La rimozione parziale immediata dei complessi cumuli-ovociti: un approccio raffinato per l'osservazione rapida della fecondazione in vitro

Sommario

Qui, presentiamo un metodo ottimizzato per rimuovere prontamente una parte dei complessi cumulo-ovocita dopo il prelievo degli ovuli per accelerare il processo di osservazione della fecondazione in vitro, riducendo il tempo necessario per la rimozione delle cellule della granulosa, riducendo al minimo l'esposizione degli ovociti agli elementi esterni e non ostacolando lo sviluppo dell'embrione, migliorando in definitiva l'efficienza delle procedure di laboratorio della fecondazione in vitro.

Abstract

Nonostante i rapidi progressi nelle tecnologie cliniche e di laboratorio per la fecondazione in vitro (IVF), una percentuale significativa (10%-15%) dei pazienti continua a soffrire di disturbi della fecondazione, portando a bassi tassi di fecondazione e alla produzione di embrioni non vitali. La fecondazione a breve termine comporta la rimozione precoce delle cellule della granulosa per osservare l'estrusione del secondo globulo polare, consentendo la valutazione della fecondazione e le misure correttive precoci per affrontare i bassi tassi di fecondazione e il completo fallimento della fecondazione. Tuttavia, l'osservazione della fecondazione a breve termine nella fecondazione in vitro è ostacolata da sfide come gruppi eccessivamente grandi non elaborati di complessi cumulo-ovociti e adesione tra gli ovuli, che richiedono complesse procedure esterne per la rimozione delle cellule della granulosa e una durata prolungata dell'osservazione. Per affrontare questo problema, questo studio propone un metodo di rimozione parziale immediata delle cellule della granulosa dopo il prelievo degli ovociti. Questo approccio semplifica le fasi successive della fecondazione a breve termine e del monitoraggio tradizionale della fertilizzazione, riduce il tempo necessario per l'estrusione degli ovociti, minimizza la probabilità di impatti ambientali esterni sugli ovociti e diminuisce il rischio di perdere la finestra critica di osservazione della fecondazione. Di conseguenza, lo studio produce nuove prove cliniche volte a migliorare l'efficienza operativa dei laboratori embrionali nella fecondazione in vitro.

Introduzione

Nel campo della fecondazione in vitro-trasferimento di embrioni (FIV-ET), il tasso di fecondazione tipico è compreso tra il 60% e l'80%¹. Tuttavia, circa il 4-16% dei casi incontra un fallimento completo della fecondazione o bassi tassi di fecondazione, presentando sfide nella previsione ^2,3. Per migliorare i risultati clinici della gravidanza e ridurre i casi di completa non fecondazione e bassa fecondazione, l'utilizzo della fecondazione a breve termine nelle procedure di fecondazione in vitro è in aumento⁴. Questo approccio comporta la rimozione tempestiva delle cellule della granulosa per monitorare l'estrusione del secondo globulo polare, valutare lo stato di fecondazione e potenzialmente condurre un'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI). Il legame tra il complesso cellulare del cumulo dell'ovocita (OCCC) e l'ovocita è più forte durante la fecondazione a breve termine rispetto alla tradizionale fecondazione notturna, aumentando così la sfida della rimozione dell'OCCC⁵. Fattori come un eccesso di numero di ovociti, grandi complessi OCCC o aderenze interocitarie possono portare a tempi prolungati di rimozione delle cellule della granulosa durante la fecondazione a breve termine, prolungando così il periodo in cui gli ovuli rimangono fuori dall'incubatrice⁴. Per ottimizzare il periodo di osservazione della fecondazione, è stato ideato un approccio modificato post-prelievo degli ovociti, che prevede l'escissione parziale di cellule della granulosa da ovociti con complessi OCCC significativi. Questa tecnica aiuta a trattenere le cellule della granulosa che circondano gli ovociti, preservando l'integrità della struttura precoce dell'ovocita⁶ e consentendo a queste cellule di continuare a fornire fattori vitali per la maturazione dell'ovocita e il successivo legame tra fecondazione ed embrione⁷.

