Viene presentato un protocollo per la chirurgia dell'osteotomia femorale con l'uso della fissazione interna della placca in axolotl maturi. La procedura può essere utilizzata per eseguire studi comparativi sulla rigenerazione degli arti e sulla guarigione delle fratture negli anfibi acquatici.
Articolo metodologico
Stabilizzazione di un'osteotomia del femore con una fissazione della placca nell'Ambystoma mexicanum
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'axolotl (Ambystoma mexicanum) è un promettente organismo modello per la medicina rigenerativa grazie alla sua notevole capacità di rigenerare organi persi o danneggiati, inclusi arti, cervello, cuore, coda e altri. Gli studi sull'axolotl hanno fatto luce sulle vie cellulari e molecolari che regolano l'attivazione dei progenitori e il ripristino dei tessuti dopo una lesione. Questa conoscenza può essere applicata per facilitare la guarigione di lesioni incompetenti alla rigenerazione, come la mancata unione ossea. Nell'attuale protocollo, viene descritta la stabilizzazione dell'osteotomia del femore utilizzando un sistema di fissazione interna della placca. La procedura è stata adattata per l'uso negli animali acquatici (axolotl, Ambystoma mexicanum). Sono stati utilizzati axolotl da muso a coda di ≥20 cm con femori completamente ossificati, di dimensioni simili a quelle di un topo, e particolare attenzione è stata prestata al posizionamento e alla fissazione della placca, nonché alla cura postoperatoria. Questa tecnica chirurgica consente una fissazione ossea standardizzata e stabilizzata e potrebbe essere utile per il confronto diretto con la rigenerazione degli arti axolotl e studi analoghi sulla guarigione ossea tra anfibi e mammiferi.
Introduzione
L'axolotl (Ambystoma mexicanum) è un modello importante per la rigenerazione degli organi, tra cui la coda, il midollo spinale, il cervello, il cuore, le branchie e gli arti 1,2,3,4,5. Studi dettagliati sulla rigenerazione degli arti axolotl hanno scoperto meccanismi di dedifferenziazione cellulare e la formazione di un pool di cellule staminali, blastema, nel sito di amputazione. A causa della capacità delle cellule del blastema di ricostruire tutte le parti mancanti degli arti, incluso uno scheletro modellato 6,7, l'axolotl sembra essere un organismo modello attraente per gli studi di guarigione ossea. Recentemente, diversi studi si sono concentrati maggiormente sulla biologia ossea negli axolotl, descrivendo la morfologia scheletrica, la composizione cellulare e le dinamiche di ossificazione.
Nei mammiferi è stato riscontrato che il processo di guarigione ossea nelle ossa lunghe avviene attraverso l'ossificazione endocondrale e consiste in diverse fasi: ematoma, tessuto di granulazione e formazione di callo molle, ossificazione del callo in callo duro e osso intrecciato e rimodellamento osseo8. Uno studio recente ha dimostrato che stadi simili possono essere osservati nella guarigione ossea dell'axolotl9.
Fino ad ora, le fratture dell'axolotl sono state studiate in un sistema non stabilizzato, in cui l'osso viene semplicemente tagliato con le forbici per iridectomia. Le grandi fratture sono state create nello zeugopodi, dove l'osteotomia viene eseguita su una delle ossa, mentre l'altra funge da supporto10,11. Al contrario, le fratture sono studiate di routine nei mammiferi, compresi ratti e topi, utilizzando sistemi di fissazione affidabili, come il perno intramidollare e le placche di allineamento osseo, per controllare le dimensioni della frattura e garantire l'allineamento osseo.
