Questo studio descrive un metodo rapido ed efficace per l'analisi dei componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale attraverso la dissoluzione del coagulo, la colorazione cellulare e l'esame del sangue di routine.
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Articolo metodologico
Un approccio completo per analizzare i componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La trombosi cerebrale, un coagulo di sangue in un'arteria o vena cerebrale, è il tipo più comune di infarto cerebrale. Lo studio dei componenti cellulari dei coaguli di sangue cerebrale è importante per la diagnosi, il trattamento e la prognosi. Tuttavia, gli attuali approcci allo studio dei componenti cellulari dei coaguli si basano principalmente sulla colorazione in situ , che non è adatta per lo studio completo dei componenti cellulari perché le cellule sono strettamente avvolte nei coaguli. Studi precedenti hanno isolato con successo un enzima fibrinolitico (sFE) da Sipunculus nudus, che può degradare direttamente la fibrina reticolata, rilasciando i componenti cellulari. Questo studio ha stabilito un metodo completo basato sull'sFE per studiare i componenti cellulari del trombo cerebrale. Questo protocollo include la dissoluzione del coagulo, il rilascio cellulare, la colorazione cellulare e l'esame del sangue di routine. Secondo questo metodo, i componenti cellulari potrebbero essere studiati quantitativamente e qualitativamente. Vengono mostrati i risultati rappresentativi degli esperimenti che utilizzano questo metodo.
Introduzione
La malattia cerebrovascolare è una delle tre principali malattie che possono minacciare la salute umana, tra le quali la malattia cerebrovascolare ischemica rappresenta oltre l'80%. La trombosi cerebrale e la trombosi venosa cerebrale sono oggi le malattie cerebrovascolari ischemiche più preoccupanti, causate principalmente da coaguli di sangue cerebrale 1,2. Se il trattamento non viene eseguito correttamente, avrà alti tassi di disabilità e mortalità e un alto tasso di recidiva dopo la dimissione3.
Recentemente, un numero crescente di studi ha dimostrato che....
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Protocollo
La ricerca è stata condotta in conformità con le linee guida istituzionali del Comitato di Etica Medica dell'Università di Huaqiao. I coaguli di sangue cerebrale sono stati rimossi chirurgicamente e raccolti presso il Quanzhou First Hospital, affiliato alla Fujian Medical University, con il consenso informato dei pazienti.
1. Pretrattamento del coagulo di sangue
- Disporre i coaguli su un piatto pulito, aggiungere 5 ml di soluzione fisiologica con una pinzetta, agitare delicatamente il piatto e rimuovere la soluzione fisiologica con una pipetta.
NOTA: Ripetere il risciacquo tre volte. - Tagliare i coaguli....
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Risultati
Nella fase iniziale del processo di degradazione, è stato riscontrato che i coaguli di sangue avevano una struttura compatta rossa e la soluzione di lavoro era incolore. Dopo un'incubazione di 30 minuti, la soluzione di lavoro è diventata di colore rosso chiaro, il che indica che le cellule del sangue incrociate sono state rilasciate nella soluzione di lavoro. La maggior parte dei coaguli si è dissolta quando si è allungato il tempo di incubazione a 5 ore e la soluzione di lavoro è diventata rosso chiaro. Al contrario, n.......
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Discussione
sFE è un agente fibrinolitico in grado di degradare la fibrina direttamente ed efficacemente12,16. Qui, sFE è stato impiegato per degradare la fibrina reticolata dei coaguli di sangue cerebrale, rilasciare le cellule racchiuse all'interno dei coaguli e analizzare qualitativamente e quantitativamente i componenti cellulari dei coaguli. I dati della microscopia e l'esame del sangue di routine hanno indicato che le cellule racchiuse sono state rilasciate dai coaguli.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Questa ricerca è stata finanziata dall'Ufficio per la scienza e la tecnologia della città di Xiamen (3502Z20227197) e dall'Ufficio per la scienza e la tecnologia della provincia del Fujian (n. 2019J01070, n. 2021Y0027).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Piastra di reazione di agglutinazione | ROTEST | RTB-4003 | |
| Analizzatore ematologico automatico | SYSMEX | XNB2 | |
| Sterilizzatore automatico a vapore a pressione verticale | SANYO | MLS-3750 | |
| Provetta da centrifuga (1,5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
| Banco pulito | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Incubatore a temperatura costante | JINGHONG | JHS-400 | |
| Piatto di coltura (100 mm) | Forno | ||
| DHG | SENXIN | DGG-9140AD | |
| Bilancia analitica elettronica | DENVER | TP-213 | |
| Membrana filtrante (0,22 &; micro; m) | Centrifuga Micro Refrigerata Millex GP | ||
| Vetrini per microscopio Cence | H1650-W | ||
| CITOGLAS | 01-30253-50 | ||
| Millipore di riferimento Milli-Q | Z00QSV0CN | ||
| soluzione fisiologica CISEN | H37022337 | ||
| Microscopio ottico | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Beyotime | C0221A | |
| Puntale per pipetta (1 mL | Axygene | T-1000XT-C | |
| Puntale per pipetta (200 &; micro; L) | Pipettatore Axygene | T-200XT-C | |
| (1 mL) | Pipettatore Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| (200 &; micro; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Bisturi | MARTOR | 23111 | |
| Oscillatore a vortice di piccole dimensioni | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Pinzetta | Hystic | HKQS-180 | |
| Wright Soluzione colorante | Beyotime | C0135-500ml |
Riferimenti
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
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Ristampe e permessi
