Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6J e valutare il successivo comportamento neurologico e le caratteristiche istopatologiche.
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Articolo metodologico
Induzione di ictus ischemico acuto nei topi utilizzando la tecnica di occlusione dell'arteria media distale
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'ictus ischemico rimane la causa predominante di mortalità e compromissione funzionale tra le popolazioni adulte a livello globale. Solo una minoranza di pazienti con ictus ischemico è idonea a ricevere la trombolisi intravascolare o la terapia di trombectomia meccanica entro la finestra temporale ottimale. Tra i sopravvissuti all'ictus, circa due terzi soffrono di disfunzioni neurologiche per un periodo prolungato. La creazione di un modello sperimentale stabile e ripetibile di ictus ischemico è estremamente importante per indagare ulteriormente i meccanismi fisiopatologici e sviluppare strategie terapeutiche efficaci per l'ictus ischemico. L'arteria cerebrale media (MCA) rappresenta la posizione predominante dell'ictus ischemico nell'uomo, con l'occlusione MCA che funge da modello frequentemente impiegato di ischemia cerebrale focale. In questo protocollo, descriviamo la metodologia per stabilire il modello di occlusione MCA distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6. Poiché il sito di occlusione si trova nel ramo corticale dell'MCA, questo modello genera una lesione infartuale moderata limitata alla corteccia. In questo modello, la caratterizzazione neurologica, comportamentale e istopatologica ha dimostrato una visibile disfunzione motoria, degenerazione neuronale e pronunciata attivazione di microglia e astrociti. Pertanto, questo modello murino dMCAO fornisce uno strumento prezioso per indagare sull'ischemiaictus e merita la popolarità.
Introduzione
L'ictus è una comune malattia cerebrovascolare acuta caratterizzata da un'elevata incidenza di disabilità e mortalità1. Di tutti i casi di ictus, quasi l'80% appartiene all'ictus ischemico2. Fino ad ora, la trombolisi endovenosa rimane uno dei pochi approcci produttivi per il trattamento dell'ictus ischemico acuto. Tuttavia, l'efficacia del trattamento trombolitico è limitata dalla ristretta finestra temporale effettiva e dal verificarsi di trasformazione emorragica3. Nella fase di riabilitazione a lungo termine a seguito di un ictus ischemico, è probabile che un numero considerevole di pazienti m....
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Protocollo
Il protocollo sperimentale è stato approvato dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali dell'Università di Jianghan ed è stato condotto in conformità con le Linee Guida Etiche per gli Animali da Esperimento emesse dal Centro per il Controllo delle Malattie della Cina. In questo protocollo sono stati utilizzati topi maschi adulti C57BL/6J, di 10 settimane, del peso di 24-26 g. Tutti i topi sono stati alloggiati in un ambiente controllato con ciclo luce/buio di 12 ore con cibo e acqua ad libitum.
1. Preparazione preoperatoria
NOTA: Gli strumenti e le apparecchiature chiave ....
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Risultati
Gli strumenti chiave utilizzati per eseguire il dMCAO sono il set di strumenti microchirurgici, il vaporizzatore di isoflurano e il generatore di elettrocoagulazione microchirurgica monopolare mostrato nella Figura 1. La procedura sperimentale di questo studio è illustrata nella Figura 2. In breve, è stata impiegata una craniotomia a finestra ossea piccola per esporre l'MCA distale, che è stato successivamente coagulato per indurre un'ischemia cerebrale focale p.......