Di conseguenza, questo studio si concentra su pazienti sottoposti a trattamento di fecondazione in vitro-ET presso un centro di medicina riproduttiva come partecipanti alla ricerca, con l'obiettivo di indagare l'impatto di un metodo di escissione meccanica immediata parziale delle cellule della granulosa sulla durata delle procedure sia per la fecondazione a breve termine che per il monitoraggio notturno della fecondazione, valutando anche i risultati della normale fecondazione e dello sviluppo in fase avanzata. Questa ricerca intende offrire preziose informazioni per migliorare le procedure di laboratorio embrionale nella fecondazione in vitro.

Protocollo

Tutte le procedure sono state condotte in conformità con le procedure operative standard del Dipartimento di Medicina Riproduttiva dell'Ospedale del Popolo di Meizhou e sono state soggette a revisione da parte del Comitato Etico dello stesso dipartimento. Il consenso informato scritto è stato ottenuto da ciascuna coppia partecipante. Lo studio ha incluso partecipanti sottoposti al loro primo ciclo di fecondazione in vitro con trasferimento di embrioni allo stadio di scissione o blastocisti, nonché donne di età compresa tra 20 e 45 anni. I criteri di esclusione includevano l'uso di ovuli/spermatozoi di donatori e condizioni specifiche come anomalie uterine congenite o secondarie (ad esempio, utero setto, utero unicorno, didelfia uterina), adenomiosi, fibromi sottomucosi uterini o spessore dell'endometrio inferiore a 7 mm il giorno del trasferimento dell'embrione. Un totale di 115 pazienti arruolati tra dicembre 2023 e febbraio 2024 sono stati stratificati in due gruppi in base all'esecuzione o meno immediata della rimozione parziale dell'OCCC.

1. Preparazione prima del prelievo degli ovociti

1. Posizionare le piastre di prelievo degli ovociti (Tabella dei materiali) nell'incubatore a 37 °C per una notte.
2. Incubare 12 mL di terreno di manipolazione dei follicoli (Tabella dei materiali) in provette da 14 mL a fondo tondo a 37 °C per una notte. Trasferire le provette nel rack per provette preriscaldato 30 minuti prima del prelievo degli ovociti.
3. Preparare il terreno di manipolazione dei follicoli: aggiungere 9 mL di terreno di manipolazione dei follicoli a una provetta da 14 mL a fondo tondo (Tabella dei materiali) e incubare a 37 °C per una notte. Il giorno del prelievo degli ovociti, trasferire 4,5 ml di terreno in una piastra di prelievo degli ovociti preincubata (Tabella dei materiali) ricoperta con 2 ml di olio di paraffina al 100%.
4. Preparare la soluzione di lavaggio OCCC: aggiungere 4,5 ml di terreno di fertilizzazione (Tabella dei materiali) a una piastra di raccolta degli ovociti e incubare a 37 °C per una notte.
5. Preparare il terreno di fertilizzazione: aggiungere 1 mL di terreno di fertilizzazione in un piatto di 6 cm ricoperto di olio di paraffina al 100% (Tabella dei materiali) e incubare a 37 °C per una notte.
6. Preparare le pipette Pasteur in vetro (Tabella dei materiali): Smussare delicatamente e arrotondare le punte bruciandole su una lampada ad alcool per circa 5 s (Figura 1). Collegare una testa di aspirazione alla punta delle pipette Pasteur, assicurandosi che possa toccare il fondo del piatto senza graffiare. Sciacquare le pipette di vetro Pasteur e le piastre da 10 cm con un mezzo di manipolazione dei follicoli.

2. Prelievo di ovociti e rimozione parziale immediata dell'OCCC

NOTA: Utilizzare uno stereomicroscopio durante le procedure di isolamento degli ovociti e di rimozione OCCC. Per ottenere risultati ottimali, tutte le procedure devono essere eseguite su un tavolo riscaldante con controllo della temperatura (37 °C) e tutte le apparecchiature devono essere preriscaldate 30 minuti prima del prelievo degli ovociti.

