Il protocollo descrive lo sviluppo di due modelli di roditori che imitano le terapie ormonali di affermazione di genere attraverso la somministrazione sottocutanea di testosterone o estradiolo più ciproterone acetato (utilizzato nelle terapie umane per le persone transgender): impostazione delle dosi, identificazione di biomarcatori rilevanti e valutazione degli effetti.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Istituzione di modelli di ratto che imitano le terapie ormonali per l'affermazione del genere
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le persone transgender (TG) sono individui la cui identità di genere e il sesso assegnato alla nascita non corrispondono. Spesso si sottopongono alla terapia ormonale di affermazione del genere (GAHT), un intervento medico che consente l'acquisizione di caratteristiche sessuali secondarie più allineate con la loro identità di genere individuale, fornendo risultati costanti nel miglioramento di numerose variabili socio-psicologiche. Tuttavia, il GAHT si rivolge a diversi sistemi corporei e vengono registrati alcuni effetti collaterali, anche se non ancora completamente identificati e caratterizzati. Pertanto, le persone TG sottoposte a GAHT possono essere considerate come un sottogruppo di popolazione suscettibile e un'attenzione specifica dovrebbe essere prestata nel quadro della valutazione del rischio, ad esempio attraverso l'uso di modelli animali mirati. Il presente lavoro descrive le procedure impostate per implementare due modelli di ratto che imitano il GAHT: il modello demascolinizzante-femminilizzante (dMF) che imita il GAHT per le donne TG e il modello defeminizzante-mascolinizzante (dFM) che imita il GAHT per gli uomini TG. I modelli sono stati implementati attraverso la somministrazione degli stessi ormoni utilizzati per il GAHT umano, vale a dire, β-estradiolo più ciproterone acetato per dMF e testosterone per dFM, attraverso le stesse vie di esposizione per un periodo di 2 settimane. I ratti vengono controllati quotidianamente durante il trattamento per valutare lo stato di salute e i comportamenti potenzialmente aggressivi. Al momento del sacrificio, il sangue e i tessuti bersaglio sono stati campionati e conservati per analisi biochimiche, molecolari e istopatologiche. Sono stati valutati anche i parametri specifici del sesso, vale a dire il numero di spermatozoi e le dimensioni del clitoride. Inoltre, le isoforme del CYP450, espresse esclusivamente e/o preferenzialmente nel fegato di ratto maschio e femmina, sono state identificate e caratterizzate come nuovi biomarcatori per verificare il successo del GAHT e per impostare il modello. Anche il coinvolgimento della tiroide è stato esplorato come bersaglio chiave nel sistema endocrino.
Introduzione
La percezione psicologica dell'individuo di essere maschio, femmina, nessuno dei due, entrambi o da qualche parte nel mezzo1 è chiamata identità di genere. Può corrispondere al sesso biologico (cisgender) o può essere diverso (transgender - TG). Un uomo TG è un individuo nato come femmina ma che si identifica come uomo. Una donna TG nasce come maschio ma si identifica come donna2. Si stima che, attualmente, ci siano 25 milioni di persone TG in tutto il mondo3, la maggior parte delle quali affette da disforia di genere, una condizione psicologica caratterizzata da ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Gli studi sono condotti in conformità alla Direttiva 2010/63/UE, al Decreto Legislativo n. 26 del 4 marzo 2014 e ai Principi di Buona Pratica di Laboratorio (BPL) dell'OCSE. Il protocollo di studio è stato approvato dal Ministero della Salute italiano (autorizzazione n. 806/2021-PR). Qui, 16 giovani ratti Sprague-Dawley sessualmente maturi di entrambi i sessi (304 ± 13 g di ratti maschi e 190 ± 7 g di ratti femmine, di 8-9 settimane) vengono acquistati e alloggiati in due/gabbia in condizioni standard di laboratorio (22 ± 0,5 °C, 50%-60% di umidità relativa, 12 ore di alternanza buio-luce con 12-14 ricambi d'aria all'ora) con acqua e ....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Come dimostrato da Tassinari et al.14 e da Tammaro et al.33, i seguenti risultati hanno mostrato il successo del GAHT sui ratti e l'appropriatezza dei modelli.