Pertanto, il metodo mira a garantire una fissazione stabilizzata e uniforme del femore axolotl prima dell'osteotomia. Al fine di rendere gli studi sull'axolotl più comparabili ai mammiferi, inclusi topi e esseri umani, sono stati presi in considerazione il pin12 per via endomidollare, il fissatore esterno della piastra13,14 e la fissazione interna della piastra di allineamento osseo 15,16,17. Quest'ultimo ha dimostrato di garantire una corretta fissazione dell'osso e di creare uno spazio di una certa dimensione utilizzando uno o due tagli con una sega Gigly di un diametro specifico. Poiché gli axolotl rappresentano le larve acquatiche di Ambystoma mexicanum, il fissatore esterno potrebbe aver causato complicanze post-chirurgiche a causa della ferita aperta e del contatto con l'acqua. Poiché gli axolotl non sviluppano centri di ossificazione secondari anche fino a molto tardi nel loro sviluppo (20 anni,18 anni), e quindi il chiodo endomidollare standard utilizzato nei topi potrebbe non essere impedito di perforare le epifisi, è stata presa la decisione di applicare un metodo di fissazione della placca interna agli axolotl di grandi dimensioni. Negli axolotl di grandi dimensioni, le dimensioni del femore e il grado di ossificazione assomigliano a quelli di un topo adulto, consentendo così l'osteotomia diafisaria media con fissazione della placca in titanio1.
La dimensione della fessura di frattura determina in gran parte la dinamica di guarigione e l'esito. Ad esempio, in un topo, le fratture stabilizzate di 0,25 mm guariscono principalmente attraverso l'ossificazione intramembranosa a causa delle loro piccole dimensioni e della rigida stabilizzazione; una frattura di 0,7 mm guarisce per ossificazione endocondrale, con formazione di un callo cartilagineo attorno alla frattura; I difetti di grandi dimensioni, come i difetti di dimensioni critiche di 3,5 mm, non guariscono completamente e quindi vengono utilizzati per modellare la mancata unione delle fratture ossee16. In questo studio, è stato stabilito il protocollo di fissazione della placca del femore axolotl prima dell'osteotomia utilizzando l'esempio di una fessura di frattura di 0,7 mm con l'obiettivo finale di confrontare la guarigione dell'osso axolotl con quella del topo9.
Dopo l'osteotomia, le fratture hanno subito il processo di ossificazione endocondrale, anche se più lento rispetto ai topi, probabilmente a causa dello stile di vita acquatico degli axolotl e dei tassi di divisione cellulare più lenti. Nel metodo qui presentato, viene mostrata l'osteotomia con gap di 0,7 mm con fissazione a placca rigida; Tuttavia, sono potenzialmente possibili altre dimensioni di fessure e fissatori semiflessibili, nonché piastre di materiali diversi. Nel complesso, il metodo qui presentato può essere utilizzato per la fissazione ossea standardizzata e sarà utile per gli studi che confrontano la rigenerazione degli arti axolotl con la guarigione ossea o per studiare la guarigione ossea negli axolotl in diverse condizioni per garantire una fissazione standardizzata della frattura.
Protocollo
La seguente procedura è stata eseguita con l'approvazione del Magistrato di Vienna (GZ: MA 58-65248-2021-26). Axolotl lunghi 5-8 anni di età ≥ 20 cm dal muso alla coda (muso fino alla punta della coda) sono stati utilizzati per la chirurgia delle fratture e le amputazioni. Sia i maschi che le femmine sono stati utilizzati per gli interventi chirurgici. Gli axolotl sono stati allevati nella struttura dell'Istituto di Ricerca di Patologia Molecolare. Il dolore e il rischio di infezioni sono stati gestiti con analgesici e antibiotici adeguati per garantire un esito positivo. I reagenti e le attrezzature utilizzate per lo studio sono elencati nella tabella dei materiali.
1. Preparazione degli animali
- Immergere l'animale in una soluzione di benzocaina allo 0,03% per circa 15-20 minuti fino a raggiungere la sedazione completa e non vi è alcun movimento riflessivo quando l'arto si tocca con una pinzetta.