1. Raccogliere il liquido follicolare preovulatorio durante il prelievo degli ovociti secondo le raccomandazioni ESHRE⁸.
   1. In breve, utilizzare un ago da 17 G per recuperare gli ovociti sotto guida ecografica transvaginale. La pressione negativa appropriata varia da 120 a 140 mmHg.
   2. Versare il liquido follicolare raccolto nella provetta a fondo tondo da 14 ml in un piatto da 10 cm (Tabella dei materiali), mantenendo una profondità del fluido inferiore a 0,5 cm. Posizionare la pirofila su una piattaforma a temperatura costante (37 °C).
2. Osservare l'OCCC al microscopio stereoscopico per confermare la presenza di ovociti e valutarne la maturità.
   NOTA: La maturità dell'OOOC viene valutata in base alla morfologia delle cellule del cumulo e alla visibilità di alcune strutture ovocitarie⁹.
3. Aspirare l'OCCC utilizzando una pipetta Pasteur con estremità smussata. Inclinare il piatto da 10 cm di circa 15 gradi e stendere tutto l'OCCC grande. Evitare di aspirare l'ovocita e le cellule della granulosa circostanti entro un raggio di 2500 μm. Tagliare le cellule della granulosa in eccesso con la pipetta Pasteur lungo l'asse longitudinale (Figura 2). I passaggi dettagliati sono i seguenti:
   1. Osservare ad occhio nudo per vedere se c'è una massa mucoide traslucida grigiastra nel liquido follicolare. Se non viene trovato, cerca rapidamente la massa mucoide traslucida grigiastra ruotando in senso orario dall'esterno verso l'interno sotto uno stereomicroscopio, l'OCCC.
   2. Confermare la presenza di ovociti nell'OCCC ed effettuare una valutazione preliminare della maturità degli ovociti.
   3. Quindi, preparare in anticipo una pipetta per aspirazione in silicone con una pipetta Pasteur rotonda lucidata a fiamma, aspirare l'OCCC e, allo stesso tempo, sollevare delicatamente la piastra di coltura a ore 9-10 con l'anulare sinistro della mano che tiene la piastra da 10 cm, inclinando leggermente la piastra di coltura di circa 15° a sinistra (posizionare l'anulare sotto la piastra è approssimativamente l'angolo richiesto).
   4. Mentre sputa l'OCCC aspirato a ore 11 del piatto, allungalo delicatamente orizzontalmente verso destra. Quindi, osservare le dimensioni delle cellule della granulosa attorno all'OCCC espanso. Successivamente, nella posizione opportuna dell'OCCC allungato orizzontalmente, utilizzare la pipetta Pasteur per effettuare un taglio discendente rapido e delicato sulle cellule della granulosa in eccesso dall'alto verso il basso.
4. Trasferire l'OCCC tagliato in una capsula di raccolta contenente la soluzione di lavaggio OCCC. Versare il liquido follicolare rimanente in un contenitore sterile per campioni (Tabella dei materiali). Ripetere questi passaggi fino a quando tutti i complessi non sono stati raccolti.

3. Preparazione dello sperma e inseminazione in vitro

1. Raccogliere i campioni di sperma tramite eiaculazione la mattina del prelievo degli ovociti. Valutare la concentrazione, la motilità e la morfologia degli spermatozoi al microscopio ottico seguendo i criteri^{10 dell'Organizzazione} Mondiale della Sanità (OMS, 2010). Quindi, trasferire il pellet di sperma in una nuova provetta da centrifuga e lavarlo due volte nel terreno di fertilizzazione¹¹. Incubarli al 6% di CO₂ e 37 °C fino al momento del bisogno.
2. Inseminare gli OCCC con 1 x 10⁵ a 3 x 10⁵ spermatozoi mobili per millilitro in una singola goccia circa 2-3 ore dopo il prelievo nella piastra di fecondazione (Tabella dei materiali). Aggiungere 6-8 OCCC e 1 mL di terreno di fertilizzazione alla piastra di fertilizzazione.
   NOTA: Dopo aver lavato l'OCCC appiccicoso, vengono trasferiti nella piastra di fertilizzazione utilizzando una pipetta Pasteur. Rilasciare un OCCC alla volta, sollevando delicatamente la pipetta dalla superficie del liquido prima di rilasciare il successivo, assicurandosi che ogni OCCC sia posizionato singolarmente nella piastra per evitare l'aggregazione.

4. Rimozione delle cellule cumuliformi

1. Per la concimazione a breve termine, seguire i passaggi descritti di seguito.
   1. Co-incubare gli OCCC con gli spermatozoi per 4-6 ore. Dopo l'incubazione, rimuovere meccanicamente le cellule del cumulo che circondano gli ovociti.
   2. Aspirare gli ovociti utilizzando una pipetta con un diametro interno leggermente più piccolo degli ovociti per garantire la completa rimozione delle cellule del cumulo.
   3. Confermare la fecondazione osservando la presenza di due corpi polari. Gli ovociti che mostrano un secondo globulo polare sono considerati fecondati.
   4. Identificare quei casi che non mostrano il secondo globulo polare come fallimenti di fecondazione, che richiedono il salvataggio ICSI.
2. Per una fecondazione regolare, dopo 18-20 ore di co-incubazione, rimuovere le cellule del cumulo utilizzando le pipette per la valutazione della fecondazione.

