La frazione vascolare stromale (SVF) isolata meccanicamente in combinazione con un idrogel di fibrina offre un vettore facile ed efficiente per cellule stromali vitali di derivazione adiposa per varie indicazioni, tra cui l'ingegneria tissutale e/o la guarigione delle ferite. Qui, presentiamo la preparazione di un costrutto meccanico di SVF (mSVF)-fibrina idrogel per la ricerca traslazionale e l'applicazione clinica.
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Articolo metodologico
La combinazione di frazione vascolare stromale isolata meccanicamente e idrogel di fibrina: un protocollo di elaborazione
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il potenziale rigenerativo delle cellule stromali di derivazione adiposa (ASC) ha guadagnato un'attenzione significativa nella ricerca rigenerativa e traslazionale. In passato, l'estrazione di queste cellule dal tessuto adiposo richiedeva un processo enzimatico a più fasi, che risultava in un mix di cellule eterogenee costituito da ACS e altre cellule, che sono congiuntamente chiamate frazione vascolare stromale (SVF). I protocolli di isolamento SVF meccanico (mSVF) introdotti più di recente richiedono meno tempo e aggirano i problemi normativi. Recentemente abbiamo proposto un protocollo che genera mSVF ricca di cellule stromali basata su una combinazione di emulsione e centrifugazione. Un problema attuale nell'applicazione della mSVF per l'applicazione della terapia delle ferite è la mancanza di un'impalcatura che fornisca protezione dalla manipolazione meccanica e dall'essiccazione. In passato, gli idrogel di fibrina hanno dimostrato di essere un utile coadiuvante nel trasferimento cellulare per scopi di guarigione delle ferite. Nel lavoro qui presentato, delineiamo le fasi di preparazione di un costrutto di idrogel di fibrina mSVF come un nuovo approccio per la ricerca traslazionale e l'applicazione clinica.
Introduzione
Negli ultimi anni, la chirurgia plastica rigenerativa è emersa come un ulteriore pilastro della chirurgia plastica1. La chirurgia plastica rigenerativa mira a ripristinare il tessuto danneggiato trasferendo fattori solubili, cellule e tessuti raccolti dal paziente per promuovere il ripristino dei tessuti in modo minimamente invasivo2. Le cellule staminali di derivazione adiposa (ASC) hanno attirato l'attenzione grazie alla loro capacità di differenziarsi in più linee mesenchimali, rendendole un candidato promettente per la ricerca sulla medicina rigenerativa
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Protocollo
Questo studio è stato condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki. Tutti i donatori adulti hanno fornito il consenso informato scritto per consentire l'ulteriore utilizzo dei campioni di tessuto raccolti. Il protocollo segue le linee guida del comitato etico per la ricerca umana della nostra istituzione.
1. Raccolta del tessuto adiposo
- Prelevare il tessuto adiposo eseguendo una liposuzione standard in una tecnica convenzionale di raccolta del grasso descritta in precedenti pubblicazioni26,27. Assicurati di util....
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Risultati
Saggio della resazurina
Per prima cosa abbiamo esaminato la vitalità cellulare in vitro delle cellule mSVF. A tale scopo, abbiamo condotto un test di vitalità delle cellule di resazurina nei giorni 0, 3 e 7. La vitalità cellulare ai giorni 0, 3 e 7 di un totale di quattro campioni è mostrata nella Figura 1. I valori del giorno 0 fungono da base e sono stati impostati al 100%. Al giorno 3, il controllo positivo (mSVF) ha mostrato un leggero calo al 78,92% (± 5,33%.......
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Discussione
L'isolamento meccanico della SVF fornisce un'alternativa elegante al tradizionale approccio enzimatico e offre un ampio accesso per l'applicazione clinica29. Infatti, la mSVF, come proposto nel presente manoscritto, è già in uso clinico per il trattamento delle cicatrici dei tessuti molli o come coadiuvante per le procedure cosmetiche30. Il protocollo qui presentato fornisce un metodo semplice per la somministrazione topica efficiente di ce.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Bong-Sung Kim è sostenuto dalla Fondazione tedesca per la ricerca (KI 1973/2-1) e dalla Fondazione Novartis per la ricerca medico-biologica (#22A046).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 12-Wellplate | Sarstedt | 83.3921 | |
| 4′,6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) | Biochemica | A1001.0010 | |
| 50 mL-Falcon | Falcon | 352070 | |
| Asciugamani assorbenti, due pezzi | drizza | 89701 | |
| Alamar blue 25 mL | Invitrogen | DAL1025 | |
| albumina, bovina (BSA) | VWR | 0332-500G | |
| Biotek Cytation 5 | Lettore di micropiastre multimodale | Agilent | |
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | C5670-500G | |
| Microtomo | criostato | ||
| DMEM con 4,5 g/L di glucosio, con L-glutammina, con piruvato di sodio | VWR | 392-0416 | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Epinefrina | Sigma-Aldrich | E4250 | |
| Siero fetale bovino | Biowest | S181H-500 | |
| Fibrinogeno Plasma Umano 100 mg | Sigma-Aldrich | 341576-100MG | |
| Formalina | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Formalina 4% | Formafix | 1308069 | |
| FSC 22-Einbettmedium, blau | Biosystems | 3801481S | |
| Ematossilina & Soluzione di eosina | Sigma-Aldrich | H3136 / HT110132 | |
| Ringer lattato' s Soluzione 1000 mL | B Braun | R5410-01 | |
| Mercedes Cannula 4mm | MicroAire | PAL-R404LL | |
| NaCl 0,9% | Bbraun | 570160 | |
| OCT Matrice di inclusione 125 mL | CellPath | KMA-0100-00A | |
| Paraformaldeide | Fisher Scientific | 10342243 | |
| PBS 1% | Sigma-Aldrich | P4474 | |
| PenStrep | Sigma-Aldrich | P4333-100ML | |
| Petridish 150mm | Sarstedt | 83.1803 | |
| Phalloidin-iFluor 488 Reagente | Abcam | ab176753 | |
| Siringa sterile 20 mL Luer | HENKE-JECT | 5200-000V0 | |
| Siringa sterile 30 mL Luer-Lock | BD | 10521 | |
| Trombina da plasma | umanoSigma-Aldrich | T6884-100UN | |
| Acido tranexamico | Orpha Swiss | 6837093 | |
| Tulipfilter 1.2 | Lencion Surgical | ATLLLL | |
| Tulipfilter 1.4 | Lencion Surgical | ATLLLL |
Riferimenti
- Daar, A. S., Greenwood, H. L. A proposed definition of regenerative medicine. J Tissue Eng Regen Med. 1 (3), 179-184 (2007).
- Machens, H. G., Mailänder, P. Regenerative medicine and plastic surgery. Chirurg. 76 (5), 474-480 (2005).
- Zuk, P. A., et al.
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Ristampe e permessi
