Procedura operativa e precauzioni della terapia con aghi di fuoco Lingnan nei ratti modello di osteoporosi

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per l'applicazione della terapia Lingnan Fire-Needle nell'intervento di ratti modello di osteoporosi.

Abstract

Rispetto alla terapia con aghi filiformi, la terapia con aghi di fuoco ha sia la stimolazione degli aghi che l'effetto riscaldante del calore, il che le fa avere effetti inaspettati su alcune malattie croniche e malattie incurabili. L'osteoporosi (OP) ha un'alta incidenza nelle donne in postmenopausa e negli uomini di mezza età e anziani e il ciclo di trattamento è lungo. Secondo la Medicina Tradizionale Cinese (MTC), la terapia con aghi di fuoco Lingnan ha mostrato un potenziale nel trattamento dell'osteoporosi. Tuttavia, c'è ancora molta strada da fare prima che possa essere ampiamente utilizzato. Questo articolo si concentra sull'applicazione della terapia con aghi di fuoco di Lingnan nell'intervento di OP nei ratti. Copre la selezione degli strumenti dell'ago, la selezione del punto di agopuntura, il posizionamento dei corpi dei ratti e i metodi di fissaggio. Descriviamo anche i passaggi e le precauzioni da prendere durante e dopo l'agugliatura con gli aghi da fuoco. L'esperimento è stato condotto con tre gruppi: un gruppo normale, un gruppo modello e un gruppo con ago da fuoco, ciascuno contenente 10 ratti. I ratti del gruppo fire-needle sono stati trattati con intervento fire-needle per sei sessioni. Dopo il periodo di intervento, abbiamo raccolto campioni femorali ed eseguito scansioni micro-CT. I risultati suggeriscono che il fire needling può migliorare la morfologia ossea e la densità minerale nei ratti OP. Queste informazioni possono servire come base metodologica per condurre ricerche di base sulla terapia con ago da fuoco.

Introduzione

La medicina cinese ritiene che fattori come il clima e l'ambiente possano influenzare il fisico di una persona, che a sua volta influisce sull'insorgenza e lo sviluppo di malattie. La regione cinese di Lingnan, che comprende principalmente Guangdong, Guangxi e l'isola di Hainan, si trova nella regione tropicale dei monsoni. Di conseguenza, le persone che vivono a lungo in questa regione sono inclini a una forma di carenza di milza. In alcuni casi, si diffonde ai reni e al fegato, portando alla prevalenza dell'osteoporosi¹. La milza e lo stomaco funzionano nel trasporto e nell'assorbimento dell'acqua e dei cereali, che sono la fonte del qi e della biochimica del sangue, mentre il fegato aiuta a mantenere le midolle. Quindi, la nutrizione ossea si basa sull'apporto di milza, stomaco e fegato. Nella medicina cinese, il rene è in grado di generare midollo e rafforzare le ossa e la sua vitalità influisce direttamente sulla forza e sulla funzione delle ossa. Pertanto, la carenza renale è direttamente correlata all'osteoporosi. Secondo la MTC, la carenza di fegato (Gan)-rene (Shen) e la mancanza di essenza (Jing) sono le cause sottostanti. In alcuni casi, la malnutrizione può verificarsi a causa di una carenza di milza (Pi) e stomaco (Wei) o di uno squilibrio dei due. Cioè, la carenza del fegato (Gan), dei reni (Shen), della milza (Pi) e dello stomaco (Wei) sono le cause principali, mentre il qi esterno (Xie qi) blocca i meridiani e danneggia ossa e muscoli. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l'OP è una condizione medica caratterizzata da bassa massa ossea e deterioramento dei tessuti², che rappresenta una seria preoccupazione per gli anziani. La selezione degli interventi appropriati è fondamentale per la prevenzione e il trattamento dell'osteoporosi.

Gli agopuntori moderni hanno sviluppato una caratteristica unica del Lingnan della terapia con agugliatura del fuoco combinando il clima di Lingnan e le caratteristiche fisiche^{del popolo} Lingnan. La terapia con aghi di fuoco è un tipo di metodo di trattamento in cui aghi speciali vengono bruciati di rosso e rapidamente perforati in parti specifiche o punti di agopuntura del corpo umano per trattare vari disturbi. Questo metodo è ampiamente utilizzato nelle malattie della pelle, nelle malattie muscoloscheletriche e articolari, nelle malattie neurologiche e in altre malattie sistemiche e mostra una buona efficacia⁴. Il trattamento dell'osteoporosi con aghi da fuoco è stato utilizzato nelle cliniche per molto tempo e ha un effetto curativo migliore rispetto alla semplice agopuntura o alla somministrazione orale della medicina tradizionale cinese ^5,6,7. La terapia con aghi di fuoco Lingnan integra l'agopuntura, gli aghi a tre tagli e la moxibustione cicatriziale. Può migliorare il qi e la circolazione sanguigna nei meridiani mentre riscalda i reni. Questo trattamento può affrontare sia la stasi del sangue che la carenza renale (Shen), che contribuiscono alla patogenesi dell'OP nella MTC. Inoltre, ha i vantaggi di essere a basso costo, di avere effetti rapidi, un breve periodo di trattamento e di essere sicuro. Tuttavia, mancano ricerche sul suo meccanismo. Questo articolo introduce una procedura specifica di Lingnan Fire-Needle in ratti modello di osteoporosi e fornisce una base metodologica per condurre la ricerca di base correlata.