5. Coltura embrionale

1. Coltura e monitoraggio degli ovociti fecondati per 3-5 giorni dopo il prelievo degli ovociti. Valutare la fecondazione a 20 ore dopo l'inseminazione per determinare il numero di pronuclei. Successivamente, coltivare ogni zigote individualmente in una gocciolina di terreno e trasferire gli embrioni dopo la fecondazione in un mezzo di scissione.
   NOTA: Un embrione ideale entro il terzo giorno dovrebbe essere costituito da sei o più blastomeri di uguali dimensioni e mostrare un tasso di frammentazione inferiore o uguale al 10%¹².
2. La decisione di procedere con la coltura di blastocisti dipende dalle preferenze del paziente e dalle circostanze specifiche, come la quantità e la qualità degli embrioni ottenuti il giorno 3. Trasferire gli embrioni del giorno 3 nel terreno di blastocisti e valutare il giorno 5. Usa il sistema di punteggio di Gardner per valutare le blastocisti, con blastocisti di alta qualità con punteggi di ≥ 4 BB¹³.

6. Misure di outcome e analisi statistica

1. Riporta i dati continui come media ± deviazione standard ed esprimi i dati ordinali come proporzioni. Eseguire analisi statistiche utilizzando il t-test di Student o il test del chi quadrato in un software di analisi dei dati appropriato (qui, IBM SPSS Statistics). Considerare un livello di significatività di P < 0,05 come statisticamente significativo.

Risultati

Nel gruppo sottoposto a brevi procedure di co-incubazione, sono stati esclusi i pazienti che hanno ricevuto il salvataggio. Su 47 pazienti che hanno ricevuto inseminazione a breve termine, non sono state osservate differenze significative in termini di età delle pazienti e numero di ovociti recuperati (Tabella 1). L'immediata rimozione parziale dell'OCCC ha provocato un allentamento dell'OCCC rimanente attorno agli ovociti (Figura 3), facilitando l'individuazione di un secondo globulo polare. Il tempo medio della procedura è stato significativamente più breve nel gruppo di rimozione parziale dell'OCCC (4,42 ± 1,68 min vs. 9,29 ± 5,04 min, P < 0,001) rispetto al gruppo di controllo, nonostante non siano state riscontrate differenze significative nel tasso di scissione, nel tasso ottimale di embrioni e nel tasso ottimale di blastocisti.

In un'altra coorte di 68 pazienti sottoposte a fecondazione in vitro tradizionale (FIV), in cui i controlli di fecondazione sono stati condotti 18-20 ore dopo l'inseminazione, sono state notate somiglianze nell'età delle pazienti e nel numero di ovociti recuperati tra i due gruppi (Tabella 2). Un aumento della scioltezza nella struttura delle cellule della granulosa che circondano l'ovocita è stato osservato in pazienti che sono state sottoposte a rimozione parziale immediata di OCCC durante il prelievo degli ovociti (Figura 4). Sebbene sia stato notato un tempo medio di intervento leggermente più breve nella rimozione parziale del gruppo OCCC (4,93 ± 0,80 min vs. 6,54 ± 7,77 min, P = 0,207), non è stata evidenziata alcuna differenza statisticamente significativa. Mentre le aderenze strette in alcuni casi potrebbero portare a procedure di osservazione prolungate superiori a 40 minuti, le aderenze generalmente allentate dell'OCCC nella maggior parte dei casi dopo lo stoccaggio notturno potrebbero spiegare la mancanza di varianza statistica nei tempi di funzionamento tra i due gruppi. Come nel gruppo precedente, non sono state identificate discrepanze significative nel tasso di scissione, nel tasso ottimale di embrioni e nel tasso ottimale di blastocisti.