- Posiziona l'animale con il lato ventrale rivolto verso il basso su tovaglioli di carta bagnati imbevuti di soluzione di benzocaina allo 0,03% e coprilo con salviette di carta imbevute di benzocaina. La pelle degli animali acquatici, come gli axolotl, è sensibile all'essiccazione e, quindi, è essenziale coprire la superficie corporea per prevenire la disidratazione e garantire la respirazione cutanea (della pelle).
- Allungare l'arto posteriore da azionare utilizzando una pinza ad anello. Non applicare reagenti disinfettanti, come l'etanolo, poiché la pelle dell'axolotl è sensibile alle sostanze chimiche e si irrita facilmente. Utilizzare invece 0,7x PBS (A-PBS) con 50 U/mL di penicillina e 20 μg/mL di streptomicina per la pulizia dell'arto e successivamente per l'irrigazione ossea dopo il taglio.
NOTA: L'infezione non è generalmente un problema per gli interventi chirurgici eseguiti sugli axolotl. Tuttavia, a causa della natura acquatica di questi animali e delle suture poste sulla superficie della pelle, si consiglia l'uso di antibiotici per prevenire qualsiasi contaminazione del sito chirurgico.
2. Chirurgia
NOTA: Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici. A questo scopo sono adatti metodi di sterilizzazione comuni come la sterilizzazione a caldo, la sterilizzazione in autoclave e il lavaggio in etanolo al 70%, seguiti da un'accurata rimozione dei residui di alcol. Se si opera su più animali, sterilizzare gli strumenti tra un dispositivo di sterilizzazione a perline calde o etanolo al 70%.
- Praticare un'incisione longitudinale laterale (1,5-2 cm) con un bisturi sopra l'osso del femore che copre tutta la coscia nell'arto posteriore superiore. Per fare questo, palpare l'osso prima di tagliare la pelle.
- Spostare con cautela i muscoli e i nervi dal sito dell'intervento chirurgico senza tagliare. Usa una pinza ad arco per farlo in modo efficiente.
- Metti delicatamente una pinza ad arco sotto il femore per esporlo per l'intervento chirurgico.
- Posizionare una piastra di fissaggio rigida da 7,75 mm a 4 fori insieme alla diafisi del femore, evitando di toccare le articolazioni, e fissarla in posizione allineata con una pinza.
- Utilizzare quattro viti in titanio da 2 mm per fissare l'osso alla placca.
NOTA: Le viti utilizzate in questo protocollo hanno un design complesso e sono costituite da 4 parti: la parte principale (verrà avvitata nell'osso), la testa della vite (consente la rimozione delle viti e della piastra utilizzando la chiave a tubo quadrata), il collo più stretto (utilizzato come punto di rottura una volta che la vite è stata serrata nell'osso) e una maniglia a vite (utilizzata per il fissaggio al cacciavite e al dispositivo di guida della sega). - L'ordine di fissaggio delle viti è importante. Inizia prima con le viti interne, quindi con le due viti esterne per assicurarti che la placca sia allineata con l'asse osseo. Utilizzare un trapano manuale per creare il primo foro nell'osso per un facile inserimento della vite, seguito dal 1° posizionamento della vite. Forare al centro della circonferenza ossea per evitare l'assottigliamento dell'osso su un lato, che può provocare una frattura ossea spontanea. Utilizzare l'irrigazione con 0,7x PBS + 1% Pen/Strep durante la perforazione. Non rompere l'impugnatura della vite da 1punto (opzionale: 1punto e 2punto).
- Applicare il dispositivo di guida della sega sulla/e vite/e 1° (opzionale: 1e 2° ) e allinearlo con l'osso e la piastra.
NOTA: In questo protocollo, una piastra, viti, un dispositivo di guida della sega e una sega sono forniti dallo stesso produttore e ottimizzati per adattarsi l'uno all'altro. Il dispositivo di guida della sega può essere disponibile in diverse dimensioni per essere compatibile con diverse piastre e dimensioni della sega. - Utilizzare il dispositivo di guida della sega per forare e inserire il resto delle viti. Assicurarsi che la placca sia allineata con l'osso. Rompere le maniglie delle viti.
