Articolo metodologico

Formulazione di nanomateriali a base di zinco utilizzando l'estratto di corteccia di Eucommia ulmoides e il loro potenziale di guarigione delle ferite

DOI:

10.3791/67416

⸱

27 dicembre 2024

 ,  ,  , 
1Biological Experiment Center, School of Life Sciences, Central South University, 2Department of Cell Biology, School of Life Sciences, Central South University

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Qui, presentiamo un protocollo per sintetizzare le nanoparticelle di ossido di zinco (ZnO) utilizzando l'estratto acquoso ricco di poliisoprene ottenuto dalla corteccia dell'albero Eucommia ulmoides . Il potenziale di guarigione delle ferite esibito dalle nanoparticelle di ZnO sintetizzate sulle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVECs) è stato valutato utilizzando il test scratch, un metodo semplice, economico ed efficiente.

Abstract

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L'estratto acquoso della corteccia di Eucommia ulmoides funge da ricca fonte di composti bioattivi con numerosi benefici per la salute. Il protocollo qui mira a esplorare la preparazione di nanoparticelle di ossido di zinco (ZnO) utilizzando l'estratto acquoso ricco di poliisoprene mediato dalla corteccia di Eucommia ulmoides . Nel frattempo, il protocollo proposto è associato alla preparazione di materiale per la guarigione delle ferite facilitando il processo. Inoltre, il potenziale di guarigione delle ferite delle nanoparticelle sintetizzate (Eu-ZnO-NP) è stato valutato utilizzando un semplice test di graffio su un monostrato di cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC). Dopo 24 ore di trattamento con Eu-ZnO-NPs, sono state valutate la proliferazione cellulare e la migrazione delle cellule HUVEC. Al termine dello studio, la proliferazione e la migrazione cellulare sono state osservate in monostrato graffiato trattato con diverse concentrazioni di Eu-ZnO-NPs, mentre sono stati osservati bassi tassi di migrazione e proliferazione cellulare nelle cellule di controllo. Delle concentrazioni scelte, 20 μg/mL di nanomateriali Eu-ZnO hanno mostrato una migliore migrazione cellulare e un maggiore potenziale di guarigione delle ferite.

Introduzione

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È stato dimostrato che le piante medicinali e i composti di origine vegetale presentano numerosi benefici per la salute1. L'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) ha riferito che l'80% della popolazione mondiale dipende dalle piante medicinali tradizionali per l'assistenza sanitaria di base. La Cina è ben nota e popolare per le sue pratiche di Medicina Tradizionale Cinese (MTC). Le erbe medicinali cinesi sono state segnalate per trattare varie malattie e utilizzate per il loro potenziale biologico. Le piante medicinali fungono da serbatoi per composti bioattivi e molteplici ruoli terapeutici. Le piante medicinali sono state utilizzate anche per curare le ferite. Esistono diversi tipi di approcci applicati per trattare le ferite croniche2. Una recente indagine ha rivelato che le piante medicinali sono coinvolte nel processo di guarigione delle ferite fornendo condizioni favorevoli per la guarigione, prive di infezioni, e accelerando la rigenerazione dei tessuti3. Nel frattempo, le proprietà antibatteriche e antimicotiche dei composti bioattivi presenti nelle piante medicinali possono aiutare a curare le ferite e accelerare l'efficienza di guarigione delle ferite4.

I nanomateriali a base di metalli stanno attirando l'attenzione grazie alle loro proprietà biocompatibili e biodegradabili. L'Eucommia ulmoides, comunemente chiamata albero della gomma cinese, è una specie originaria della Cina. Le foglie e la corteccia dell'albero sono utilizzate nelle pratiche medicinali. Ancora più importante, la specie vegetale è stata coltivata nelle province centrali e occidentali della Cina5. Peng et al.6hanno riportato che foglie, cortecce e fiori staminati erano commestibili con potenziale terapeutico. Inoltre, E. ulmoides è la migliore fonte di lignani, fenilpropanoidi, iridoidi, flavonoidi, aminoacidi e oligoelementi. Inoltre, la corteccia è stata utilizzata per varie applicazioni biomediche come il controllo della pressione sanguigna, l'abbassamento del grasso e la promozione dell'attività antiosteroporotica e ipoglicemizzante7. Quindi, senza dubbio, è stato dimostrato che l'estratto di corteccia di E. ulmoides ha una lunga storia nella medicina tradizionale cinese. Rapporti precedenti suggerivano che il polimero naturale poliisoprene è ricco di cortecce di Eucommia ulmoides8. Sulla base delle informazioni di cui sopra, il presente lavoro mira a fabbricare nanomateriali utilizzando estratti di corteccia di Eucommia ulmoides . La combinazione di zinco ed estratto di corteccia è una scelta interessante per la preparazione di nanomateriali. Nel complesso, l'obiettivo finale della presente ricerca è stato quello di fabbricare un nuovo nanomateriale ibrido per applicazioni di guarigione delle ferite.