Nel complesso, i risultati rappresentativi indicano che la rimozione parziale immediata dell'OCCC riduce significativamente i tempi operativi nelle procedure di inseminazione a breve termine senza compromettere i risultati chiave della fecondazione in vitro come il tasso di scissione, il tasso ottimale di embrioni e il tasso ottimale di blastocisti. Questa tecnica facilita il rilevamento del secondo globulo polare allentando l'OCCC rimanente attorno agli ovociti, il che probabilmente contribuisce a ridurre i tempi operativi. Nel contesto delle procedure di fecondazione in vitro tradizionali, sebbene sia stata osservata una tendenza verso tempi operativi più brevi con l'immediata rimozione parziale dell'OCCC, la differenza non era statisticamente significativa, potenzialmente a causa della variabilità intrinseca nell'adesione delle cellule del cumulo dopo la conservazione notturna. Questi risultati suggeriscono che, sebbene la rimozione parziale immediata dell'OCCC possa migliorare l'efficienza procedurale, in particolare nei contesti di inseminazione a breve termine, il suo impatto sulle tempistiche tradizionali della fecondazione in vitro potrebbe essere meno pronunciato.

Figura 1: Preparazione della pipetta Pasteur con un bruciatore ad alcool. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 2: Immagine tipica dell'OCCC che deve essere elaborata. Gli ovociti tipici con diametro superiore a 2,5 mm da (A e B) due pazienti sono stati sottoposti a rimozione parziale lungo la linea tratteggiata rossa delineata. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 3: Micrografie tipiche che descrivono le caratteristiche morfologiche della fecondazione 4-6 ore dopo la co-incubazione con spermatozoi. Ovocita tipico (A) con o (B) senza rimozione parziale di OCCC. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 4: Micrografie tipiche che descrivono le caratteristiche morfologiche della valutazione dei pronuclei 18-20 ore dopo la co-incubazione con spermatozoi. Ovocita tipico (A) con o (B) senza rimozione parziale di OCCC. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

	Rimozione parziale del gruppo OCCC	Gruppo di controllo	Valore p
Pazienti (n)	26	21
Età (y)	32.04 ± 4.11	33,33 ± 3,41	0.193
No. di ovociti recuperati	12.85 ± 9.02	11.38 ± 5.32	0.493
Tempo di procedura di 4 ore (min)	4,42 ± 1,68	9.29 ± 5.04	<0,001
Tasso di scissione, n (%)	98,89 ± 0,04, 24	100,00 ± 0,00, 19	0.221
Tasso di embrione ottimale, n (%)	71.38 ± 35.46, 24	72.14 ± 35.72, 19	0.945
Tasso ottimale di blastociti, n (%)	58.13 ± 28.29, 19	65.18 ± 28.09, 12	0.504

Tabella 1: Confronto dei risultati della fecondazione tra i due gruppi con o senza l'immediata rimozione parziale dell'OCCC sottoposti a brevi procedure di co-incubazione.

	Rimozione parziale del gruppo OCCC	Gruppo di controllo	Valore p
Pazienti (n)	29	39
Età (y)	32.21 ± 4.11	32,72 ± 4,25	0.619
No. di ovociti recuperati	12.93 ± 7.00	12.44 ± 7.26	0.777
20 ore di funzionamento (min)	4,93 ± 0,80	6.54 ± 7.77	0.207
Tasso di scissione, n (%)	98,81 ± 0,04, 28	95,93 ± 0,17,37	0.39
Tasso di embrione ottimale, n (%)	72.07 ± 36.75, 28	72.62 ± 30.01,36	0.948
Tasso ottimale di blastociti, n (%)	62.93 ± 28.30, 21	63.36 ± 24.61, 28	0.955

Tabella 2: Confronto dei risultati della fecondazione tra i due gruppi con o senza l'immediata rimozione parziale dell'OCCC sottoposto a fecondazione in vitro tradizionale (FIV).

Discussione

La rimozione parziale immediata delle cellule della granulosa può accelerare il processo di disintegrazione precoce della fecondazione a breve termine, ridurre il tempo di osservazione per il secondo globulo polare sia nella fecondazione a breve termine che nella fecondazione in vitro convenzionale e non compromettere il successivo sviluppo embrionale. Attualmente, i laboratori di tutto il mondo impiegano varie strategie per mitigare i disturbi della fecondazione e i bassi tassi di successo. Il metodo preferito prevede la rimozione delle cellule della granulosa per osservare il secondo globulo polare 4-6 ore dopo la fecondazione a breve termine¹⁴. Le sfide sorgono a causa della stretta adesione tra gli ovociti e le cellule del cumulo circostanti, che ostacola la rimozione meccanica con una pipetta. Il prelievo e il taglio immediati degli ovociti possono mitigare questo problema riducendo l'adesione e il volume dell'OCCC, accorciando di conseguenza i tempi di osservazione. Un passaggio critico del protocollo è l'immediata rimozione parziale dell'OCCC dopo il prelievo degli ovociti, aiutando a sciogliere le cellule del cumulo rimanenti attorno agli ovociti per facilitare il rilevamento del secondo globulo polare, che è fondamentale per valutare il successo della fecondazione. La rimozione tempestiva riduce significativamente il tempo dell'operazione senza compromettere il tasso di scissione, il tasso ottimale di embrioni o il tasso ottimale di blastocisti.

