Modello murino di crescita collaterale coronarica attraverso ischemia ripetitiva

Summary

Questo articolo presenta un metodo per studiare la crescita collaterale coronarica postnatale indotta da ischemia ripetitiva nei topi, incluso l'impianto chirurgico di un occlusore pneumatico sull'arteria discendente anteriore sinistra, un sistema di gonfiaggio automatizzato per il protocollo di ischemia ripetitiva e potenziali metodi per valutare la crescita collaterale.

Abstract

I collaterali coronarici sono un bypass naturale nelle cardiopatie ischemiche (IHD) e quindi per molti anni la crescita collaterale coronarica (CCG) è stata un promettente bersaglio terapeutico per l'IHD, in particolare nei pazienti con diabete di tipo 2 o sindrome metabolica in cui la CCG è compromessa. Tuttavia, questo processo è poco studiato, in parte a causa della mancanza di modelli murini di CCG, anche se sono stati stabiliti altri modelli animali, come maiali, cani e ratti. Un modello murino può sfruttare le numerose modificazioni genetiche disponibili per la specie, tra cui il tracciamento del lignaggio e la regolazione genica (sovraespressione o knockout), per chiarire il processo e il meccanismo della CCG, compresi i percorsi e i tipi di cellule coinvolte. Pertanto, abbiamo deciso di sviluppare un modello murino di CCG indotta da ischemia ripetitiva (RI) tramite transitorietà, occlusione ripetitiva dell'arteria discendente anteriore sinistra (LAD). Questo manoscritto fornisce dettagli su questo modello murino di CCG, tra cui l'intervento chirurgico RI per impiantare un occlusore pneumatico sul LAD, il sistema di gonfiaggio automatizzato basato sulla pressione utilizzato per controllare la pressione e i tempi di gonfiaggio e la sequenza del protocollo RI. Questo metodo ha già generato una pubblicazione per chiarire il processo di CCG indotto da RI, dimostrando che l'angiogenesi germinativa dà origine a arterie coronarie mature in CCG in cuori di topi adulti.

Introduction

La cardiopatia ischemica (IHD) è la principale causa di mortalità negli Stati Uniti e ogni anno vengono eseguiti più di 200.000 interventi chirurgici di bypass coronarico nel tentativo di trattare^{la malattia1}. I collaterali coronarici, anastomosi tra i rami dell'albero coronarico, sono un bypass naturale in grado di rifornire di sangue il tessuto ischemico a valle di un blocco²; Tuttavia, le persone mostrano un'ampia variazione nell'estensione delle loro reti di garanzie native ^3,4. I pazienti con IHD che hanno una collateralizza....

Protocol

Gli esperimenti sugli animali descritti sono stati condotti in conformità con la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali della Northeast Ohio Medical University.

1. Preparazione chirurgica

NOTA: Per il protocollo RI, utilizzare topi C57BL/6 di entrambi i sessi del peso di almeno 25 g. Utilizzare una tecnica asettica durante l'intervento.

1. Apparecchio
   1. Sterilizzare tutti gli strumenti in un'autoclave o in uno sterilizzatore a microsfere. Sterilizz....

Results

Su 136 topi C57BL/6, inclusi maschi e femmine, il tasso di sopravvivenza dell'intervento RI è stato del 93,4%, con l'80,9% dei topi sopravvissuti durante l'intero protocollo RI di 17 giorni.

Il protocollo RI del topo è stato ottimizzato sulla base di precedenti modelli di RI animale^12,16, che presentano brevi episodi di ischemia senza lesioni permanenti al miocardio. Durante l'intervento chirurgico, la valutazione funzionale dell'occlu.......

Discussion

I collaterali coronarici sono un bypass naturale per i pazienti con IHD. Dopo il fallimento degli studi clinici sull'angiogenesi¹⁷, promuovere lo sviluppo collaterale coronarico potrebbe essere un approccio terapeutico migliore per questi pazienti. A differenza dei capillari derivati dall'angiogenesi, che hanno un solo strato di cellule endoteliali, i collaterali sono arterie mature con la copertura di cellule muscolari lisce. I collaterali riforniscono il flusso .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
# 5 / 45 gradi pinze	Fine Science Tools	11251-35
1/4 "elettrovalvola elettrica in ottone chiuso	US Solid	USS2-00054	sistema di gonfiaggio
1/4 "elettrovalvola elettrica in ottone aperto	AceCrew		1
/4 "tubo pneumatico	... Cina SNS Pneumatic Co., Ltd	‎ APU1 / 4-32.8ft
/4 "connettori a pressione	RuoFeng	543Y	Dispositivo a pulsante
1/8" raccordi in ottone	Sistema di gonfiaggio	industriale
2 posizioni Elettrovalvola elettrica pneumatica a 2 posizioni	U.S. Solid	USS- PSV00033	dispositivo a pulsante
20G angiocath	BD	381703
45 gradi Portaaghi Castroviejo	Roboz	RS-6421
6-0 suture in poliglactina	DemeTECH	G176011B13M
6-0 suture in polipropilene	AD Sugical	XS-P618R11
70% etanolo
8-0 suture in polipropilene	DemeTECH	PM19800, 65G0P
Betadine	Purdue Products	367618150085
Forbici a punta smussata	World Precision Instruments	500366
		freccia in fibra di carbonio	; tagliata a 12,5 cm
Tamponi di cotone (3")	Spugne di garza Puritan	872-PC DBL
Curity (2x2)	Cardinal Health	2146
Dipsey piombini girevoli	Gremlin		d'acquagabbia post-chirurgica
Crema per elettrodi	Signacreme	17-05
Glicopirrolato	verso ovest	0143-9679-01
Emostatici Hartman Strumenti di	scienza fine	13003-10
Isoflurano	Covetrus	29404
Ketofen (ketoprofene)	zoetis	10004031
Lidocaina (2%)	Covetrus	14583
MICROFIL (giallo)	Flow Tek	MV-122
Mini pulsante	Interactivia	E-SWC-PBM-PBS-105	pulsante
Regolatore di pressione dell'aria miniaturizzato	PneumaticPlus	PPR2-N02BG-4	a pulsante
Divaricatore a molla Mini-Colibri	Fine Science Tools	17000-01
Ventilatore MiniVent	Apparecchio Harvard	73-0044
Occlusore
Pinza con manico ottagonale	Strumenti di scienza fine	11041-08
Sistema di intubazione per roditori Ohan	Fornitura BMR	Ohan-201
Soluzione di paraformaldeide 4% in tubo
PE20
			PE50
Girevole in plastica (1 canale)	post-chirurgica	Instech	375/25PS
Tampone PBS premiscelato, 10x	Roche	11666789001	Diluito a 1x
Manometro	Manometri PIC	102D-158D-10/32	dispositivo a pulsante
Timer di uscita digitale programmabile	BN-LINK	‎ Sistema di gonfiaggio BND-60/SU105
Unguento oftalmico Puralube Vet	Dechra	17033-211-38
Divaricatori con elastomero 18200-07	Strumenti per le scienze fini	18200-10 e 18200-11
Monitor chirurgico per roditori +	Scintica	900-0053-01
Pinze per la legatura delle suture con manico rotondo	scienze fini	18026-10
Chiusura a scatto canna girevole (misura 5)	Eagle Claw	‎ 01032-005	gabbia post-chirurgica
Portaaghi dritti	Fine Science Tools	12060-01
Tether	Instech	PS62