- Posizionare un pezzo di pellicola di plastica (6-7 mm per 4-5 cm), sterilizzato strofinando con etanolo al 70% e poi sterilizzato in autoclave o a caldo (140 °C per 4 ore), sotto il femore per evitare danni ai tessuti molli durante il processo di osteotomia.
NOTA: A tale scopo, è possibile utilizzare un pezzo di pellicola di plastica, tagliare un sacchetto per la sterilizzazione a caldo. - Posizionare la sega a filo Gigly tra l'osso e la pellicola di protezione.
- Tagliare l'osso con la sega a filo Gigly da 0,66 mm, creando un unico taglio da 0,7 mm nel femore. Utilizzare un'irrigazione costante con 0,7x PBS + 1% Pen/Strep durante il taglio per ridurre al minimo i danni ai tessuti e l'attrito.
- Rimuovere la sega e la guida della sega e utilizzare un cacciavite per rompere le maniglie delle viti dalle viti.
- Rimuovere la pellicola protettiva e irrigare il sito chirurgico con 0,7x PBS + 1% Pen/Strep.
- Coprire la parte superiore della piastra e le viti con cera d'api sterile per proteggere la pelle e i muscoli dall'irritazione dei bordi delle viti.
- Posiziona i muscoli e la pelle sopra la cera d'api ossea.
- Chiudere il sito di incisione con una sutura sintetica 7.0 (polipropilene/polietilene) utilizzando semplici punti interrotti. La sutura sintetica viene utilizzata per ridurre al minimo la contaminazione con batteri e funghi presenti nell'acqua.
3. Gestione postoperatoria
- Per risvegliare l'animale, metterlo in una vasca con acqua fresca di laghetto artificiale, integrata con 50 U/mL di penicillina, 20 μg/mL di streptomicina e analgesico Butorphanol (0,5 mg/L di acqua).
- Osserva l'animale mentre inizia a muovere le branchie, fare passi e nuotare, di solito entro 1 ora dall'intervento.
- Tenere l'animale per 3 giorni in acqua di laghetto artificiale con 50 U/mL di penicillina e 20 μg/mL di streptomicina prima di rimetterlo nel serbatoio di contenimento. Per garantire l'analgesia, aggiungere butorfanolo (0,5 mg/L di acqua).
- Assicurarsi che le suture rimangano in posizione e che si verifichi una corretta guarigione della ferita.
Risultati
La procedura chirurgica qui descritta (Figura 1) dura tra i 20 e i 30 minuti e richiede un chirurgo e un assistente. Opzionalmente, utilizzare un microscopio binoculare per dissezione o un sistema di lenti d'ingrandimento.