Le modifiche suggerite e la risoluzione dei problemi della tecnica di taglio sono le seguenti: (i) La fissazione dell'ago è ritenuta non necessaria, in quanto comporterebbe un prolungamento del tempo extracorporeo. In pratica, rappresenta un approccio di taglio conveniente. (ii) Si consiglia di concentrarsi sull'OCCC, mantenendo 3-4 cellule della granulosa su ciascun lato che corrispondono al diametro dell'ovocita. Per l'OCCC bilaterale, entrambe le parti devono essere tagliate; per l'OCCC unilaterale, tagliare il lato con l'OCCC. Si può lottare per la simmetria, anche se non necessariamente perfetta. (iii) Per evitare che i follicoli si arriccino e interrompano lo stato di diffusione, il liquido follicolare sopra il piatto deve essere sufficientemente sottile durante il taglio per evitare il galleggiamento dell'OCCC. (iv) Il liquido follicolare contiene spesso componenti del sangue durante il prelievo degli ovociti. Dopo il taglio, è necessario trasferire prontamente i follicoli in una piastra di lavaggio per mitigare l'impatto della contaminazione del sangue e continuare il lavaggio dopo il prelievo degli ovociti.

La ritenzione delle cellule del cumulo dopo la rimozione parziale garantisce che gli ovociti ricevano sostanze essenziali per lo sviluppo embrionale precoce, come fattori di crescita e aminoacidi, promuovendo lo sviluppo embrionale¹⁵. Studi precedenti hanno dimostrato che la co-coltura a lungo termine può generare una grande quantità di specie reattive dell'ossigeno (ROS), portando all'indurimento della zona pellucida embrionale e compromettendo il potenziale degli embrioni. La rimozione parziale immediata delle cellule della granulosa, pur mantenendo le cellule della granulosa cumuliforme necessarie, riduce i ROS delle cellule della granulosa e il consumo di energia nei terreni di coltura¹⁶. Attualmente, non esiste un consenso unificato sui tempi e sulla proporzione della rimozione delle cellule della granulosa per la fecondazione a breve termine nella fecondazione in vitro. I dati ottenuti in questo studio suggeriscono che l'immediata rimozione di ovociti selezionati con un diametro OCCC di circa 2500 μm non ostacola il successivo sviluppo embrionale o il processo di osservazione per la fecondazione in vitro convenzionale e a breve termine.

Un limite significativo di questa tecnica è la potenziale variabilità del grado di adesione tra gli ovociti e le cellule del cumulo, che può influenzare la consistenza dei risultati. Inoltre, mentre l'approccio di rimozione parziale immediata riduce i tempi di osservazione, richiede un'esecuzione precisa per evitare danni agli ovociti o compromettere il successivo sviluppo dell'embrione. Sono necessari ulteriori esperimenti per determinare la quantità ottimale di OCCC rimanente dopo il taglio. Ad esempio, valutare se contenere circa 2000 μm di OCCC e pre-marcare una scala sul piatto di prelievo potrebbe migliorare la valutazione uniforme delle dimensioni e dell'intervallo di taglio dell'OCCC.

In conclusione, questa tecnica raffinata non dimostra effetti negativi significativi sulla fecondazione o sullo sviluppo dell'embrione, rendendola un metodo prezioso da approvare.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
G-IVFT PLUS	Vitrolife	10136
OVOIL	Vitrolife	10029
G-MOPS PLUS	Vitrolife	10130
Falcon 3003 piatto	Corning	353003
Falcon 3001 piatto	Corning	353001
Falcon 2001 tubo	Corning	352001
Falcon 4013 tazza	Corning	354013
Falcon 3037 piatto	Corning	351058
Pasteur pipetta	Darwin	D1150-5P