Protocollo

Tutti gli esperimenti sono stati condotti seguendo la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del National Institutes of Health e sono stati approvati dall'Università di Hubei di MTC - Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali. Per il test sono state utilizzate femmine adulte di ratti Sprague-Dawley (SD), del peso di 220 ± 20 g. Tutti i ratti sono stati mantenuti con un ciclo luce/buio di 12 ore a 23 ± 1 °C e 40%-50% di umidità, con libero accesso a cibo e acqua.

1. Preparazione pre-operatoria

1. Progettazione di gruppi
   1. Dopo aver genotipizzato 30 ratti femmine di 3 mesi, dividerli casualmente in tre gruppi (n = 10 in ciascun gruppo): il gruppo normale, il gruppo modello e il gruppo dell'ago di fuoco. Trattare i ratti del gruppo fire-needle con l'intervento fire-needle 1 volta al giorno per 6 sessioni, con 1 giorno di riposo tra le sessioni.
      NOTA: Il gruppo normale e il gruppo modello hanno sospeso il ratto legato con un mantello sicuro secondo la stessa frequenza e la stessa durata del gruppo fire-needle, ma senza il trattamento fire-needle.
2. Preparazione del modello di osteoporosi di ratto
   1. Per i ratti del gruppo modello e del gruppo dell'ago di fuoco, rimuovere chirurgicamente le ovaie per stabilire un modello di osteoporosi come descritto in ^8,9,10.
      1. Per l'ovariectomia, somministrare l'anestesia mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico al 2% (0,2 ml/100 g) prima dell'operazione e considerare l'anestesia efficace quando gli animali non rispondono in un piano chirurgico di anestesia sulla base della mancanza di risposta da un test di pizzicamento delle dita. Usa un unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Iniettare buprenorfina (0,05 mg/kg) per via sottocutanea come analgesico prima dell'intervento chirurgico. Mantenere le condizioni asettiche durante l'operazione.
         NOTA: Se l'intervento chirurgico non è stato completato e il ratto mostra segni di rianimazione, l'iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico al 2% può essere integrata temporaneamente e in modo appropriato, con ogni dose supplementare non superiore al 20% della quantità totale iniettata.
      2. Dopo l'intervento chirurgico, posizionare i ratti su un termoforo per piccoli animali e impostare la temperatura a 32 °C. Non lasciare i ratti incustoditi fino a quando non riprendono conoscenza e possono strisciare liberamente. Non rimetterli in compagnia di altri animali fino a quando non si sono completamente ripresi.
      3. Quando i ratti sono rianimati, controlla l'integrità delle suture e rimetti i ratti nella gabbia. Iniettare tutti i ratti per via intramuscolare con penicillina sodica (50.000 U al giorno, per 3 giorni) e iniettare per via intraperitoneale con 0,1 ml di soluzione di diclofenac sodico allo 0,05% (al giorno, per 3 giorni) per prevenire l'infezione e accelerare la guarigione ^9,10.
   2. Osservare il ciclo estrale secondo lo striscio di cellule esfoliate vaginali di ratti femmine come descritto in¹¹. Se il ciclo è disordinato, il modello viene stabilito con successo¹¹.
      NOTA: Ci vogliono circa 8-12 settimane perché i ratti sviluppino l'osteoporosi dopo l'ovariectomia.
3. Selezione degli strumenti dell'ago
   1. Acquista aghi antincendio dai produttori di dispositivi medici. Assicurarsi che gli strumenti dell'ago siano realizzati in lega di tungsteno-manganese, che è resistente alla temperatura, non è malleabile, non è facile da deformare e si riscalda uniformemente. L'ago di fuoco ha la forma di un ago a filamento. Assicurati che l'ago sia spesso, la punta sia affilata e dritta e che il manico sia avvolto con filo di rame, che è termoisolante e non brucia le mani.
   2. Scegli un ago da fuoco a testa singola con una dimensione di 0,40 mm x 13 mm perché i ratti sono piccoli. Controlla se l'ago del fuoco ha punte e crepe.
      NOTA: Nella pratica clinica, la maggior parte degli aghi da fuoco utilizzati sono quelli sviluppati da He Puren, un maestro medico nazionale¹². Sulla base di ciò, Lin Guohua ha creato l'ago da fuoco a testa lunga Lingnan e l'ago da fuoco a tre teste^{Lingnan 13}. Scegli diverse dimensioni di aghi da fuoco in base alle esigenze dell'esperimento.
4. Selezione e posizionamento dei punti di agopuntura
   1. In base ai dati pertinenti e alla letteratura, selezionare i punti di agopuntura per il trattamento dell'osteoporosi postmenopausale.