Figura 1: Schemi della procedura chirurgica e configurazione sperimentale. (A) Il femore viene esposto mediante dissezione cutanea e allontanamento dei muscoli dal campo operatorio. (B) Una placca in titanio è allineata con il femore. (C) Il 1° foro interno viene creato utilizzando un trapano manuale. (D) Una vite viene inserita nel 1° foro. (E) La sega e la guida del trapano sono inserite e fissate all'impugnatura della1a vite. (F) Il resto delle viti è fissato nell'ordine indicato. (G) La sega e la guida del trapano vengono rimosse con cura e le impugnature delle viti vengono rotte durante la rotazione del cacciavite a causa della maggiore rigidità dell'osso rispetto al collo della vite. (H) La pellicola di sicurezza e la sega Gigly sono posizionate sotto l'osso. (I) L'osteotomia viene eseguita sotto irrigazione costante del sito di taglio. (J) Le teste delle viti sono ricoperte con cera d'api d'osso sterile prima di sostituire il muscolo e chiudere la pelle con punti di sutura. (D,E,F): i numeri indicano la sequenza in cui vengono praticati i fori e posizionate le viti. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Particolare attenzione deve essere prestata alle fasi di allineamento placca-osso e di attacco della placca (Figura 2). La varianza nell'età dell'axolotl porta a lievi differenze nelle dimensioni, nella forma e nel grado di ossificazione del femore. Pertanto, in alcuni casi, era difficile trovare una buona posizione della piastra per garantire spazio sufficiente per il fissaggio delle viti. In totale, il fallimento della fissazione è stato osservato nel 23,5% degli animali, il che potrebbe essere il risultato di ossa più strette o meno ossificate negli animali più giovani (Figura 3). Il fallimento della fissazione ha provocato un disallineamento dell'osso osteotomizzato. Ciò era rilevabile dalla presenza di viti staccate, dallo spostamento dei frammenti ossei con disallineamento dall'asse osseo di >20° o da uno spostamento laterale pronunciato. Mentre il primo potrebbe essere osservato durante la raccolta dei campioni, gli altri potrebbero non essere evidenti fino a quando non viene eseguita l'analisi microCT. Mentre negli arti correttamente allineati, il tessuto di granulazione si trovava nella fessura della frattura 3 settimane dopo l'intervento chirurgico, nei campioni disallineati appariva molto più grande, probabilmente nel tentativo di stabilizzare l'osso.
Figura 2: Panoramica della procedura chirurgica e dell'animale risultante con osteotomia dell'arto posteriore sinistro. (A) Vengono visualizzate le fasi principali dell'intervento: esposizione del femore, corretto allineamento della placca in titanio, utilizzo di una guida per sega per la creazione di fori nell'osso utilizzando un trapano manuale e applicazione delle viti, utilizzo di pellicola protettiva e guida per sega (freccia gialla) per osteotomia, Frattura del femore di 0,7 mm (freccia bianca), coprendo le teste delle viti con cera d'api in osso sterile (freccia viola) e il risultato finale con arto chiuso. (B) Animale dopo l'intervento chirurgico. La freccia indica l'arto posteriore sinistro, dove è stato eseguito l'intervento di osteotomia. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
L'uso di cera d'api sterile prima della sutura della pelle (Figura 2) ha ridotto la riapertura postoperatoria della pelle sopra la placca di fissaggio. L'arto è rimasto funzionale e ha potuto essere utilizzato per stare in piedi e camminare poco dopo la rimozione dell'anestesia.
Figura 3: Risultati rappresentativi dell'osteotomia fissata con piastra di axolotl. (A) Scansioni MicroCT di femori intatti e fratturati. Notare una lacuna nell'osso 3 settimane dopo la frattura. Il 23,5% degli arti mostrava una fissazione fallita, con conseguente disallineamento osseo. Nei campioni fissati, il callo duro si forma a 6-9 mesi dopo la frattura. (B) Colorazione Safranina O/Verde chiaro di femori intatti e fratturati. Notare uno spazio vuoto con il tessuto di granulazione nell'osso 3 settimane dopo la frattura. A 6 mesi dalla frattura, il callo duro è costituito da osso e cartilagine intrecciati. Barre della scala: 1 mm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
La microCT e l'analisi istologica (colorazione Safranin O/Light Green) hanno permesso di visualizzare la posizione dei frammenti ossei e le dimensioni della fessura della frattura, nonché lo stato di guarigione dell'osso. I dati MicroCT sono stati acquisiti con una risoluzione nominale di 10,05 μm in uno scanner per campioni disponibile in commercio e analizzati utilizzando un software compatibile (vedi Tabella dei materiali) come descritto in Polikarpova et al.9. A differenza dei mammiferi, dove la frattura della stessa dimensione (0,7 mm) è chiusa con callo cartilagineo e osseo 3-5 settimane dopo l'intervento, nessun callo è stato osservato 3 settimane dopo l'intervento in axolotl. Tipicamente, il callo cartilagineo era visibile a 3 mesi dopo l'intervento9 e il callo osseo ossificato a 6 mesi dopo l'intervento (Figura 3).
