kit substrato luminescente ECLBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConversione di immagini latenti in pellicola esposta in immagini visibili
Bagno d'acqua termostatico riscaldato elettricamenteTAISITE INSTRUMENTDK-98-III giovani ratti sono stati rianimati dopo la modellazione
Bilance elettronicheKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002È stato misurato
il peso corporeo dei giovani rattiEmostatico tedesco piccolo elettrostatico bianco della penna di coagulazione elettricaHaohangL55× W125&volte; H37È stato utilizzato per coagulare l'arteria carotide comune sinistra
GuantoJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017Per l'operazione di massaggio
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Soluzione elettroforetica, Configura il fluido di trasferimento
Capra Anti-ConiglioIgG H& L (HRP) AbacmAb6721Diluizione: 1/10000
Macchina per acqua ultrapura da laboratorio intelligenteChongqing huachuag water treatment engineering co., LTDN/AFiltrazione (15 L)
IsofluranoShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198L'anestesia è stata mantenuta per induzione nei ratti giovani
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Software di analisi delle immagini a infrarossi
Macinatore di tessuti ad alta velocità a bassa temperaturaWuhan Servicebio technology CO., LTDSKZ3F20200191Macinazione dei tessuti
MetanoloGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configurare il fluido di trasferimento
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193
Spettrofotometro per micropiastre a spettro multiskanTECANSparkL'assorbanza e la concentrazione delle proteine tissutali sono state rilevate
Guanti intelligenti con rilevamento della pressioneJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveViene utilizzato per misurare la forza manipolativa dell'operatore
Membrana PVDFMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Centrifuga refrigerataHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuga
Termocamera tre in unoFOTIRC226S (384 x 288)Misurazione della temperatura
Lisato RIPABeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010
Oscillatore termostatico a bagno d'acqua con display digitale SHA-CAChangzhou Aohua Strumento Co. LTDSHA-CAI giovani ratti sono stati utilizzati nell'ipossia
Apparato rotarod di fatica a sei rattiShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703La funzione del motore CP è stata rilevata
Latte scremato in polvereGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Fertilizzante liquido
SPF mangime per l'allevamentoSPF (Pechino)biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285266Le femmine di ratto in allattamento sono state alimentate
con mangime di mantenimento SPFSPF (Beijing) biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285267I cuccioli sono stati nutriti dopo lo svezzamento
Piastra chirurgicaShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002Il modello di tavolo operatorio è stato stabilito in giovani ratti
TS-200 Agitatore orbitaleHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SFissazione su gel
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configura TBST 
ZS-MV Macchina per anestesia portatileZHONGSHI SCIENCE & TECNOLOGIAZS-MV-IL'anestesia è stata indotta e mantenuta negli animali da esperimento
per la produzione di ghiaccio per tessuti litici

Riferimenti

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