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Articolo metodologico

Procedura operativa e precauzioni della terapia con aghi di fuoco Lingnan nei ratti modello di osteoporosi

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DOI:

10.3791/65970

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26 aprile 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Department of Rehabilitation Medicine, General Hospital of Central Theater Command, 3Hubei Shizhen Laboratory, 4Hubei International Science and Technology Cooperation Base of Preventive Treatment by Acupuncture and Moxibustion

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per l'applicazione della terapia Lingnan Fire-Needle nell'intervento di ratti modello di osteoporosi.

Abstract

Rispetto alla terapia con aghi filiformi, la terapia con aghi di fuoco ha sia la stimolazione degli aghi che l'effetto riscaldante del calore, il che le fa avere effetti inaspettati su alcune malattie croniche e malattie incurabili. L'osteoporosi (OP) ha un'alta incidenza nelle donne in postmenopausa e negli uomini di mezza età e anziani e il ciclo di trattamento è lungo. Secondo la Medicina Tradizionale Cinese (MTC), la terapia con aghi di fuoco Lingnan ha mostrato un potenziale nel trattamento dell'osteoporosi. Tuttavia, c'è ancora molta strada da fare prima che possa essere ampiamente utilizzato. Questo articolo si concentra sull'applicazione della terapia con aghi di fuoco di Lingnan nell'intervento di OP nei ratti. Copre la selezione degli strumenti dell'ago, la selezione del punto di agopuntura, il posizionamento dei corpi dei ratti e i metodi di fissaggio. Descriviamo anche i passaggi e le precauzioni da prendere durante e dopo l'agugliatura con gli aghi da fuoco. L'esperimento è stato condotto con tre gruppi: un gruppo normale, un gruppo modello e un gruppo con ago da fuoco, ciascuno contenente 10 ratti. I ratti del gruppo fire-needle sono stati trattati con intervento fire-needle per sei sessioni. Dopo il periodo di intervento, abbiamo raccolto campioni femorali ed eseguito scansioni micro-CT. I risultati suggeriscono che il fire needling può migliorare la morfologia ossea e la densità minerale nei ratti OP. Queste informazioni possono servire come base metodologica per condurre ricerche di base sulla terapia con ago da fuoco.

Introduzione

La medicina cinese ritiene che fattori come il clima e l'ambiente possano influenzare il fisico di una persona, che a sua volta influisce sull'insorgenza e lo sviluppo di malattie. La regione cinese di Lingnan, che comprende principalmente Guangdong, Guangxi e l'isola di Hainan, si trova nella regione tropicale dei monsoni. Di conseguenza, le persone che vivono a lungo in questa regione sono inclini a una forma di carenza di milza. In alcuni casi, si diffonde ai reni e al fegato, portando alla prevalenza dell'osteoporosi1. La milza e lo stomaco funzionano nel trasporto e nell'assorbimento dell'acqua e dei cereali, che sono la fonte del qi e della biochimica del sangue, mentre il fegato aiuta a mantenere le midolle. Quindi, la nutrizione ossea si basa sull'apporto di milza, stomaco e fegato. Nella medicina cinese, il rene è in grado di generare midollo e rafforzare le ossa e la sua vitalità influisce direttamente sulla forza e sulla funzione delle ossa. Pertanto, la carenza renale è direttamente correlata all'osteoporosi. Secondo la MTC, la carenza di fegato (Gan)-rene (Shen) e la mancanza di essenza (Jing) sono le cause sottostanti. In alcuni casi, la malnutrizione può verificarsi a causa di una carenza di milza (Pi) e stomaco (Wei) o di uno squilibrio dei due. Cioè, la carenza del fegato (Gan), dei reni (Shen), della milza (Pi) e dello stomaco (Wei) sono le cause principali, mentre il qi esterno (Xie qi) blocca i meridiani e danneggia ossa e muscoli. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l'OP è una condizione medica caratterizzata da bassa massa ossea e deterioramento dei tessuti2, che rappresenta una seria preoccupazione per gli anziani. La selezione degli interventi appropriati è fondamentale per la prevenzione e il trattamento dell'osteoporosi.