      NOTA: Gli agopunti più frequentemente utilizzati sono, in ordine di frequenza, Shenshu (BL 23), Zusanli (ST 36), Pishu (BL 20), Xuanzhong (GB 39) e Dazhu (BL 11)^14,15. Nella ricerca di base sull'intervento di agopuntura per l'osteoporosi nei ratti modello de-ovulatorio, i punti di agopuntura più utilizzati sono Shenshu (BL 23), Sanyinjiao (SP 6), Guanyuan (CV 4) e Zusanli (ST 36)16,17,18.
   2. Determina i punti di agopuntura selezionati per questo esperimento. Facendo riferimento ai punti di agopuntura selezionati negli studi precedenti 14,15,16,17,18 e alla patogenesi dell'osteoporosi, selezionare quattro punti di agopuntura, vale a dire, Shenshu (BL 23), Pishu (BL 20), Zusanli (ST 36) e Sanyinjiao (SP 6), per questo studio. Questi corrispondono al meridiano della vescica, al meridiano di Du, al meridiano della milza e al meridiano del rene.
      NOTA: È vietato l'uso di aghi antincendio su parti con vasi di grandi dimensioni e tronchi nervosi.
   3. Radere il sito di agopuntura con un tagliacapelli elettrico per animali domestici prima di posizionarlo per esporre il punto di agopuntura.
   4. La posizione dei punti di agopuntura si riferisce ai nomi e alla posizione dei punti di agopuntura comunemente usati in¹⁹. Localizzare i punti di agopuntura come segue: lo Shenshu (BL 23) si trova sui due lati inferiori della seconda vertebra lombare, a 6 mm dalla linea medio-dorsale; il Pishu (BL 20) si trova tra le costole sui due lati inferiori della 12a^{vertebra toracica} , a 6 mm dalla linea medio-dorsale; lo Zusanli (ST 36) si trova sul lato posteriore e laterale del ginocchio, circa 3 mm sotto il piccolo capo del perone; e Sanyinjiao (SP 6) si trova a circa 10 mm dalla punta della caviglia interna dell'arto posteriore.
   5. Segnali con un pennarello a base di olio dopo aver individuato i punti.
5. Metodo di contenzione dei ratti
   NOTA: Al fine di ridurre lo stress durante l'immobilizzazione e il trattamento dei ratti, i ratti sospesi legati con un mantello di sicurezza^20,21 sono stati scelti come metodo di immobilizzazione. Il metodo di sospensione del mantello di ratto presenta i seguenti vantaggi: in primo luogo, sfrutta appieno l'abitudine del ratto di preferire un ambiente buio e riduce la reazione allo stress del ratto durante la fissazione. In secondo luogo, i ratti in sospensione sono più silenziosi e più cooperativi durante l'intero processo di trattamento con fire-needling a causa della mancanza di punti di forza sugli arti e sulle dita dei piedi. In terzo luogo, i punti di agopuntura sulla schiena e sugli arti dei ratti erano sufficientemente esposti per facilitare il trattamento. Un singolo trattamento richiede di trattenere il ratto per 5-10 minuti. Quando sono al sicuro nel mantello, i ratti non lottano nel sistema di ritenuta e sono calmi.
   1. Prepara il mantello di topo. Cuci il tessuto pulito e trasformalo in un cappotto di topo a forma di tubo di 50 cm x 13 cm. Taglia dei fori per ciascuno dei quattro arti e la parte posteriore del mantello del topo e cuci le cravatte ai quattro angoli.
   2. Indossa i guanti, posiziona il topo su un tavolo non scivoloso, tieni la coda del topo con la mano sinistra e tira delicatamente indietro. Aprire la porta del mantello di topo con la mano destra. Usando l'abitudine del ratto di oscurità e scavare, posizionalo all'imboccatura del mantello del topo, il topo vi si insinuerebbe da solo.
   3. Quando il ratto si insinua nel mezzo del mantello del ratto, usa la mano sinistra per tenere entrambi i lati delle scapole del ratto ed estrai le due zampe anteriori del ratto con la mano destra.
   4. Stringi le corde sulla parte anteriore del mantello, incrocia le corde e avvolgile intorno alla schiena del topo. Regola l'elasticità delle corde e fai il nodo sul retro del topo. Infine, fissa l'estremità posteriore del corpo del ratto in modo simile in modo che i suoi arti posteriori bilaterali si trovino all'esterno del mantello del ratto.
   5. Per la sospensione a battente, prendi due ganci a S e agganciali al nodo sul retro del cappotto di topo e aggancia i ganci al telaio in ferro. A questo punto, il ratto è sospeso alla striscia di stoffa, in uno stato leggermente oscillante (Figura 1).
      NOTA: L'altezza della striscia di stoffa da terra è di circa 70 cm, per consentire allo sperimentatore seduto su uno sgabello di operare comodamente e senza sforzo. Metti una spessa imbottitura sulla superficie piana sotto il topo come precauzione se l'animale scivola.