Protocollo

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NOTA: Prima di preparare l'estratto, il materiale di corteccia ottenuto è stato lavato due volte con acqua deionizzata ed essiccato in un luogo ombreggiato. Le cortecce essiccate all'ombra sono state conservate in un contenitore ermetico.

1. Preparazione dell'estratto di corteccia di Eucommia ulmoides

  1. Taglia la corteccia raccolta dall'albero di Eucommia ulmoides in piccoli pezzi usando le forbici.
  2. Lavare due volte i materiali della corteccia tritata con acqua distillata doppia.
  3. Asciugare i pezzi di corteccia a una temperatura inferiore a 37 °C per 24 ore in condizioni di ombreggiatura.
    1. Regolare la durata del processo di essiccazione in base alla quantità di corteccia utilizzata per lo studio. Assicurati che le cortecce siano completamente asciutte prima di tagliarle a pezzetti. Evitare la luce solare diretta.
  4. Trasferire 20 g di cortecce essiccate all'ombra in un pallone conico contenente 220 ml di acqua sterile a doppia distillazione e scaldare a 130 °C per 20 minuti.
    1. Il colore della soluzione di reazione cambia in giallo chiaro. I cambiamenti di colore della soluzione si verificano dopo 10 minuti. Lasciare scaldare la soluzione per altri 10 minuti. Regolare il volume dell'acqua distillata doppia in base alla quantità di campione.
  5. Conservare l'estratto grezzo contenente poliisoprene a 4 °C per un ulteriore utilizzo. La formazione di una struttura filiforme indica la presenza di poliisoprene negli estratti.

2. Biosintesi di nanoparticelle di ZnO mediate dalla corteccia di E. ulmoides

  1. Aggiungere 1 M di nitrato di zinco diidrato Zn (NO3)2 a 50 ml di acqua deionizzata in un matraccio conico da 500 ml. Mescolare continuamente utilizzando l'agitazione magnetica (60 giri/min). Lo Zn (NO3)2 impiega 30 minuti per dissolversi completamente.
  2. Aggiungere 15 mL di estratto di corteccia di E. ulmoides goccia per goccia a 20 mL di soluzione di nitrato di zinco diidrato (Zn (NO3)2) 1 M.
  3. Posizionare la miscela di reazione coperta su un agitatore magnetico, accendere l'agitatore e centrifugare a (60 giri/min) per 3 ore.
  4. Aggiungere 1 N soluzione di idrossido di sodio NaOH (3 mL) alla miscela di reazione per regolare il pH a 9. Aggiungere NaOH fino a quando la miscela di soluzione diventa bianco latte e il pH non è superiore a 9. La soluzione diventa di un colore bianco latte quando si formano le nanoparticelle di ZnO.
    1. La preparazione di 1 M di nitrato di zinco diidrato Zn (NO3)2 volume di soluzione può variare in base alle esigenze sperimentali. Assicurati di utilizzare gli estratti di corteccia appena preparati. Se il pH supera 10, si verificherà l'aggregazione di nanoparticelle.
  5. Trasferire gli Eu-ZnO-NP sintetizzati in una provetta da centrifuga da 50 mL e centrifugarla a 100 x g per 5 minuti a 4 °C.
    NOTA: Le impurità possono essere evitate con un lavaggio immediato.
  6. Raccogliere gli Eu-ZnO-NP lavati in una lastra di vetro e asciugarli a 45-50 °C per 1 ora in forno ad aria calda.
    NOTA: Se le Eu-ZnO-NP vengono conservate per più di 30 minuti possono influenzare la natura fisico-chimica delle nanoparticelle

3. Conferma della taglia tramite TEM

  1. Preparare 1 mg/mL di nanoparticelle in DDH2O e caricare 5 μL di campione di Eu-ZnO-NP nella griglia di rame e attendere che si asciughi completamente. Agitare il campione prima di caricarlo sulla griglia di rame.
  2. Caricare la griglia di rame contenente Eu-ZnO-NP sul portacampioni TEM e acquisire immagini con ingrandimenti 50x e 100x.
    NOTA: Le griglie devono essere raccolte utilizzando una pinzetta durante questo passaggio.