Gli agopuntori moderni hanno sviluppato una caratteristica unica del Lingnan della terapia con agugliatura del fuoco combinando il clima di Lingnan e le caratteristiche fisichedel popolo Lingnan. La terapia con aghi di fuoco è un tipo di metodo di trattamento in cui aghi speciali vengono bruciati di rosso e rapidamente perforati in parti specifiche o punti di agopuntura del corpo umano per trattare vari disturbi. Questo metodo è ampiamente utilizzato nelle malattie della pelle, nelle malattie muscoloscheletriche e articolari, nelle malattie neurologiche e in altre malattie sistemiche e mostra una buona efficacia4. Il trattamento dell'osteoporosi con aghi da fuoco è stato utilizzato nelle cliniche per molto tempo e ha un effetto curativo migliore rispetto alla semplice agopuntura o alla somministrazione orale della medicina tradizionale cinese 5,6,7. La terapia con aghi di fuoco Lingnan integra l'agopuntura, gli aghi a tre tagli e la moxibustione cicatriziale. Può migliorare il qi e la circolazione sanguigna nei meridiani mentre riscalda i reni. Questo trattamento può affrontare sia la stasi del sangue che la carenza renale (Shen), che contribuiscono alla patogenesi dell'OP nella MTC. Inoltre, ha i vantaggi di essere a basso costo, di avere effetti rapidi, un breve periodo di trattamento e di essere sicuro. Tuttavia, mancano ricerche sul suo meccanismo. Questo articolo introduce una procedura specifica di Lingnan Fire-Needle in ratti modello di osteoporosi e fornisce una base metodologica per condurre la ricerca di base correlata.

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sono stati condotti seguendo la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del National Institutes of Health e sono stati approvati dall'Università di Hubei di MTC - Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali. Per il test sono state utilizzate femmine adulte di ratti Sprague-Dawley (SD), del peso di 220 ± 20 g. Tutti i ratti sono stati mantenuti con un ciclo luce/buio di 12 ore a 23 ± 1 °C e 40%-50% di umidità, con libero accesso a cibo e acqua.