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Discussione
Nell'attuale protocollo del modello dMCAO per elettrocoagulazione per craniotomia, le procedure chirurgiche sono condotte con un'invasività minima, in cui solo una parte del muscolo temporale viene separata per mitigare gli effetti avversi sulla funzione masticatoria. Tutti i topi si sono ripresi bene dopo la procedura, senza che siano stati osservati casi di difficoltà alimentari. L'MCA può essere facilmente individuato nell'osso temporale del topo, facilitando così l'identificazione precisa delle posizioni idonee per l.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi contrastanti da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuto dalle sovvenzioni della Nature Science Foundation della provincia di Hubei (2022CFC057).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 2,3,5-Trifeniltetrazolio cloruro (TTC) | Sigma-Aldrich | 108380 | Colorante per colorazione TTC Piastra di |
| coltura a 24 pozzetti | Corning (USA) | CLS3527 | Recipiente per colorazione TTC 4 |
| % paraformaldeide | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. | G1101 | Fissazione tissutale |
| 5% siero bovino albumina | Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd. | AR004 | Sutura all'acido poliglicolico 5-0 che blocca l'antigene non specifico |
| Jinhuan Medical Co., Ltd | KCR531 | Materiale per chirurgia | |
| Macchina per anestesia | Midmark Corporation | VMR | Animale anestetizzato |
| Antifade mezzo di montaggio | Beyotime Biotech | P0131 | Guarnizione per colorazione IF |
| Automazione-disidratazione dei tessuti macchina | Leica Biosystems (Germania) | TP1020 | Disidratare i tessuti |
| Crema depilatoria | Veet (Francia) | 20220328 | Materiale per chirurgia |
| Diclofenac sodio gel | Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical Co., Ltd. | H10950214 | Analgesia per animali |
| Punta da trapano (0,8 mm) | Rwd Life Science Co., Ltd. | Attrezzature per chirurgia | |
| Soluzione colorante Eosin | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. | G1001 | Colorante per H& E colorazione |
| Unguento per gli occhi | Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd | H44023098 | Materiale per chirurgia |
| Microscopio a fluorescenza | Olympus (Giappone) | BX51 | Acquisizione di immagini |
| GFAP Anticorpo monoclonale di topo | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA) | 3670 | Anticorpo primario per colorazione IF |
| Capra anti-topo Alexa 488-coniugato IgG | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA) | 4408 | Secondo anticorpo per colorazione IF |
| Capra anti-coniglio Alexa 594-coniugato IgG | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA) | 8889 | Secondo anticorpo per colorazione IF |
| Misuratore di forza di presa | Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd. | Apparecchiatura XR501 | per test comportamentali |
| Soluzione colorante con ematossilina | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd. | G1004 | Colorante per H& Colorazione E |
| Iba1 Anticorpo monoclonale di coniglio | Abcam | ab178846 | Anticorpo primario per colorazione IF |
| Isoflurane | Rwd Life Science Co., Ltd. | R510-22-10 | Misuratore |
| flusso sanguigno laser doppler | Moor Instruments (UK) | moorVMS | Monitoraggio del flusso sanguigno |
| Meloxicam | Boehringer-Ingelheim | J20160020 | Analgesia per animali |
| Microdrill | Rwd Life Science Co., Ltd. | 78001 | Attrezzature per chirurgia |
| Set di strumenti microchirurgici | Rwd Life Science Co., Ltd. | SP0009-R Apparecchiature | per chirurgia |
| Microtomo | Thermo Fisher Scientific (USA) | HM325 | Produzione di sezioni di tessuto |
| Lama per microtomo | Leica Biosystems (Germania) | 819 | Produzione di sezioni di tessuto |
| Generatore di elettrocoagulazione monopolare | Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd. | CZ0001 | Attrezzatura per chirurgia |
| Mupirocina unguento | Tianjin Smith Kline & Laboratori < > francesi Ltd. | H10930064 | Anti-infezione per animale |
| NeuN Coniglio anticorpo monoclonale | Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA) | 24307 | Anticorpo primario per colorazione IF |
| Balsamo neutro | Absin Bioscience | abs9177 | Sigillo per H& E colorazione |
| Centro di inclusione della paraffina | Thermo Fisher Scientific (USA) | EC 350 | Produrre blocchi di paraffina |
| Pentobarbital sodico | Sigma-Aldrich | P3761 | animale eutanasia |
| Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd | C0221A | Risciacquo per la sezione del tessuto | |
| Rasoio | Shenzhen Codos Electrical Appliances Co., Ltd. | CP-9200 | Attrezzatura per la chirurgia |
| Soluzione di citrato di sodio | Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd. | P0083 | Recupero dell'antigene per colorazione IF |
Riferimenti
- Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. Hyperacute management of ischemic strokes: JACC Focus Seminar. J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).
- GBD 2016 Stroke Collaborators. Global, regional, and national burde....
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Ristampe e permessi