Non sono stati registrati decessi o comportamenti anomali, come l'aggressività, e non sono stati osservati segni clinici di tossicità o sofferenza (ad esempio, diminuzione dell'attività, piloerezione e un aspetto non curato)14.
Le concent.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
L'implementazione di modelli di roditori che imitano la GAHT è fondamentale per studiare la potenziale suscettibilità e vulnerabilità specifica delle persone TG e gli esiti a lungo termine delle terapie, che di solito durano per tutta la vita.
Dato lo scarso numero di studi simili presenti in letteratura, il punto critico di questo esperimento è la selezione delle dosi per impostare i modelli; Tali dosi devono essere sufficientemente basse da essere compatibil.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori dichiarano che la ricerca è stata condotta senza alcun rapporto commerciale o finanziario che potesse potenzialmente creare un conflitto di interessi.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Bilancia analitica ABJ 320-4NM | Kern | Z741091 | |
| Bouin | Biooptica | 05-M01008 | |
| Centrifuga 5415 R | Eppendorf | Per eppendorf | |
| Cyproterone Acetato | Sigma-Aldrich | C3412 | |
| D-MEM medium | Gibco | ||
| ExcelTaq 2X Fast Q-PCR Master Mix (SYBR, ROX), 200 RXN | Smobio | TQ1210 | |
| Soluzione di formalina, tampone neutro, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| GraphPad Prism versione 5.0 per Windows | Software | ||
| GraphPad Hematoxylin | Biooptica | 05-06002/L | |
| Heosin | Biooptica | 05-10007/L | |
| Software di imaging | Nikon | NIS-BR | |
| Software statistico JMP 10 | SAS Institute | ||
| Microm | Thermo Scientific | HM 325 | |
| Microscopia | Nikon Microphot FX | ||
| Testosterone per topo / ratto | ELISA Biovendor | RTC001R | 96T |
| NanoDrop 1000 Spettrofotometro | Thermo Scientific | ND-1000 | |
| Paraffina | Biooptica | 087910 | |
| Bilance portatili SCOUT STX2202 | OHAUS | 30253064 | |
| Primers | Life Technologies | Progettato da PrimerBlast | |
| Rat Estradiol ELISA | Biovendor | RTC009R | 96T |
| Rat TSH (ormone stimolante la tiroide) Kit ELISA | Biotechnology ELK Biotechnology | ELK2283 | 96T |
| Rat TSH (ormone stimolante la tiroide) | ELK Biotechnology | ELK2283 | 96T |
| Kit di sintesi SensiFASTcDNA | Bioline | BIO-65053 | 50 reazioni |
| Olio di Sesam | ACROS | AC241000010 | |
| ratti Sprague Dawley maschio e femmina | Envigo | 8/9 settimane di età | |
| Diete standard | Mucedola | 4RF18 | |
| T4 (Tiroxina) ELISA Kit | ELK Biotecnologia | ELK8716 | 96T |
| Testosterone enantato | Sigma-Aldrich | T3006 | |
| Thermal Cycler LineGene 9600 Plus Bioer | Aurogene | ||
| Elaboratore di tessuti | Shandon Excelsior ES, Thermo Scientific) | ||
| KIT per la purificazione dell'RNA totale | Norgen | 17200 | |
| Lettore multilabel Victor 3 a 50 colonne | Perkin Elmer | ||
| β-Estradiolo 17-valerato | Sigma-Aldrich | E1631 |
Riferimenti
- Rokach, A., Patel, K. Human sexuality: Function, dysfunction, paraphilias, and relationships. , Academic Press. (2021).
- American Psychological Association. Guidelines for psychological practice with transgender and gender nonconforming people. Am Psychol. 70 (9), 832-864 (2015).
- Ammari, T., Sluiter, E. C., Gast, K., Kuzon, W. M.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