1. Preparazione pre-operatoria

  1. Progettazione di gruppi
    1. Dopo aver genotipizzato 30 ratti femmine di 3 mesi, dividerli casualmente in tre gruppi (n = 10 in ciascun gruppo): il gruppo normale, il gruppo modello e il gruppo dell'ago di fuoco. Trattare i ratti del gruppo fire-needle con l'intervento fire-needle 1 volta al giorno per 6 sessioni, con 1 giorno di riposo tra le sessioni.
      NOTA: Il gruppo normale e il gruppo modello hanno sospeso il ratto legato con un mantello sicuro secondo la stessa frequenza e la stessa durata del gruppo fire-needle, ma senza il trattamento fire-needle.
  2. Preparazione del modello di osteoporosi di ratto
    1. Per i ratti del gruppo modello e del gruppo dell'ago di fuoco, rimuovere chirurgicamente le ovaie per stabilire un modello di osteoporosi come descritto in 8,9,10.
      1. Per l'ovariectomia, somministrare l'anestesia mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico al 2% (0,2 ml/100 g) prima dell'operazione e considerare l'anestesia efficace quando gli animali non rispondono in un piano chirurgico di anestesia sulla base della mancanza di risposta da un test di pizzicamento delle dita. Usa un unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Iniettare buprenorfina (0,05 mg/kg) per via sottocutanea come analgesico prima dell'intervento chirurgico. Mantenere le condizioni asettiche durante l'operazione.
        NOTA: Se l'intervento chirurgico non è stato completato e il ratto mostra segni di rianimazione, l'iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico al 2% può essere integrata temporaneamente e in modo appropriato, con ogni dose supplementare non superiore al 20% della quantità totale iniettata.
      2. Dopo l'intervento chirurgico, posizionare i ratti su un termoforo per piccoli animali e impostare la temperatura a 32 °C. Non lasciare i ratti incustoditi fino a quando non riprendono conoscenza e possono strisciare liberamente. Non rimetterli in compagnia di altri animali fino a quando non si sono completamente ripresi.
      3. Quando i ratti sono rianimati, controlla l'integrità delle suture e rimetti i ratti nella gabbia. Iniettare tutti i ratti per via intramuscolare con penicillina sodica (50.000 U al giorno, per 3 giorni) e iniettare per via intraperitoneale con 0,1 ml di soluzione di diclofenac sodico allo 0,05% (al giorno, per 3 giorni) per prevenire l'infezione e accelerare la guarigione 9,10.
    2. Osservare il ciclo estrale secondo lo striscio di cellule esfoliate vaginali di ratti femmine come descritto in11. Se il ciclo è disordinato, il modello viene stabilito con successo11.
      NOTA: Ci vogliono circa 8-12 settimane perché i ratti sviluppino l'osteoporosi dopo l'ovariectomia.
  3. Selezione degli strumenti dell'ago
    1. Acquista aghi antincendio dai produttori di dispositivi medici. Assicurarsi che gli strumenti dell'ago siano realizzati in lega di tungsteno-manganese, che è resistente alla temperatura, non è malleabile, non è facile da deformare e si riscalda uniformemente. L'ago di fuoco ha la forma di un ago a filamento. Assicurati che l'ago sia spesso, la punta sia affilata e dritta e che il manico sia avvolto con filo di rame, che è termoisolante e non brucia le mani.
    2. Scegli un ago da fuoco a testa singola con una dimensione di 0,40 mm x 13 mm perché i ratti sono piccoli. Controlla se l'ago del fuoco ha punte e crepe.
      NOTA: Nella pratica clinica, la maggior parte degli aghi da fuoco utilizzati sono quelli sviluppati da He Puren, un maestro medico nazionale12. Sulla base di ciò, Lin Guohua ha creato l'ago da fuoco a testa lunga Lingnan e l'ago da fuoco a tre testeLingnan 13. Scegli diverse dimensioni di aghi da fuoco in base alle esigenze dell'esperimento.
  4. Selezione e posizionamento dei punti di agopuntura
    1. In base ai dati pertinenti e alla letteratura, selezionare i punti di agopuntura per il trattamento dell'osteoporosi postmenopausale.
      NOTA: Gli agopunti più frequentemente utilizzati sono, in ordine di frequenza, Shenshu (BL 23), Zusanli (ST 36), Pishu (BL 20), Xuanzhong (GB 39) e Dazhu (BL 11)14,15. Nella ricerca di base sull'intervento di agopuntura per l'osteoporosi nei ratti modello de-ovulatorio, i punti di agopuntura più utilizzati sono Shenshu (BL 23), Sanyinjiao (SP 6), Guanyuan (CV 4) e Zusanli (ST 36)16,17,18.
    2. Determina i punti di agopuntura selezionati per questo esperimento. Facendo riferimento ai punti di agopuntura selezionati negli studi precedenti 14,15,16,17,18 e alla patogenesi dell'osteoporosi, selezionare quattro punti di agopuntura, vale a dire, Shenshu (BL 23), Pishu (BL 20), Zusanli (ST 36) e Sanyinjiao (SP 6), per questo studio. Questi corrispondono al meridiano della vescica, al meridiano di Du, al meridiano della milza e al meridiano del rene.
      NOTA: È vietato l'uso di aghi antincendio su parti con vasi di grandi dimensioni e tronchi nervosi.
    3. Radere il sito di agopuntura con un tagliacapelli elettrico per animali domestici prima di posizionarlo per esporre il punto di agopuntura.
    4. La posizione dei punti di agopuntura si riferisce ai nomi e alla posizione dei punti di agopuntura comunemente usati in19. Localizzare i punti di agopuntura come segue: lo Shenshu (BL 23) si trova sui due lati inferiori della seconda vertebra lombare, a 6 mm dalla linea medio-dorsale; il Pishu (BL 20) si trova tra le costole sui due lati inferiori della 12avertebra toracica , a 6 mm dalla linea medio-dorsale; lo Zusanli (ST 36) si trova sul lato posteriore e laterale del ginocchio, circa 3 mm sotto il piccolo capo del perone; e Sanyinjiao (SP 6) si trova a circa 10 mm dalla punta della caviglia interna dell'arto posteriore.
    5. Segnali con un pennarello a base di olio dopo aver individuato i punti.
  5. Metodo di contenzione dei ratti
    NOTA: Al fine di ridurre lo stress durante l'immobilizzazione e il trattamento dei ratti, i ratti sospesi legati con un mantello di sicurezza20,21 sono stati scelti come metodo di immobilizzazione. Il metodo di sospensione del mantello di ratto presenta i seguenti vantaggi: in primo luogo, sfrutta appieno l'abitudine del ratto di preferire un ambiente buio e riduce la reazione allo stress del ratto durante la fissazione. In secondo luogo, i ratti in sospensione sono più silenziosi e più cooperativi durante l'intero processo di trattamento con fire-needling a causa della mancanza di punti di forza sugli arti e sulle dita dei piedi. In terzo luogo, i punti di agopuntura sulla schiena e sugli arti dei ratti erano sufficientemente esposti per facilitare il trattamento. Un singolo trattamento richiede di trattenere il ratto per 5-10 minuti. Quando sono al sicuro nel mantello, i ratti non lottano nel sistema di ritenuta e sono calmi.
    1. Prepara il mantello di topo. Cuci il tessuto pulito e trasformalo in un cappotto di topo a forma di tubo di 50 cm x 13 cm. Taglia dei fori per ciascuno dei quattro arti e la parte posteriore del mantello del topo e cuci le cravatte ai quattro angoli.
    2. Indossa i guanti, posiziona il topo su un tavolo non scivoloso, tieni la coda del topo con la mano sinistra e tira delicatamente indietro. Aprire la porta del mantello di topo con la mano destra. Usando l'abitudine del ratto di oscurità e scavare, posizionalo all'imboccatura del mantello del topo, il topo vi si insinuerebbe da solo.
    3. Quando il ratto si insinua nel mezzo del mantello del ratto, usa la mano sinistra per tenere entrambi i lati delle scapole del ratto ed estrai le due zampe anteriori del ratto con la mano destra.
    4. Stringi le corde sulla parte anteriore del mantello, incrocia le corde e avvolgile intorno alla schiena del topo. Regola l'elasticità delle corde e fai il nodo sul retro del topo. Infine, fissa l'estremità posteriore del corpo del ratto in modo simile in modo che i suoi arti posteriori bilaterali si trovino all'esterno del mantello del ratto.
    5. Per la sospensione a battente, prendi due ganci a S e agganciali al nodo sul retro del cappotto di topo e aggancia i ganci al telaio in ferro. A questo punto, il ratto è sospeso alla striscia di stoffa, in uno stato leggermente oscillante (Figura 1).
      NOTA: L'altezza della striscia di stoffa da terra è di circa 70 cm, per consentire allo sperimentatore seduto su uno sgabello di operare comodamente e senza sforzo. Metti una spessa imbottitura sulla superficie piana sotto il topo come precauzione se l'animale scivola.

