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Articolo metodologico

Prelievo di sangue della vena succlavia nei ratti coscienti

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DOI:

10.3791/66075

3 novembre 2023

* These authors contributed equally

In questo articolo

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Sommario

Qui presentiamo una combinazione di efficaci metodi di restrizione dei ratti e puntura della vena succlavia che consentono una raccolta di sangue rapida, sicura e ripetuta nei ratti senza anestesia.

Abstract

Esistono diversi metodi consolidati per ottenere campioni di sangue ripetuti dai ratti, con i metodi più comunemente impiegati che sono il campionamento della vena caudale laterale senza anestesia e il campionamento della vena giugulare con anestesia. Tuttavia, la maggior parte di questi metodi richiede assistenza e attrezzature anestetiche e talvolta pone difficoltà in termini di raccolta del sangue o di scarsa qualità dei campioni di sangue. Inoltre, questi metodi di raccolta del sangue consumano molto tempo e risorse umane quando è necessario un campionamento ripetuto del sangue per un gran numero di ratti. Questo studio presenta una tecnica per il campionamento ripetitivo del sangue in ratti non anestetizzati da parte di un singolo individuo esperto. Campioni di sangue altamente soddisfacenti possono essere ottenuti perforando la vena succlavia. Il metodo ha dimostrato un impressionante tasso di successo complessivo del 95%, con un tempo mediano di soli 2 minuti dalla contenzione del ratto al completamento della raccolta del sangue. Inoltre, l'esecuzione di prelievi di sangue consecutivi all'interno dell'intervallo designato non infligge alcun danno ai ratti. Questo metodo merita di essere promosso per la raccolta del sangue, soprattutto negli studi di farmacocinetica su larga scala.

Introduzione

I ratti sono uno degli animali da esperimento più comuni e ci sono molti modi per ottenere campioni di sangue. Per gli esperimenti che prevedono un singolo prelievo di sangue nella fase conclusiva, è possibile ottenere una quantità sufficiente di sangue mediante puntura cardiaca o prelievo di sangue dell'aorta addominale1. Tuttavia, alcuni studi richiedono la raccolta ripetuta di sangue dai ratti per analisi del sangue o biochimiche di routine, specialmente negli studi di farmacocinetica e tossicologia, in cui è necessaria una raccolta ripetuta di sangue per determinare l'assorbimento, la distribuzione e il metabolismo dei farmaci

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Protocollo

Questo studio ha aderito alle linee guida delineate nell'ottava edizione della Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio13. La ricerca ha ricevuto l'approvazione del Comitato Etico del Secondo Ospedale dell'Università di Lanzhou ed è stata documentata in aderenza alle linee guida ARRIVE 2.014. Dodici ratti Wistar sani (sei maschi del peso di 290-330 g e sei femmine del peso di 250-280 g) di età compresa tra 12 e 16 settimane sono stati ospitati nel GLP Animal Laboratory dell'Università di Lanzhou per 3 giorni prima dell'esperimento vero e proprio. Le gabbie per topi utilizzate erano del tipo R5, misuravano 5....

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Risultati

I campioni di plasma di alta qualità mostrano una tonalità giallo pallido, chiarezza e trasparenza, privi di qualsiasi sfumatura rossa o coagulazione, come illustrato nella Figura 2A. La Figura 2B mostra rispettivamente l'emolisi (lato sinistro) o la coagulazione (lato destro) a causa di procedure improprie. Nel corso di 96 sessioni di raccolta del sangue in 4 giorni, i tempi medi di prelievo di sangue singolo per i gruppi A e B.......

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Discussione

Sebbene la raccolta del sangue della vena caudale sia il metodo più comune per il prelievo ripetuto di sangue nei ratti, potrebbe essere influenzata dai farmaci anestetici e, a causa delle piccole dimensioni della vena caudale, la quantità di sangue che può essere raccolta in un singolo caso è limitata, portando a una maggiore durata della raccolta del sangue 4,5. Sebbene i sistemi di cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) e spettrometria di massa tande.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno interessi finanziari o non finanziari rilevanti da divulgare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato sostenuto dal Cuiying Plan Project del Secondo Ospedale dell'Università di Lanzhou (Grant No. PR0121015) e il Laboratorio Chiave Provinciale del Gansu per la Ricerca sulle Malattie del Sistema Urinario (Grant No. 0412D2).

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
0,75% soluzione salina normaleGansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.— —Soluzione preparata di eparina sodica
Pipetta Pasteur da 1 ml BiosharpBS-XG-01-NSSiringa per prelievo di sangue
da 1 mL (26 G, 0,45 mm x 12 mm)Shinva Medical Instrument Co., Ltd.0,45 * 12RWLBRaccolta di sangue 
Provetta Eppendorf da 1,5 mLBiosharpBS-15-MConservazione e raccolta del sangue
75% di alcol medicoShandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.— —Disinfezione del sito di raccolta del sangue di ratto
Porta provette da centrifugaBiosharpBS-05/15-SM60— —
Bilancia elettronicaShanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.JE1002Pesare l'iniezione
sodio eparinaHebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.— —Sciacquare la siringa e la provetta EP; diluire con soluzione fisiologica a 25 U/mL
Centrifuga a bassa temperaturaHuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.  H1750RSeparazione del siero
di

Riferimenti

  1. UCSF Office of Research Institutional Animal Care and Use Program. Blood collection: The rat IACUC Guideline. , https://iacuc.ucsf.edu/sites/g/files/tkssra751/f/wysiwyg/GUIDELINE%20-%20Blood%20Collection%20-%20Rat.pdf (2022).
  2. Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats. The Journal of Toxicological Sciences. 4....

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Ristampe e permessi

Errata corrige


Formal Correction: Erratum: Subclavian Vein Blood Sampling in Conscious Rats
Posted by JoVE Editors on 3/21/2024. Citeable Link.

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Campionamento della vena succlaviaraccolta di sangue nei ratticampionamento in ratti coscienticampionamento ematico ripetitivotecnica di contenimento dei rattiratti non anestetizzatistudi farmacocineticiqualit del campione di sangueraccolta di sangue con siringatecnica di emostasi