2. Trattamento di agopuntura

1. Disinfezione
   1. Sterilizzare l'area locale con una soluzione disinfettante di iodoforo al 5% 3 volte prima dell'agopuntura. Aggiungere alcol dopo ogni scrub con iodoforo.
2. Aghi in fiamme
   NOTA: È necessario prendere precauzioni di sicurezza per evitare ustioni e lesioni.
   1. Prendi la pinza emostatica per raccogliere il batuffolo di cotone, imbevuto di alcol al 95%, con la mano sinistra e accendilo con un accendino.
   2. Tenere il manico dell'ago con il pollice, l'indice e il medio della mano destra in una posizione leggermente curva, come se si tenesse una penna.
   3. Metti la punta dell'ago e il corpo dell'ago sui batuffoli di cotone imbevuti di alcol e scaldalo; Riscaldare prima il corpo dell'ago, quindi riscaldare la punta dell'ago. Bruciare l'ago fino a quando non diventa bianco o rosso brillante, a seconda dello scopo del trattamento (Figura 2).
      NOTA: Il corpo dell'ago deve essere completamente bruciato di colore bianco brillante o rosso, altrimenti influenzerà l'efficacia dell'agopuntura o causerà infezioni postoperatorie e altri problemi.
3. Agopuntura
   NOTA: In base alla velocità, alla profondità, alla portata, al tempo di ritenzione dell'ago e allo scopo del trattamento, Lingnan Fire-Needle può essere suddiviso in varie tecniche operative come l'agopuntura a punti, l'agopuntura a dispersione, l'agopuntura densa, l'agopuntura veloce e l'agopuntura lenta²². La chiave per operare con Lingnan Fire-Needle è rossa, precisa e veloce.
   1. Attendi che l'ago bruci di rosso, allontana l'ago dalla fiamma e tienilo sopra il punto di agopuntura.
   2. Puntare la punta dell'ago verticalmente verso il punto di agopuntura, forare rapidamente ed estrarre. Assicurarsi che l'intero processo sia completato entro 1 s.
   3. La profondità di penetrazione dei punti di agopuntura è di circa 1-2 mm, perfora solo la punta dell'ago rovente.
      NOTA: La profondità dell'agopuntura deve essere determinata in base alla condizione, alla costituzione, all'età, allo spessore muscolare del punto di agopuntura, alla profondità dei vasi sanguigni e alla distribuzione dei nervi.
   4. Pungere ogni agopunto 3x-5x. Ripetere l'operazione per tutti i punti di agopuntura (Figura 3).
      NOTA: Quando si esegue l'operazione, essere completamente concentrati e agili. Nella stessa procedura su un ratto, dovrebbe essere utilizzato lo stesso ago da fuoco, con l'ago che viene risterilizzato mediante fiammatura tra ogni due punture; L'ago non deve essere posizionato verso il basso o diventare non sterile.

3. Gestione post-agopuntura

1. Sollevare l'ago antincendio lontano dalla pelle e tenere un batuffolo di cotone sterile e asciutto per premere il foro dell'ago per evitare sanguinamenti. Dopo la terapia con ago di fuoco, i ratti hanno mostrato una mobilità inalterata e nessuna complicanza rilevabile.
   NOTA: Se si verifica un'emorragia dopo l'agugliatura a fuoco, non è necessario fermare l'emorragia, basta strofinare con un batuffolo di cotone asciutto dopo che si è fermato naturalmente.