2. Trattamento di agopuntura

  1. Disinfezione
    1. Sterilizzare l'area locale con una soluzione disinfettante di iodoforo al 5% 3 volte prima dell'agopuntura. Aggiungere alcol dopo ogni scrub con iodoforo.
  2. Aghi in fiamme
    NOTA: È necessario prendere precauzioni di sicurezza per evitare ustioni e lesioni.
    1. Prendi la pinza emostatica per raccogliere il batuffolo di cotone, imbevuto di alcol al 95%, con la mano sinistra e accendilo con un accendino.
    2. Tenere il manico dell'ago con il pollice, l'indice e il medio della mano destra in una posizione leggermente curva, come se si tenesse una penna.
    3. Metti la punta dell'ago e il corpo dell'ago sui batuffoli di cotone imbevuti di alcol e scaldalo; Riscaldare prima il corpo dell'ago, quindi riscaldare la punta dell'ago. Bruciare l'ago fino a quando non diventa bianco o rosso brillante, a seconda dello scopo del trattamento (Figura 2).
      NOTA: Il corpo dell'ago deve essere completamente bruciato di colore bianco brillante o rosso, altrimenti influenzerà l'efficacia dell'agopuntura o causerà infezioni postoperatorie e altri problemi.
  3. Agopuntura
    NOTA: In base alla velocità, alla profondità, alla portata, al tempo di ritenzione dell'ago e allo scopo del trattamento, Lingnan Fire-Needle può essere suddiviso in varie tecniche operative come l'agopuntura a punti, l'agopuntura a dispersione, l'agopuntura densa, l'agopuntura veloce e l'agopuntura lenta22. La chiave per operare con Lingnan Fire-Needle è rossa, precisa e veloce.
    1. Attendi che l'ago bruci di rosso, allontana l'ago dalla fiamma e tienilo sopra il punto di agopuntura.
    2. Puntare la punta dell'ago verticalmente verso il punto di agopuntura, forare rapidamente ed estrarre. Assicurarsi che l'intero processo sia completato entro 1 s.
    3. La profondità di penetrazione dei punti di agopuntura è di circa 1-2 mm, perfora solo la punta dell'ago rovente.
      NOTA: La profondità dell'agopuntura deve essere determinata in base alla condizione, alla costituzione, all'età, allo spessore muscolare del punto di agopuntura, alla profondità dei vasi sanguigni e alla distribuzione dei nervi.
    4. Pungere ogni agopunto 3x-5x. Ripetere l'operazione per tutti i punti di agopuntura (Figura 3).
      NOTA: Quando si esegue l'operazione, essere completamente concentrati e agili. Nella stessa procedura su un ratto, dovrebbe essere utilizzato lo stesso ago da fuoco, con l'ago che viene risterilizzato mediante fiammatura tra ogni due punture; L'ago non deve essere posizionato verso il basso o diventare non sterile.

