Il presente protocollo descrive una tecnica di cuffia per un modello di trapianto di polmone sinistro di topo. Questa tecnica è stata sviluppata nel corso di diversi anni e ha funzionato bene, servendo efficacemente nella ricerca immunologica.
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Articolo metodologico
Il presente protocollo descrive una tecnica di cuffia per un modello di trapianto di polmone sinistro di topo. Questa tecnica è stata sviluppata nel corso di diversi anni e ha funzionato bene, servendo efficacemente nella ricerca immunologica.
Nell'ultimo decennio, il nostro laboratorio ha compiuto progressi significativi nello sviluppo e nel perfezionamento di modelli di trapianto di polmone di topo vascolarizzato utilizzando una "tecnica di mantello" di trapianto efficiente e altamente affidabile. Questo articolo descrive un metodo sofisticato e completo per il trapianto di polmone ortotopico in un modello di polmone ortotopico vascolarizzato, che rappresenta il modello di trapianto di polmone di topo più fisiologico e clinicamente rilevante fino ad oggi. Il processo di trapianto consiste in due fasi distinte: il prelievo del donatore e il successivo impianto nel ricevente. Il metodo è stato padroneggiato con successo e, con diversi mesi di formazione sufficiente, un professionista esperto può eseguire la procedura in circa 90 minuti da pelle a pelle. Sorprendentemente, una volta che gli individui superano la curva di apprendimento iniziale, il tasso di sopravvivenza durante il periodo perioperatorio si avvicina quasi al 100%. Il modello murino consente l'uso di più ceppi transgenici e mutanti di topi disponibili in commercio, consentendo lo studio della tolleranza e del rigetto. Inoltre, le caratteristiche uniche di questo modello lo rendono uno strumento prezioso per lo studio della biologia e dell'immunologia dei tumori.
Sebbene esistano terapie sostitutive, come la dialisi e i dispositivi di assistenza ventricolare, per le persone con insufficienza renale e cardiaca, il trapianto di polmone rimane l'opzione terapeutica principale per i pazienti affetti da malattia polmonare allo stadio terminale. Questa procedura è l'unica scelta salvavita per le persone con diagnosi di fibrosi polmonare1. Inoltre, viene impiegato per prolungare la durata della vita di coloro che affrontano malattie polmonari ostruttive allo stadio terminale come l'enfisema, nonché di quelli con condizioni suppurative come la fibrosi cistica1....
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Tutte le procedure relative agli animali sono state condotte in conformità e hanno ricevuto l'approvazione del Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso l'Università del Maryland, Baltimora. Si consiglia di utilizzare topi maschi, 8-12 settimane (20-25 g), BALB/c come donatori e topi C57BL/6 come riceventi. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali).
1. Preparazione delle polsini bronchiali e vascolari
Temporizzazione: 10 min (per tre polsini)
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Sulla base dell'esperienza con questo modello negli ultimi 10 anni, gli individui con competenze microchirurgiche di base richiedono in genere una curva di apprendimento di circa 50 animali. Una volta raggiunta la competenza, le procedure del donatore durano in genere 15-30 minuti, mentre le procedure del ricevente durano circa 60 minuti. Dopo la curva di apprendimento iniziale, la mortalità perioperatoria tende ad essere molto bassa.
Nella Figura 4A, B
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La tecnica della cuffia per il trapianto di polmone sinistro murino rappresenta un progresso significativo nella ricerca sui trapianti10,11. Le fasi critiche includono una dissezione precisa e meticolosa della struttura ilare e anastomosi sicure. Le modifiche possono essere apportate per soddisfare le esigenze sperimentali, ma è necessaria una curva di apprendimento. Il nostro gruppo ha modificato la posizione del topo ricevente .......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare rilevante sull'argomento di questo manoscritto.