4. Raccolta e analisi dei dati

1. Dopo 6 cicli di intervento di fire-needling, sopprimere i ratti mediante iniezione intraperitoneale ad alte dosi di pentobarbital sodico (150-200 mg/kg). Raccolta di campioni di femore ed esecuzione di scansioni micro-TC²³.
2. Analizza i dati statisticamente, utilizzando un software di analisi. Mostra le misurazioni come medie e analizzale utilizzando l'ANOVA unidirezionale, con p <0,05 considerato statisticamente significativo.

Risultati

I dati nella Tabella 1 mostrano che, rispetto al gruppo normale, lo spessore dell'osso trabecolare (Tb.Th), il numero di osso trabecolare (Tb.N) e il parametro statico della frazione di volume osseo dell'osso trabecolare (BV/TV) nel gruppo modello erano tutti significativamente ridotti (p <0,05) e la separazione dell'osso trabecolare (Tb.Sp) era elevata (p <0,05); indicando che la struttura ossea dell'osso trabecolare nelle aree arricchite con osso trabecolare dell'epifisi femorale del ratto era significativamente interrotta dopo la de-osteoporosi, indicando un danno evidente.

Rispetto al gruppo modello, lo spessore trabecolare, il numero trabecolare e la frazione di volume osseo del femore con parametro statico trabecolare nel gruppo di agopuntura erano significativamente aumentati (p <0,05) e la separazione trabecolare era diminuita (p <0,05). Ciò ha suggerito che la terapia con ago di fuoco può migliorare il danno alla struttura ossea spongiosa del femore nei ratti modello di osteoporosi indotto dalla rimozione ossea.

La Figura 4 mostra le immagini tridimensionali della struttura della matrice spongiosa ossea di ratto in ciascun gruppo. La Figura 4A è il gruppo normale, la Figura 4B è il gruppo modello e la Figura 4C è il gruppo dell'ago di fuoco. Come si può vedere dalla figura, rispetto al gruppo normale, un gran numero di trabecole sono andate perse al centro e anche alla periferia della matrice spongiosa del femore nel gruppo modello, e un gran numero di cavità è apparso nella parte inferiore. La continuità complessiva della struttura ossea era danneggiata, con la comparsa di parte delle trabecole ossee libere. Rispetto al gruppo modello, c'è stato un grande aumento dello spessore delle trabecole al centro e alla periferia dell'osso spongioso del femore nel gruppo dell'ago di fuoco e la continuità della struttura ossea complessiva è stata migliorata. Ciò suggerisce che gli aghi di fuoco possono proteggere la struttura trabecolare dell'osso spongioso del femore nel modello di ratto di osteoporosi indotta da ovariectomia.

Figura 1: Metodo di fissazione del ratto: ratti oscillanti legati con il mantello. Dopo aver vestito il ratto con un cappotto da topo, il topo viene assicurato e sospeso in aria agganciando il cappotto del topo con due ganci a S. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2: Ago da fuoco di Lingnan. (A) Strumenti ad ago. Scegli un ago da fuoco fine con una dimensione di 0,40 mm x 13 mm. (B) Aghi da fuoco. Metti la punta dell'ago e il corpo dell'ago sui batuffoli di cotone imbevuti di alcol e scaldali. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 3: Procedura di agopuntura con ago di fuoco in quattro punti di agopuntura. (A) Pishu (BL 20): Situato tra le costole sui due lati inferiori della 12a^{vertebra toracica} , a 6 mm dalla linea medio-dorsale (B) Shenshu (BL 23): Situato sui due lati inferiori della seconda vertebra lombare, a 6 mm dalla linea medio-dorsale (C) Zusanli (ST 36): Situato sul lato posteriore e laterale del ginocchio, circa 3 mm sotto la piccola testa del perone. (D) Sanyinjiao (SP 6): Situato a circa 10 mm dalla punta della caviglia interna dell'arto posteriore. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 4: Confronto della struttura tridimensionale dell'osso spongioso del femore distale di ratti in vari gruppi. (A) Il gruppo normale. (B) Il gruppo modello. (C) Il gruppo dell'ago di fuoco. Barre di scala: 500 μm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Gruppo	Tb.N (millimetro)	Tb.Sp (millimetro)	Tb.Th (millimetro)	BV/TV
gruppo normale	3,29±0,47	0,23±0,06	0,12±0,03	0,39±0,14
Gruppo di modelli	0,96±0,78*	0,66±0,44*	0,09±0,01*	0,17±0,11*
gruppo fire-needle	2.73±0.76Δ	0.33±0.20Δ	0.12±0.02Δ	0.33±0.16Δ

Tabella 1: Effetto del fire needling sugli indici microstrutturali dell'osteoporosi femorale. I dati mostrano una media ± SD, n= 10. Per il confronto eseguito con il gruppo normale, *p<0,05; Per il confronto eseguito con il gruppo di modelli, Δp<0,05.