4. Valutazione della citotossicità

  1. Seminare 1 × 104 HUVEC in ciascun pozzetto di una piastra a 96 pozzetti e metterlo in un'incubatrice al 5% di CO2 a 37 °C.
  2. Aggiungere 10 μL di varie concentrazioni 0, 10, 20, 30, 40 e 50 μg/mL di Eu-ZnO-NP nelle cellule confluenti al 90% e incubarle per 24 ore.
  3. Dopo l'incubazione, rimuovere il vecchio terreno senza disturbare le cellule, aggiungere 10 μL di soluzione CCK-8 a ciascun pozzetto contenente 90 μL di terreno DMEM fresco e incubare in un incubatore al 5% di CO2, 37 °C.
  4. Misurare l'assorbanza delle cellule trattate con soluzione di CCK8 a 450 nm utilizzando uno spettrofotometro.
    NOTA: L'assorbanza è stata misurata immediatamente entro 15 minuti per evitare le variazioni dell'assorbanza.

5. Preparazione delle cellule HUVEC per il saggio scratch

  1. Seminare una quantità appropriata (1 × 105) di HUVEC in piastre di coltura a 12 pozzetti contenenti il terreno Eagle modificato di Dulbecco con il 10% di siero fetale bovino (FBS) e l'1% di pen-strep e incubarlo in un'incubatrice al 5% di CO2 a 37 °C.
    1. Prima di eseguire il test del graffio, controllare la confluenza utilizzando il microscopio invertito.
      NOTA: Per eseguire il test scratch verranno utilizzate piastre a 6 pozzetti o 12 piastre in base ai requisiti e la densità cellulare varierà per le diverse piastre di coltura. L'uso di cellule confluenti al 70%-80% è ideale e consigliato per il test scratch. Il volume del terreno DMEM può variare in base alle piastre di coltura utilizzate nello studio. Ad esempio, le piastre a 6 pozzetti richiedono 1-1,5 mL di terreno di coltura e le piastre a 12 pozzetti richiedono 0,5-1,0 mL di terreno di crescita.
  2. Graffiare delicatamente utilizzando un puntale per pipetta sterile da 200 μl nella ferita rappresentativa con una larghezza della ferita di 200 μm.
  3. Assicurarsi che la punta utilizzata per graffiare il monostrato di celle sia a contatto con la superficie delle celle.
    NOTA: Ogni volta che viene fatto un graffio, utilizzare la punta sterile.
  4. Rimuovere l'intero terreno e lavare il monostrato HUVEC utilizzando 1 mL di 1x PBS per rimuovere le cellule staccate.
    NOTA: Assicurarsi che le celle monostrato staccate siano completamente rimosse dai rispettivi pozzetti. Verificare che non si siano verificati danni nell'area creata dalla ferita.
  5. Per valutare il potenziale di guarigione delle ferite delle Eu-ZnO-NP sintetizzate, aggiungere nei pozzetti concentrazioni di 0 (Controllo), 10 e 20 μg/mL di nanoparticelle di Eu-ZnO combinate con un terreno completo con il 10% di FBS. Mantenere le piastre sperimentali a 37 °C in un incubatore al 5% di CO2 .
    NOTA: Non disturbare il monostrato di celle durante l'aggiunta del terreno fresco e completo. Assicurarsi che le celle monostrato rimangano indisturbate durante l'incubazione.
  6. Acquisisci microfotografie a 0 h e 24 h utilizzando un microscopio invertito. Utilizzare lo strumento di annotazione per misurare la chiusura della ferita in diversi intervalli di tempo.
    1. Calcolare la percentuale di chiusura della ferita utilizzando la seguente formula: Chiusura della ferita (%) = [(migrazione cellulare (in μm) a 0 h - migrazione cellulare (in μm) a 24 h)/ migrazione cellulare (in μm) a 0 h] x 100.