3. Gestione post-agopuntura

  1. Sollevare l'ago antincendio lontano dalla pelle e tenere un batuffolo di cotone sterile e asciutto per premere il foro dell'ago per evitare sanguinamenti. Dopo la terapia con ago di fuoco, i ratti hanno mostrato una mobilità inalterata e nessuna complicanza rilevabile.
    NOTA: Se si verifica un'emorragia dopo l'agugliatura a fuoco, non è necessario fermare l'emorragia, basta strofinare con un batuffolo di cotone asciutto dopo che si è fermato naturalmente.

4. Raccolta e analisi dei dati

  1. Dopo 6 cicli di intervento di fire-needling, sopprimere i ratti mediante iniezione intraperitoneale ad alte dosi di pentobarbital sodico (150-200 mg/kg). Raccolta di campioni di femore ed esecuzione di scansioni micro-TC23.
  2. Analizza i dati statisticamente, utilizzando un software di analisi. Mostra le misurazioni come medie e analizzale utilizzando l'ANOVA unidirezionale, con p <0,05 considerato statisticamente significativo.

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Risultati

I dati nella Tabella 1 mostrano che, rispetto al gruppo normale, lo spessore dell'osso trabecolare (Tb.Th), il numero di osso trabecolare (Tb.N) e il parametro statico della frazione di volume osseo dell'osso trabecolare (BV/TV) nel gruppo modello erano tutti significativamente ridotti (p <0,05) e la separazione dell'osso trabecolare (Tb.Sp) era elevata (p <0,05); indicando che la struttura ossea dell'osso trabecolare nelle aree arricchite con osso trabecolare dell'epifisi femorale del ratto era si...

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Discussione

La terapia con aghi di fuoco Lingnan ha un profondo background storico. Le registrazioni sugli aghi da fuoco e sui metodi di agugliatura possono essere fatte risalire a Huangdi Neijing. Gli agopuntori moderni Situ Bell e Zhang Jiawei hanno combinato il clima di Lingnan e le caratteristiche fisiche della sua gente per creare la terapia con aghi di fuocoLingnan 3. Lin Guohua ha riassunto la terapia Lingnan Fire-Needle, come riscaldamento, dragaggio, tonificazione, p...

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto con fondi dalla National Natural Science Foundation of China (NSFC) n. 82374564 (a YJD) e n. 82074566 (a YJD) e dalla Sun Guojie Inheritance Base for MTC Agopuntura-Moxibustione della Federazione Mondiale delle Società di Agopuntura-Moxibustione a Wuhan, Cina (World Federation of Acupuncture-Moxibustion Societies [2019] No. 26) a YJD e al progetto di costruzione del National Famous TCM Inheritance Studio dell'Amministrazione Nazionale di Medicina Tradizionale Cinese, Cina (l'Amministrazione Nazionale della Medicina Tradizionale Cinese [2022] n. 5) a YJD.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
75% di alcolShandong Lircon medicaltechnology co., ltdDisinfezione
95% di alcolShandong Lircon medicaltechnology co., ltdAghi da ustione
Femmina adulta Sprague-Dawley (SD) rattiLiaoning Changsheng biotechnology co., Ltd.SCXK 2020-0001Modellazione dell'osteoporosi
Tappetino termico termostato deluxeStrumenti ZhenhuaPer il mantenimento della temperatura corporea dei ratti.
Iniezione di diclofenac sodicoProvincia di Shandong Jianmu Bio-pharmaceutical Co.150182913Antipiretico e analgesico
Elevato rack di fissazioneTaizhou Shi Ai Scientific and Educational Instruments and Equipment Co.Riparare ratti
Aghi di fuocoPechino Luoya Shanchuan Medical Equipment Co., Ltd.20190240Uno strumento di puntura
Pinze emostaticheQingdao Schultz Biotechnology Co.Aggiustare i ratti
LiguterShanghai Machi Trading Co.H5Ignite alcool
Lodophor soluzione disinfettanteQingdao Hai Hainuo Inovation Disinfection Technology Co., Ltd.2016-0604Disinfezione
Batuffolo di cotone medicoJiangsu Misawa Medical Supplies Co., Ltd.20172142357Disinfezione
pentobarbital sodicoBeijing Jiehui Biotechnology Co.P3761anestesia
Pet tosatrice elettricaFenghua Xikou Lubao Coltelli & Forbici Fabbricadi elettrodomestici Radere i peli dei ratti
ratto fatto in casaFissare i ratti
PinzetteQingdao Schultz Biotechnology Co.Pizzicare i batuffoli di cotone
Cappotto di

Riferimenti

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