Discussione

La terapia con aghi di fuoco Lingnan ha un profondo background storico. Le registrazioni sugli aghi da fuoco e sui metodi di agugliatura possono essere fatte risalire a Huangdi Neijing. Gli agopuntori moderni Situ Bell e Zhang Jiawei hanno combinato il clima di Lingnan e le caratteristiche fisiche della sua gente per creare la terapia con aghi di fuoco^{Lingnan 3}. Lin Guohua ha riassunto la terapia Lingnan Fire-Needle, come riscaldamento, dragaggio, tonificazione, pulizia ed eliminazione, con il riscaldamento come essenza²⁴.

Il primo passo per utilizzare gli aghi da fuoco è selezionare il tipo di ago appropriato. Gli aghi antincendio possono essere classificati in tre categorie principali: testa singola, multitesta e testa piatta. L'ago da fuoco a testa singola è ampiamente utilizzato nella pratica clinica ed è comunemente usato per le malattie multisistemiche. L'ago da fuoco multitesta combina tre aghi da fuoco sottili o tre medio-grossolani in una forma triangolare, utilizzati principalmente per trattare le malattie della pelle. L'ago da fuoco a testa piatta è comunemente usato per rimuovere vari tipi di nei, verruche e altri organismi eccessivi sulla pelle^25,26. Lo studio ha selezionato gli aghi a testa singola perché hanno una gamma più ampia di applicazioni e più funzionalità, il che rende più facile ottenere aghi sottili adatti alle dimensioni dei ratti.

In secondo luogo, l'uso corretto della terapia con aghi da fuoco richiede criteri critici per la cauterizzazione degli aghi. I ricercatori²⁷ hanno scoperto che la cauterizzazione degli aghi a una temperatura specifica è necessaria per la loro efficacia. La stimolazione potrebbe non alleviare i cambiamenti patologici rilevanti se la temperatura non è sufficientemente alta. Pertanto, per ottenere l'effetto terapeutico desiderato, gli aghi utilizzati nella terapia con aghi di fuoco devono essere bruciati fino a ottenere un colore rossastro o bianco brillante e quindi inseriti rapidamente nei punti di agopuntura o nelle parti selezionate. Inoltre, poiché i criteri per bruciare gli aghi con aghi da fuoco variano a seconda degli strumenti per l'agugliatura antincendio, dei siti di agugliatura e delle malattie trattate, abbiamo compilato una serie completa di criteri per l'inforatura degli aghi con gli aghi da fuoco a cui si può fare riferimento nella Tabella 2. Nel presente studio, abbiamo utilizzato un ago da fuoco a testa singola per la stimolazione multipunto invece di un ago da fuoco a più teste. Questo perché più aghi troppo vicini tra loro non potevano garantire che ogni ago fosse cauterizzato in modo uniforme.

Strumenti per aghi	Grado di bruciatura dell'ago	Indicazioni
Ago da fuoco a testa singola	Rosso rossastro.	Malattie delle ossa e delle articolazioni e malattie dolorose
Ago antincendio multitesta	La punta dell'ago è leggermente calda.	Malattie della pelle come l'acne
Ago da fuoco a testa piatta	Bianco brillante. Il manico dell'ago è leggermente caldo.	Neoplasie come le verruche filiformi

Tabella 2: I criteri per bruciare gli aghi.

Per quanto riguarda l'angolo di inserimento dell'ago di fuoco, è tipicamente verticale. Per quanto riguarda la profondità di inserimento dell'ago, non ci sono ancora standard stabiliti. Tuttavia, in genere si suggerisce che l'inserimento più profondo sia migliore per le aree con più muscoli e pelle più spessa, mentre l'inserimento più superficiale è più appropriato per le aree con pelle e muscoli più sottili. Inoltre, molti esperti del settore ritengono che la profondità di fuoco dell'agugliatura dovrebbe essere simile a quella dell'agugliatura ad ago filiforme²⁸. Uno studio suggerisce che la profondità di fuoco degli aghi dovrebbe essere meno profonda degli aghi filiformi quando si pungono i punti di agopuntura e leggermente più profonda degli aghi filiformi quando si pungono i punti dolenti²². Di conseguenza, per quanto riguarda l'applicazione effettiva degli aghi da fuoco, è consigliabile fare riferimento prima allo standard per gli aghi filiformi e poi determinare la profondità dell'agugliatura in base all'esperienza clinica.