Risultati

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La presente ricerca mira a sintetizzare nanoparticelle utilizzando le cortecce dell'albero Eucommia ulmoides . Il materiale della corteccia è stato completamente essiccato in un ambiente ombreggiato (Figura 1). I materiali della corteccia sono stati utilizzati per preparare l'estratto grezzo acquoso di acqua calda riscaldando i campioni a 130 °C per 20 minuti. Una leggera alterazione della temperatura e della durata può alterare i fitocomposti e renderli inadatti alla preparazione dell'estratto acquoso. Gli estratti acquosi grezzi di corteccia di E. ulmoides sono stati preparati e utilizzati per la sintesi di nanoparticelle (Figura 2). L'estratto preparato può essere utilizzato immediatamente. L'estratto conservato per un periodo prolungato può influenzare il processo di sintesi. Pertanto, per la preparazione di nanoparticelle si consiglia un estratto appena preparato.

Il successo della sintesi di NP di ZnO mediate da estratto di corteccia grezza è stato confermato dalla comparsa di un colore bianco lattiginoso e da un cambiamento nel pH (Figura 3). Il pH è strettamente legato alla dimensione delle nanoparticelle e un pH superiore a 9 provoca agglomerazione e dimensioni irregolari. La struttura del nanomateriale sintetizzato è stata confermata utilizzando l'analisi TEM e le nanoparticelle sintetizzate hanno mostrato una dimensione delle particelle di 80-90 nm, come rappresentato nella Figura 4. Il NaOH deve essere aggiunto goccia a goccia per evitare un cambiamento improvviso nella miscela di reazione. Le nanoformulazioni a base di metalli sono adatte, poco costose e meno tossiche. Tuttavia, i nanomateriali a base di metalli sono ben noti per le loro funzioni biologiche.

La citotossicità delle Eu-ZnO-NP contro le cellule HUVECs è stata determinata mediante saggio CCK-8 con l'esposizione di diverse concentrazioni di Eu-ZnO-NP per 24 ore. I risultati hanno indicato che le Eu-ZnO-NP non hanno mostrato cambiamenti evidenti nella citotossicità per le cellule HUVEC alla concentrazione più elevata di 50 μg/mL (Figura 5). È stata caricata la quantità appropriata di cellule ed è stata realizzata una dimensione uniforme delle ferite utilizzando un puntale per pipetta sterile da 200 μl. Il volume delle cellule che supera il limite può causare una variazione del pH e un tasso di proliferazione più lento. Le migrazioni delle cellule e la chiusura della ferita sono state osservate nel gruppo di trattamento dopo 24 ore di trattamento, mentre non sono stati osservati cambiamenti simili nel controllo. I risultati dell'attività di guarigione delle ferite hanno rivelato che le Eu-ZnO-NP sintetizzate hanno mostrato proprietà cicatrizzanti sulle linee cellulari di HUVEC. Una concentrazione di 20 μg/mL di nanomateriali Eu-ZnO favorisce una migrazione cellulare più rapida e migliori proprietà di guarigione delle ferite. Ancora più importante, le nanoparticelle di Eu-ZnO sintetizzate hanno mostrato una modalità d'azione dipendente dalla concentrazione. Inoltre, dopo 24 ore di trattamento, la proliferazione e la migrazione cellulare sono state osservate nel monostrato graffiato e, mentre nelle cellule di controllo sono stati osservati una scarsa migrazione cellulare e un tasso di proliferazione (Figura 6). La percentuale di chiusura della ferita è stata osservata come del 16% per il controllo, seguita dal 51% per i gruppi trattati con 10 μg/mL e dall'81,5% per i gruppi trattati con 20 μg/mL dopo 24 ore (Figura 7).