Discussione
Il metodo attualmente descritto di fissazione della placca femorale e osteotomia ne consente l'applicazione in animali acquatici, come l'Ambystoma mexicanum (axolotl). Questo metodo chirurgico è stato recentemente utilizzato per confrontare la guarigione delle fratture e la rigenerazione degli arti negli axolotl con la guarigione delle fratture nei topi9. Come nei topi, una piastra di fissaggio a 4 fori può essere fissata all'osso con viti autodistruttive e una sega Gigly può essere utilizzata per creare una frattura di dimensione uniforme15. La fissazione della placca facilita la ritenzione delle dimensioni della fessura e garantisce l'allineamento dei frammenti ossei. Anche il metodo analgesico è stato ottimizzato implementando il bagno di butorfanolo in quanto è meno invasivo (rispetto alle iniezioni di buprenorfina), che non è segnalato per influenzare la guarigione ossea (come con il carprofene). Tuttavia, poiché si sa poco sulla gestione del dolore negli anfibi in generale e nel dolore postoperatorio in particolare, l'uso di un trattamento analgesico preventivo può essere suggerito come un ulteriore perfezionamento della procedura. Qui, l'adattamento dei protocolli utilizzati in altre specie di anfibi potrebbe essere considerato19. Per un'ulteriore valutazione obiettiva dello stato di salute dell'animale dopo l'intervento chirurgico si raccomanda l'implementazione e l'applicazione di specifiche schede di valutazione per la definizione dell'intervento e degli endpoint umani.
A differenza del metodo descritto per il topo16, un film plastico viene utilizzato per proteggere il tessuto sottostante prima dell'osteotomia. Inoltre, a causa della natura acquatica e della muscolatura degli arti meno pronunciata, gli axolotl richiedevano un cerotto di protezione in cera d'api sulla parte superiore della placca e delle viti, oltre a prestare particolare attenzione all'uso di punti di sutura sintetici sulla pelle, poiché i biofilm venivano raccolti sulle suture riassorbibili (a base di poliglactina 910). La penicillina-streptomicina viene utilizzata come parte del trattamento postoperatorio per prevenire la contaminazione della ferita e della sutura.
Il metodo è stato ottimizzato per axolotl di 5-8 anni, di ≥20 cm dal muso alla coda e quindi limitato ad animali di grandi dimensioni e piuttosto anziani. Questo potrebbe anche essere il motivo di una guarigione ossea più lenta rispetto a quella dei mammiferi a causa dei tassi di proliferazione cellulare complessivamente più bassi in animali così anziani. Tuttavia, questo potrebbe essere utile se è necessario risolvere le fasi più sottili della guarigione ossea20. Un'altra caratteristica importante del metodo è la natura commerciale dei principali materiali di consumo utilizzati nel protocollo: piastra di fissaggio, viti e sega Gigly. Grazie alla compatibilità ottimizzata di questi dispositivi, si creano difetti ossei di dimensioni e distanza affidabili dalle estremità ossee. Nell'attuale protocollo, viene descritta l'applicazione di una placca metallica in titanio sulle ossa dell'axolotl. Per i topi, sono state sviluppate piastre di plastica PEEK per facilitare l'imaging microCT dei campioni17. Anche le piastre in PEEK negli axolotl sono state testate con risultati simili; Tuttavia, potrebbero essere applicati solo in animali più grandi a causa del volume leggermente superiore delle piastre di fissaggio in plastica rispetto alle piastre metalliche.