Sulla base dell'opinione collettiva di 192 esperti di Lingnan, la causa primaria di OP nei gruppi ad alto rischio è la carenza di rene (Shen), che porta a una stasi ematica secondaria. Pertanto, il trattamento per l'OP consiste nell'affrontare contemporaneamente sia il deficit renale (Shen) che la stasi del sangue²⁹. Attualmente, l'agopuntura è un trattamento ampiamente utilizzato per l'OP. I diversi tipi di trattamenti di agopuntura includono la terapia con aghi filiformi, la moxibustione, l'agopuntura calda, l'elettroagopuntura (EA), la terapia di inclusione del filo, l'iniezione di agopuntura, una combinazione di agopuntura e medicina e una combinazione di agopuntura e moxibustione. Tra questi, i trattamenti più utilizzati nella pratica clinica sono la terapia con incastro di fili, la moxibustione e una combinazione di agopuntura e medicina³⁰. Clinicamente, la terapia con aghi di fuoco è ampiamente utilizzata per 137 diverse malattie che colpiscono diversi sistemi di organi, come il sistema motorio, il sistema nervoso, il sistema endocrino, l'apparato digerente, l'ostetricia e la ginecologia, tra cui le più applicate sono le malattie motorie³¹. La terapia con aghi di fuoco Lingnan è un trattamento che combina i benefici dell'agopuntura, degli aghi a tre tagli e della moxibustione cicatriziale. Può migliorare il qi e la circolazione sanguigna nei meridiani e riscaldare i reni (Shen). Questo trattamento può affrontare sia la stasi del sangue che la carenza renale (Shen), che contribuiscono alla patogenesi dell'OP nella MTC. Inoltre, ha i vantaggi di essere a basso costo, di avere effetti rapidi, un breve periodo di trattamento e di essere sicuro. Gli studi clinici dimostrano anche che la combinazione della terapia con ago di fuoco e del trattamento di agopuntura è più efficace nel trattamento dell'OP rispetto alla semplice agopuntura o alla medicazione ^5,6. Il dolore articolare è uno dei sintomi tipici dell'OP ed è stato confermato che l'efficacia della terapia con ago di fuoco è significativamente migliore rispetto alla terapia con ago filiforme nel trattamento del dolore articolare³².

La forza ossea dipende dalla densità ossea, dalla quantità di osso per unità di volume. Il numero e la distribuzione delle trabecole ossee, un componente della massa ossea, influenza significativamente il volume osseo e, di conseguenza, la densità ossea. La frazione di volume osseo indica la percentuale di volume osseo per unità di volume tissutale ed è un riferimento essenziale per la massa ossea²³. Come parte del sistema scheletrico, la funzione principale dell'osso spongioso è quella di sostenere e facilitare il movimento. Tuttavia, l'aumento delle sue dimensioni può ridurre la densità ossea, diminuendo la forza ossea. La struttura scheletrica dell'osso spongioso è spugnosa e composta da trabecole. Pertanto, la struttura dell'osso spongioso è determinata dalle trabecole. Per mantenere la forza dell'osso spongioso, è fondamentale assicurarsi che siano presenti trabecole sufficienti come struttura. In secondo luogo, è necessario mantenere un numero relativamente adeguato di connessioni tra le trabecole per garantire la stabilità strutturale dell'osso³³. Affinché le trabecole siano in grado di sopportare una certa quantità di carico, il loro spessore deve essere mantenuto. La struttura dell'osso spongioso viene valutata in base al numero di trabecole presenti, alla loro connettività e al loro spessore³⁴. Dopo aver confrontato i parametri strutturali dell'osso spongioso (Tabella 1), i nostri risultati hanno rivelato differenze significative tra il gruppo modello di ratti e il gruppo normale. Il numero di trabecole, lo spessore trabecolare e la frazione di volume osseo del femore erano ridotti, mentre la separazione trabecolare era elevata nel gruppo modello. Questi risultati suggeriscono che la struttura ossea spongiosa cambia il gruppo modello, portando probabilmente all'osteoporosi o ad altre malattie ossee. Sulla base dell'immagine strutturale tridimensionale dell'osso spongioso, è stato osservato che la parte centrale mancava di trabecole e mancava anche più della metà delle trabecole nella parte superiore della periferia. Ciò indica che l'integrità della struttura ossea del femore nei ratti dopo l'ovariectomia era stata compromessa. Rispetto al gruppo modello, il femore nel gruppo fire-needle ha mostrato un aumento delle trabecole, dello spessore trabecolare, della frazione di volume osseo e una diminuzione della separazione trabecolare. Inoltre, quando è stato considerato il diagramma strutturale tridimensionale dell'osso spongioso, è stato osservato che la cavità centrale del gruppo dell'ago di fuoco era ridotta e le trabecole ossee periferiche erano complete (Figura 4). Questo studio dimostra che la terapia con ago di fuoco previene e controlla efficacemente i danni alla struttura ossea spongiosa dell'osso del femore nei ratti sottoposti a ovariectomia.

