Questo protocollo descrive una tecnica di immunofluorescenza multicolore per la valutazione del modello di rinite allergica nel ratto.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Marcatura immunofluorescente in sezioni di tessuto della mucosa nasale di ratti con rinite allergica tramite test immunologico multicolore
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La rinite allergica (AR) è una malattia infiammatoria cronica e non infettiva della mucosa nasale, mediata principalmente da immunoglobuline E specifiche (IgE), che colpisce circa il 10%-20% della popolazione mondiale. Mentre la colorazione a immunofluorescenza (IF) è stata a lungo una tecnica standard per rilevare l'espressione proteica specifica della malattia, le tecniche convenzionali di IF sono limitate nella loro capacità di rilevare i livelli di espressione di tre o più proteine nello stesso campione. Di conseguenza, negli ultimi anni sono state sviluppate tecniche di IF multicolore, che consentono la marcatura simultanea di più bersagli in cellule o tessuti.
Questo protocollo fornisce una panoramica completa del processo per stabilire un modello di ratto di AR, ottenere campioni di mucosa nasale e le procedure tecniche per l'immunofluorescenza multicolore. Tutti i ratti del gruppo AR hanno mostrato sintomi tipici come starnuti, naso che cola e prurito al naso, con osservazioni comportamentali che hanno ottenuto un punteggio di ≥5 punti. La colorazione con ematossilina ed eosina (H&E) ha rivelato un aumento della conta delle cellule infiammatorie e un'integrità della mucosa nasale interrotta nel gruppo AR. L'immunofluorescenza multicolore (mIF) ha dimostrato un aumento dell'espressione di RORγt e TICAM-1, mentre l'espressione di Foxp3 è diminuita nel tessuto della mucosa nasale dei ratti AR.
Introduzione
La rinite allergica (AR) è una malattia infiammatoria cronica non infettiva della mucosa nasale, mediata principalmente da immunoglobuline E (IgE) specifiche1,2. È caratterizzata da sintomi come starnuti, naso che cola, congestione nasale e prurito nasale. Con l'industrializzazione e l'urbanizzazione, la prevalenza dell'AR sta gradualmente aumentando, colpendo circa il 10%-20% della popolazione mondiale1. La tecnica dell'immunofluorescenza (IF) è un metodo di colorazione fluorescente che utilizza una reazione di legame anticorpo-antigene. Può essere impiegato per rilevare e quantificare....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Il protocollo e le procedure sperimentali hanno ricevuto l'approvazione del Comitato amministrativo e di ricerca sugli animali dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Chengdu (Numero di registrazione: 2022DL-010). I ratti maschi di Sprague Dawley (SD) di otto settimane, del peso di 180-200 g, sono stati ottenuti commercialmente (vedi Tabella dei materiali) e alloggiati in un ciclo naturale luce/buio con temperatura controllata (23 ± 2 °C) e umidità relativa (55% ± 10%). Dodici ratti sono stati divisi in modo casuale in due gruppi: il gruppo di controllo e il gruppo AR. Tutti i ratti sono stati acclimatati a queste condizioni e hanno avuto l....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Sei ratti SD sono stati indotti con successo nel modello AR attraverso l'iniezione intraperitoneale OVA e la sfida nasale. L'AR è stata indotta in tutti i ratti del gruppo AR, che rappresentavano il 100% del gruppo. Tutti i ratti del gruppo AR hanno mostrato sintomi tipici come starnuti, naso che cola e prurito al naso. Tutte le osservazioni comportamentali hanno ottenuto un punteggio di ≥5 punti (Tabella 2).
I risultati della colorazione H&E al 21° giorno di mo.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
La rinite allergica (AR) è una malattia infiammatoria non infettiva della mucosa nasale derivante da una combinazione di fattori ambientali e genetici. È diventato un problema di salute globale, che ha un impatto sull'efficienza lavorativa, diminuisce la qualità della vita, compromette il sonno, la funzione cognitiva e causa irritabilità e affaticamento. L'AR colpisce il 10%-20% della popolazione mondiale¹ e comporta costi economici considerevoli, causando perdite annuali fino a 30-50 miliardi di euro nei paesi dell'UE
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dal Dipartimento provinciale di scienza e tecnologia del Sichuan (2021YJ0175).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Al(OH)3 | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A7130 | |
| 75% etanolo | Anhui Yiren An Co., Ltd | 20210107 | |
| Ammoniaca | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
| Etanolo anidro | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 Sigillante | |
| di estinzione antifluorescenzaSouthernBiotech | 0100-01 | ||
| Macchina di tintura automatica | Thermo scientific | Varistain Gemini ES | |
| Carrier diapositive | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
| Tampone citrato-fosfato | Servicebio biotechnology co., Ltd | G1201 | |
| Soluzione di riparazione dell'antigene dell'acido citrico (PH 6.0) | Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1201 | |
| Vetrino coprioggetti | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | ||
| Vetrino coprioggetti | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | CS01-2450 | |
| CY3-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1223-50UL | |
| DAPI | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1012 | |
| Agitatore decolorante | SCILOGEX | S1010E | |
| Soluzione di decalcificazione EDTA | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | ||
| Essiccatoio elettrico a riscaldamento rapido | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Macchina per marcatura di scatole da incasso | Thermo scientific | PrintMate AS | |
| Macchina per l'inclusione | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
| Macchina per la disidratazione rapida dei tessuti | Thermo scientific | STP420 ES | |
| Sigillante per film | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
| FITC-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1222-50UL | |
| Microscopio a fluorescenza | Sunny Tecnologia ottica Co.Ltd | CX40 | |
| Foxp3 | Affinity Biosciences Co., Ltd | bs-10211R | |
| Tavolo di congelamento | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| Capra Anti-coniglio IgG H& L (HRP) | Liankebio Co., Ltd | GAR0072 | |
| Siero di capra | Biosharp | BL210A | |
| H& Kit di colorazione E | Leagene | DH0020 | |
| Pinze emostatiche | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J31010 | |
| Acido cloridrico | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
| Penna immunoistochimica | Biosharp | BC004 | |
| Forno a microonde | Midea | M1-L213B | |
| Gomma neutra | Sinopharm Group Reagente chimico Co., Ltd | 10004160 | |
| Ovoalbumina | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A804010 | |
| Forno | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Centrifuga palmare | SCILOGEX | D1008E | |
| Paraformaldeide | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0099-100ml | |
| Scanner della sezione di patologia | 3DHISTECH Kft | Pannoramic SCAN | |
| tampone PBS | Biosharp | G4202 | |
| Pipette | Drago | KE0003087/KA0056573 | |
| Rorγ t | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF3196 | |
| Scalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
| Agente estinguente autofluorescente Sudan Black B | Bioengineering Co., Ltd | A602008-0025 | |
| Affettatrice | Thermo scientific | HM325 | |
| Affettatrice | Thermo scientific | HM325 | |
| Slide | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | PC2-301 | |
| Sprague Dawley ratts | Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine | SYX  2023-0100 | |
| TICAM-1 | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF6289 | |
| Forbici per tessuti | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J22120 | |
| Macchina per teglie per spalmare tessuti | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| TYR-690 coloranti fluorescenti | Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd | RC0086-34RM | |
| Miscelatore a vortice | SCILOGEX | SLK-O3000-S | |
| acqua | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| Tagliacera | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
| Xylene | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Riferimenti
- Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
- Maurer, M., Zuberbier, T. Und....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