In questo studio, abbiamo utilizzato animali di 5-8 anni e abbiamo osservato un fallimento della fissazione nel 23,5% di tutti gli interventi chirurgici, con tassi di fallimento più elevati negli animali più giovani. Pertanto, si consiglia di utilizzare animali più anziani con un grado più elevato di ossificazione ossea. Il tasso di fallimento era indipendente dal genere; quindi, entrambi i sessi sono ugualmente qualificati. Per la pianificazione delle dimensioni del campione, è necessario calcolare circa il 20% di perdita di campione a causa dell'esito sfavorevole. Il numero esatto di animali dipende dal disegno sperimentale e dal numero di condizioni da analizzare; Tuttavia, il numero minimo di animali raccomandato per gruppo dovrebbe essere 5+20% = 6 animali.
Nel complesso, questo metodo offre un miglioramento significativo rispetto agli interventi chirurgici non fissati o con fissazione ossea adiacente utilizzati in precedenza. Inoltre, utilizzando questo metodo, è possibile studiare axolotl di grandi dimensioni che hanno ossa simili per dimensioni e maturazione a quelle utilizzate negli studi sui topi. Questo è importante poiché la microCT è possibile solo in axolotl di grandi dimensioni a causa del grado di ossificazione.
Il metodo rappresenta un importante progresso nel campo in quanto consente di confrontare direttamente la rigenerazione degli arti axolotl con la guarigione delle fratture, con dimensioni controllate dello spazio e un corretto allineamento osseo (nel 76,5% degli interventi chirurgici eseguiti). Inoltre, con le piastre di fissaggio in plastica PEEK, è possibile utilizzare microCT e raggi X per la valutazione del processo di guarigione ossea. Infine, l'intervento chirurgico qui descritto può essere adattato ad altri anfibi acquatici, come tritoni e rane, facilitando ulteriormente gli studi interspecie sulla guarigione delle fratture ossee.
Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Sabine Stumpp per l'eccellente supporto tecnico e Lidia Grösser per l'assistenza negli interventi chirurgici. Questa ricerca è stata finanziata dall'Austrian Science Fund [Hertha Firnberg Fellowship number T-1219], ERC [Advanced Grant, 742046 RegGeneMems], DFG [CRC 1444].
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sega a filo Gigly da 0,66 mm | RISystem | RIS.590.120 | |
| 7.0 Sutura Optilene | Braun | C3090538 | |
| Benzocaina | Sigma-Aldrich | E1501 | diluire allo 0,03% prima dell'uso |
| Butorfanolo (Butomidor 10 mg/mL) | Richter Pharma AGdiluire | a 0,5 mg/L prima dell'uso | |
| Punta da trapano 0,30 mm | RISystem | RIS.590.200 | |
| Dumont #5 Pinza - Standard/Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Trapano a mano | RISystem | RIS.390.130 | meglio avere almeno 3 pezzi |
| Analizzatore di dati Micro CT | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan NRecon software | |
| Scanner di campioni Micro CT | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan 1172 | |
| Pinza per iride Moria MC31b - liscia, curva, 10 cm | Fine Science Tools | 11373-12FST | 2 pezzi |
| MouseFix Drill-& Guida per sega 1,75 mm, rigida | RISystem | RIS.301.102 | |
| Piastra MouseFix a 4 fori, | rigida RISystem | RIS.401.110 | |
| Vite MouseFix, L = 2,00 mm | RISystem | RIS.401.100 | necessita di 4 per osso |
| Narrow Pattern Forceps | VWR | FSCI11002-12 | |
| penicillina/streptomicina | Gibco | 15140-122 | |
| Ring forcipe | Fine Science Tools | 11103-09 | |
| bisturi #15 | B Braun, Thermo Fischer Scientific | 5518032 | |
| Chiave a tubo quadrata 0,50 mm | RISystem | RIS.590.111 | |
| Cera ossea sterile, 2,5 g | Ethicon, Johnson & Johnson | W810 | |
| Forbici Fini Studenti - Dritte/11,5 cm | Strumenti per Scienze Fini | 91460-11 |
Riferimenti
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Ristampe e permessi