I limiti dei ratti modello di ovariectomia selezionati per questo studio sono i seguenti. La riduzione degli estrogeni è uno dei fattori di rischio per l'OP³⁵ primario. Per questo motivo, la chirurgia ovariectomica è un metodo affidabile per stabilire modelli di ratto OP ^8,9,10. Inoltre, i ratti SD non sono solo facilmente accessibili, ma anche docili, con condizioni di alimentazione rilassate. Di conseguenza, abbiamo inizialmente esaminato questo modello e abbiamo raccomandato l'uso di aghi da fuoco sottili per stimolare i punti di agopuntura. Il nostro piano a lungo termine è quello di espandere il nostro campo di ricerca convalidando ulteriormente l'efficacia della terapia fire-needling nell'alleviare l'OP in altri modelli, come l'invecchiamento dei ratti. Infine, la Tabella 3 riassume l'efficacia della sola agopuntura su ratti modello di osteoporosi e il suo meccanismo d'azione. Intendiamo condurre un'indagine più approfondita sui possibili meccanismi nel prossimo futuro 36,37,38,39,40,41,42.

Indicatore di risultato		Meccanismo d'azione				Riferimento
riassorbimento osseo		L'agopuntura previene la perdita ossea e i cambiamenti strutturali sopprimendo il riassorbimento osseo.				36
Forza ossea		L'agopuntura ha aumentato il volume e lo spessore dell'osso trabecolare, ha abbassato la separazione trabecolare delle tibie e ha limitato l'escrezione di fosforo e Dpd, promuovendo al contempo le concentrazioni di osteocalcina sierica.				37
metabolismo osseo		L'agopuntura può ridurre significativamente i livelli sierici di ALP, BGP e TRAP nei ratti OVX.				38
via di segnalazione		L'agopuntura migliora la densità minerale ossea, attenua la risposta infiammatoria in vivo e aumenta i livelli di fattori che influenzano l'osteogenesi nei ratti modulando la via di segnalazione Wnt.				39,40
effetto endocrino-modulante		L'agopuntura ha modulato i livelli sierici di estradiolo, ormone di rilascio della corticotropina (CRH), ormone adrenocorticotropo (ACTH) e corticosterone (CORT).				41
Peso corporeo		L'agopuntura modula i cambiamenti nei livelli di leptina per abrogare l'aumento di peso corporeo.				36,41
fattore neurotrofico derivato dal cervello		l'agopuntura può aumentare i livelli di espressione di BDNF e TrkB e accelerare il processo di guarigione delle fratture dopo l'osteoporosi.				42

Tabella 3: L'effetto dell'agopuntura semplice sull'efficacia dei ratti modello di osteoporosi.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
75% di alcol	Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd		Disinfezione
95% di alcol	Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd		Aghi da ustione
Femmina adulta Sprague-Dawley (SD) ratti	Liaoning Changsheng biotechnology co., Ltd.	SCXK 2020-0001	Modellazione dell'osteoporosi
Tappetino termico termostato deluxe	Strumenti Zhenhua		Per il mantenimento della temperatura corporea dei ratti.
Iniezione di diclofenac sodico	Provincia di Shandong Jianmu Bio-pharmaceutical Co.	150182913	Antipiretico e analgesico
Elevato rack di fissazione	Taizhou Shi Ai Scientific and Educational Instruments and Equipment Co.		Riparare ratti
Aghi di fuoco	Pechino Luoya Shanchuan Medical Equipment Co., Ltd.	20190240	Uno strumento di puntura
Pinze emostatiche	Qingdao Schultz Biotechnology Co.		Aggiustare i ratti
Liguter	Shanghai Machi Trading Co.	H5	Ignite alcool
Lodophor soluzione disinfettante	Qingdao Hai Hainuo Inovation Disinfection Technology Co., Ltd.	2016-0604	Disinfezione
Batuffolo di cotone medico	Jiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd.	20172142357	Disinfezione
pentobarbital sodico	Beijing Jiehui Biotechnology Co.	P3761	anestesia
Pet tosatrice elettrica	Fenghua Xikou Lubao Coltelli & Forbici Fabbrica		di elettrodomestici Radere i peli dei ratti
		ratto fatto in casa	Fissare i ratti
Pinzette	Qingdao Schultz Biotechnology Co.		Pizzicare i batuffoli di cotone