Il presente protocollo descrive il metodo per l'analisi della flora intestinale utilizzando il sequenziamento del gene rRNA 16S basato su Illumina e fornisce un quadro per valutare l'efficacia dei decotti a base di erbe.
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Articolo metodologico
Effetti del Desmodium caudatum sugli ormoni gastrointestinali e sulla flora intestinale nei ratti con gastrite
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Al fine di esplorare preliminarmente gli effetti del Desmodium caudatum sulla gastrite e sulla flora intestinale nei ratti, è stato stabilito un modello di ratto con gastrite cronica utilizzando il classico metodo del salicilato di sodio. Diciotto ratti SPF sono stati divisi in tre gruppi: il gruppo di controllo (Gruppo C), il gruppo modello (Gruppo M) e il gruppo di trattamento (Gruppo T). Sezioni patologiche della parete gastrica sono state prelevate dai ratti di ciascun gruppo. Inoltre, le concentrazioni di gastrina e malondialdeide nel siero dei ratti di ciascun gruppo sono state determinate mediante ELISA. Inoltre, gli effetti di D. caudatum sulla flora intestinale dei ratti con gastrite sono stati esplorati attraverso un confronto dettagliato delle comunità batteriche intestinali nei tre gruppi, impiegando il sequenziamento del gene rRNA 16S basato su Illumina. I risultati hanno indicato che il decotto di D. caudatum potrebbe ridurre il contenuto di malondialdeide e aumentare il contenuto di gastrina. Inoltre, è stato scoperto che il decotto di D. caudatum migliora la diversità e l'abbondanza della flora intestinale, esercitando un impatto positivo sul trattamento della gastrite regolando e ripristinando la flora intestinale.
Introduzione
La gastrite cronica (CG), una delle malattie cliniche più comuni, è caratterizzata da alterazioni infiammatorie croniche e persistenti dell'epitelio della mucosa gastrica, che viene frequentemente e ripetutamente attaccato da vari fattori patogeni1. Il tasso di incidenza della CG è al primo posto tra tutti i tipi di malattie dello stomaco, rappresentando dal 40% al 60% del tasso di servizio ambulatoriale nel Dipartimento di Gastroenterologia2. Inoltre, il tasso di incidenza aumenta generalmente con l'età, soprattutto nei soggetti di mezza età e più anziani3. Indubbiamente, la CG riduce significati....
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Protocollo
Le procedure per la cura e l'uso degli animali sono state approvate dal Comitato Etico dell'Università Normale di Mianyang e sono state seguite rigorosamente tutte le normative istituzionali e governative pertinenti riguardanti l'uso etico degli animali. Per il presente studio sono stati utilizzati ratti SPF (specie Kunming, sia maschi che femmine, del peso di 180-220 g). Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali). Tutti gli animali sono stati alloggiati in un ambiente privo di agenti patogeni e hanno avuto accesso al cibo ad libitum .
1. Preparazione dei reagenti
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Risultati
I risultati della sezione patologica della parete dello stomaco sono illustrati nella Figura 1. Rispetto al gruppo C, il gruppo M ha mostrato una lieve atrofia della parete gastrica e una lieve infiammazione. Tuttavia, rispetto al gruppo M, il gruppo T non ha mostrato infiammazioni, metaplasie intestinali o atrofia evidenti. Ciò suggerisce che il decotto di D. caudatum può migliorare efficacemente la gastrite.
I risultati del dosaggio dell'ormone gastroin.......
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Discussione
D. caudatum, una medicina popolare comunemente usata dalla nazionalità Qiang12, ha mostrato un'efficacia significativa nel trattamento delle malattie gastrointestinali. Con il progresso della moderna ricerca farmacologica, lo squilibrio della flora derivante dallo squilibrio della microecologia gastrointestinale è identificato come un fattore chiave nelle malattie gastrointestinali acute e croniche22,23. Alcuni microrganismi nel t.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato dai progetti chiave di ricerca e sviluppo del Dipartimento di scienza e tecnologia della provincia di Sichuan (2020YFS0539).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Analisi della diversità alfa | Mothur 1.30.2 | ||
| Kit di estrazione su gel di acido desossiribonucleico (DNA) AxyPrep | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
| Analisi della diversità | Qiime 1.9.1 | ||
| Frigorifero criogenico | Forma-86C Congelatore | ||
| Desmodium caudatum | L'ospedale di medicina tradizionale cinese di Beichuan Qiang Autonomous County | ||
| E.Z.N.A. kit suolo | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
| Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
| Multiskan Spectre | spettrali Max i3 | ||
| OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
| Statistiche OTU | Usearch 7.0 | ||
| Strumento PCR | TransGen AP221-02 | ||
| Strumento PCR | ABI GeneAmp 9700 | ||
| QuantiFluor-ST a doppio filamento sistema di DNA (dsDNA) | Promega Corp. | ||
| Annotazione di classificazione della sequenza | RDP Classifier 2.11 | ||
| Salicilato di sodio | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
| RATTI SPF | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
| SPSS 18.0 | IBM |
Riferimenti
- Marginean, C. M., et al. The importance of accurate early diagnosis and eradication in Helicobacter pylori infection: pictorial summary review in children and adults. Antibiotics (Basel). 12 (1), 60(2022).
- Sipponen, P., Maaroos, H. I.
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Ristampe e permessi