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Figura 1: Collezione di pezzi di corteccia di Eucommia ulmoides . Immagine della corteccia di Eucommia ulmoides utilizzata per la preparazione dell'estratto acquoso di acqua calda. Prima dell'estrazione, le cortecce devono essere lavate accuratamente per rimuovere le impurità e asciugate completamente all'ombra. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 2: Preparazione dell'estratto di corteccia di Eucommia ulmoides : Immagine degli estratti di corteccia di Eucommia ulmoides utilizzati per sintetizzare le nanoparticelle. L'estratto di corteccia di Eucommia ulmoides di 200 ml è stato preparato utilizzando 20 g di pezzi di corteccia. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 3: Sintesi di nanoparticelle di ZnO mediate dalla corteccia di Eucommia ulmoides . L'immagine mostra la formazione di nanoparticelle di Eu-ZnO e la soluzione con un colore bianco latte rappresenta la formazione di nanoparticelle di Eu-ZnO. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 4: Analisi al microscopio elettronico a trasmissione: l'immagine mostra diversi ingrandimenti delle nanoparticelle di ZnO mediate dalla corteccia di Eucommia ulmoides (A) con ingrandimento di 100 nm e (B) con ingrandimento di 50 nm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 5: Saggio di vitalità cellulare CCK-8. I grafici a barre rappresentano la vitalità delle cellule dopo essere state trattate con diverse concentrazioni di 0-50 μg/mL, mentre le cellule senza trattamento fungono da controllo negativo. I dati rappresentano la media e la deviazione standard. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 6: Saggio del graffio per la valutazione della chiusura della ferita. Le cellule sono state trattate con NP EU-ZnO sintetizzate (10 μg/mL e 20 μg/mL) e senza NP EU-ZnO (gruppo di controllo) e incubate per 24 ore. La proliferazione e la migrazione cellulare sono state osservate nelle cellule trattate con NP di EU-ZnO. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Figura 7: Percentuale di chiusura della ferita. I grafici a barre rappresentano la percentuale di chiusura della ferita sul monostrato HUVEC con e senza trattamento NP EU-ZnO a 0 h e 24 h. I dati rappresentano la media e la deviazione standard. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Discussione

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Si ritiene che la corteccia, il seme e le foglie di E. ulmoides mostrino numerosi benefici per la salute. I nostri risultati hanno dimostrato che la sintesi di nanoparticelle di EU-ZnO è stata ottenuta utilizzando un approccio semplice ed economico. L'estratto acquoso è stato utilizzato per sintetizzare le nanoparticelle. Il riscaldamento del materiale della corteccia ad alte temperature può causare la degradazione di alcuni fitocostituenti e ridurre l'efficienza di estrazione. I fitocostituenti presenti nell'estratto acquoso di erbe possono ridurre gli ioni metallici per formare nanoparticelle. Il nitrato di zinco diidrato viene utilizzato per la preparazione di nanoparticelle di ZnO per le loro proprietà biocompatibili e altamente stabili9. L'utilizzo di elementi metallici che causano una tossicità minima o elevata per la sintesi o la progettazione dei nanomateriali è rischioso e non può essere utilizzato per affermazioni biomediche. Questa sintesi può essere eseguita entro un giorno (24 ore). Tuttavia, i metalli privi di sostanze tossiche e i materiali biocompatibili sono considerati sicuri e utilizzati per valutare l'efficienza della guarigione delle ferite. La ragione principale dietro l'agglomerazione di nanoparticelle sintetizzate sono i legami fitochimici. L'agglomerazione delle nanoparticelle era dovuta alla natura attrattiva delle interazioni di Van der Waal e alle forze attrattive tra la superficie10,11. L'agglomerazione di nanoparticelle può influenzare le proprietà fisiche e ottiche. Le dimensioni e la forma delle nanoparticelle possono essere modificate utilizzando la calcinazione e la ricottura12. La risospensione di nanomateriali in acqua deionizzata e la sonicazione possono aiutare a evitare l'agglomerazione di nanoparticelle. È probabile che la presenza di composti bioattivi o gruppi funzionali nell'estratto acquoso coinvolga il processo di riduzione. La resa delle nanoparticelle dipende esclusivamente dal volume della miscela di reazione utilizzata per il processo di sintesi. La sintesi di nanoparticelle su larga scala ha diversi limiti, tra cui l'agglomerazione e la dimensione delle particelle non uniforme.