ASK, AEG e DK sono supportati da P01 AI116501. ASK e EJ sono ulteriormente supportati da R01AI145108-01, R01HL166402. ASK è supportato da I01 BX002299-05. AEG e DK sono ulteriormente supportati da RO1HL09601. CL è supportato da R01 HL128492. Questo lavoro è parzialmente supportato da Chuck e Mary Meyers e Richard e Eibhlin Henggeler.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10-0 sutura in nylon | Surgical Specialties Corporation, Reading PA | AK-0106 | |
| 2 pinze Dumont #5 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 11251-20 | |
| 2 Halsted-Mosquito clamp punta curva | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91309-12 | |
| 6-0 sutura di seta intrecciata | Henry Schein Inc., Melville, NY, | 100-5597 | |
| 6-0 Sutura in polidiossanone PDS II e | Ethicon Inc., Somerville, NJ. | Z117H | |
| 70% etanolo | Pharmco Products Inc., Brookfield, CT | 111000140 | |
| Adson pinze | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91127-12 | |
| Balb/c topi | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA | 000651 | 8– 12 settimane; Maschio |
| coagulatore bipolare | Valleylab Inc., Boulder, CO | SurgII-20, E6008/E6008B | |
| C57BL/6 topi | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA | 000664 | 8– 12 settimane; Maschio |
| Clorexidina chiara | Hibiclens, Mö lnlycke Health Care US, LLC, Norcross, GA | 57591 | |
| Elettrocauterizzazione | Bovie | ||
| Forbici a molla in stile vannas fine | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 15000-03 | |
| Porta ago Halsey | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91201-13 | |
| Apparecchio Harvard Ventilatore per topo VentElite | Harvard Apparatus, Holliston, MA | 55-7040 | impostazioni 3L O2/minuto, frequenza respiratoria 130 bpm, volume corrente 0,4 cc |
| Soluzione di eparina | Abraxis Pharmaceutical Products, Schaumburg, IL | 504031 | 100 U/mL |
| soluzione salina normale per iniezione | Hospira Inc., Lake Forest, IL | NDC 0409-4888-20 | |
| Ketamina | VetOne, Boise, ID | 501072 | 50 mg/kg |
| König Mixter Micro pinza pediatrica Ganasce ad angolo retto | Medline, Northfield, IL, | MDS1247714 | Extra fine, lunghezza totale 5 1/2" (14cm) |
| Medline Cautery ad alta temperatura, con punta fine Leica | Microsystems, Inc., Allendale, NJ | 10 450 290 | |
| Microscopio Leica M80 F12 Supporto da pavimento | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 15396-00 | |
| Forbici a molla extra fini Moria | Parkland Scientific, Coral Springs, FL | V3000i | |
| Ohio Vaporizzatore di isoflurano | Vitrolife Inc., Englewood, CO, | 19001 | |
| Perfadex soluzione di glucosio destrano a basso contenuto di potassio | Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ | 353025 | soluzione di conservazione dell'elettrolita |
| petridish di polistirene | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 00632-11 e 00649-11 | 150 &volte; 25 mm e 60 &volte; 25 mm |
| S& T SuperGrip Pinze punta diritta e angolata | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 18200-20 | |
| Sistema di retrazione per piccoli animali | Puritan Medical Company LLC, Guilford, Maine | 823-WC | mini cotone affusolato con punta da 3 pollici applicatori |
| sterili cotton fioc | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD | ||
| Catetere IV SROX2419Z Surflo etfe, giallo, 24 G x 0,75" | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD | SROX1851Z | |
| Catetere IV Surflo etfe; Verde, 18 G x 2" | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD | SROX2032Z | |
| Catetere IV Surflo etfe; Rosa, 20 g x 1,25" | Thermocare, Inc., Incline Village, NV | ||
| Sistema di terapia intensiva per piccoli animali ThermoCare, | fornitura veterinaria dalla A alla Z, Dresda, TN | 008679 | 10 mg/kg |
| di xilazina | Aesculap, Inc., Valle del centro, PA, | FT480T | |
| Yasargil Clip Applier | Aesculap, Inc., Center Valley, PA, | FT264T | |
| Yasargil Clip per aneurisma temporaneo | Medline, Northfield, IL, |
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