Analogamente ai nostri risultati, Aydin Acar et al.13 hanno riportato che le nanoparticelle di ZnO mediate dall'estratto di fiori di Calendula officinalis hanno mostrato proprietà cicatrizzanti sulle cellule L929 con il 69,1% di chiusura della ferita. Inoltre, le nanoparticelle di ZnO mediate da foglie di Crotalaria verrucosa hanno mostrato un potenziale di guarigione delle ferite a una concentrazione di 5 μg/mL su linee cellulari HeLA con il 40,45% di chiusura della ferita14. Zhang et al.15hanno riportato che le nanoparticelle di ZnO sintetizzate utilizzando Euphorbia fischeriana hanno mostrato significative proprietà cicatrizzanti a concentrazioni di 10 e 15 μg/mL. Questi studi hanno dimostrato che la nanoformulazione sintetizzata potrebbe essere utilizzata come agente di guarigione delle ferite. I risultati della ricerca di questi studi hanno dimostrato che i composti sintetizzati possono riparare la ferita e aiutare nella riepitelizzazione nei gruppi di trattamento.

L'emostasi e la migrazione cellulare sono considerati processi importanti nella guarigione delle ferite. Il graffio creato sul monostrato di HUVEC è stato realizzato utilizzando punte di pipette per imitare le ferite artificiali. Inoltre, creare ferite con le stesse larghezze è piuttosto complicato e complicato. D'altra parte, questo è un metodo meno costoso. In questo test, è stato osservato che le nanoparticelle progettate hanno mostrato eccellenti proprietà cicatrizzanti sulle HUVEC a concentrazioni di 10-20 μg/mL rispetto al controllo. Inoltre, le Eu-ZnO-NP sintetizzate hanno la potenza di riparare la ferita creata sul monostrato cellulare senza causare effetti tossici. Questi esperimenti in vitro potrebbero essere utilizzati per identificare l'efficacia di nanomateriali a base di polimeri sintetizzati utilizzando modelli animali.

Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare

Ringraziamenti

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Gli autori desiderano ringraziare sinceramente il Dipartimento di Biologia Cellulare, Central South University, Changsha, Cina, per aver fornito le strutture di strumentazione.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Piastra a 12 pozzettiNEST703011Utilizzato per colture cellulari e saggi
CentrifugaSCILOGEXSC1406Utilizzato per separare le nanoparticelle dalla miscela colloidale
Tubo da centrifuga - 15 mLBIOFILCFT-312150Per centrifugare la soluzione sintetizzata
Provetta da centrifuga: 5 mLBiosharp.BS-50-CM-SPer conservare le nanoparticelle
CO2 incubatoreThermo scientific3010Per coltivare le cellule HUVEC
Acqua denoizzataMilliporoNon applicabile Per la preparazione dell'estratto 
DMEM mediumCytivaSH30243.01Utilizzato per il lavoro di coltura cellulare
ImbutoThermo scientifico42600060Per trattenere la carta da filtro durante la filtrazione
Becher di vetroBorosilicato 1102-50Utilizzato per preparare l'estratto acquoso
Forno ad aria caldaGenetimesNon applicabile Utilizzato per essiccare le nanoparticelle e raccoglierle in polvere
Agitatore magneticoKYLIN-BELLGL-5250-AUtilizzato per la sintesi di nanoparticelle
MicroscopioNikon EclipseTs2Utilizzato per scattare microfotografie 
Piastra di PetriNEST753001Utilizzato per raccogliere le nanoparticelle 
Pipetta 1 mLLab Science YEA17AD0055580Per prelevare/aggiungere il volume specifico di soluzione/estrarre
Puntali per pipette da 1 mLSAINING 3014200-TPer prelevare/aggiungere il volume specifico di soluzione/estrarre
PTFE Miscelatore magnetico Barre di agitazioneLAN RANNon applicabile Utilizzato per il processo di sintesi dei nanomateriali
Idrossido di sodioSigma Alrich71690Utilizzato per regolare il pH durante la sintesi
Forbice inossidabileDeli6034Utilizzato per tritare i materiali della corteccia
Pallone di coltura tissutale T25NEST707001Utilizzato per mantenere le cellule...
Bilancia di pesatura RadwagAS220R2Utilizzato per pesare i prodotti chimici 
Carta da filtro Whatman No.1NewstarGB / T1914-2017Utilizzato per filtrare l'estratto per la sintesi
Nitrato di zinco Sigma Alrich13778-30-8Usato come precursore per la nanoparticella' s sintesi

Riferimenti

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