Il presente protocollo è stato ideato per valutare l'effetto della stimolazione magnetica ripetitiva sulla capacità della microglia di fagocitare i detriti di mielina. A tal fine è stato istituito un sistema di co-coltura in vitro di microglia e detriti di mielina.
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Articolo metodologico
Valutazione della fagocitosi microgliale dei detriti mielinici in vitro sotto stimolazione magnetica ripetuta
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le microglia, i fagociti residenti del sistema nervoso centrale (SNC), svolgono un ruolo fondamentale nel mantenimento dell'integrità e dell'omeostasi del SNC rimuovendo le cellule danneggiate, i detriti cellulari e i residui di mielina. L'accumulo di detriti mielinici è implicato in una serie di disturbi del SNC, tra cui la sclerosi multipla, il morbo di Alzheimer, le lesioni cerebrali traumatiche e le lesioni del midollo spinale. La presenza di detriti di mielina non solo esacerba la neuroinfiammazione, ma ostacola anche il potenziale rigenerativo della mielina. Pertanto, migliorare la capacità delle microglia di eliminare i detriti mielinici attraverso la fagocitosi rappresenta una strategia terapeutica promettente. La stimolazione magnetica è emersa come una modalità di trattamento innovativa per le malattie del SNC, con prove crescenti che suggeriscono il suo potenziale nel promuovere la fagocitosi microgliale e supportare il recupero del SNC. Per chiarire ulteriormente gli effetti della stimolazione magnetica sulla clearance microgliale dei detriti mielinali, abbiamo progettato un esperimento in vitro che coinvolge la co-coltura di microglia e detriti di mielina. La co-coltura è stata sottoposta a stimolazione magnetica ripetitiva per valutarne l'impatto sull'attività fagocitaria microgliale nel contesto della patologia del SNC.
Introduzione
La mielina è una struttura stabile della membrana tubulare che circonda gli assoni prodotta dagli oligodendrociti nel sistema nervoso centrale (SNC). Questa guaina mielinica svolge un ruolo fondamentale nel facilitare la propagazione rapida ed efficiente dei potenziali d'azione1. Tuttavia, vari disturbi neurologici, come la sclerosi multipla (SM), l'ictus e le lesioni traumatiche, tra cui la lesione del midollo spinale (SCI) e la lesione cerebrale traumatica (TBI), possono portare alla perdita dell'integrità della mielina. Ciò si traduce nella generazione di detriti mielinici a causa della....
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Protocollo
Qui, tre ratti femmina SD (di età compresa tra 2 e 3 settimane) sono stati utilizzati per estrarre detriti di mielina mediante centrifugazione a gradiente di saccarosio. Tutti i ratti sono stati acquistati presso l'Animal Core Facility della Nanjing Medical University, Nanjing, Cina (Licenza animale: SYXK (Su) 2021-0023). Tutti i ratti sono stati allevati in condizioni di controllo (temperatura 22 ± 2 °C, un periodo di luce/buio di 12 ore/12 ore, 55% ± 5% di umidità relativa). Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Medicina di Nanchino (n. IACUC-190303....
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Risultati
In questo studio, abbiamo inizialmente alimentato cellule microgliali BV-2 in vitro estraendo detriti di mielina derivati dal cervello e utilizzando la stimolazione magnetica ripetitiva per migliorare la loro capacità fagocitica. Successivamente, le cellule della microglia BV-2 sono state coltivate e sottoposte all'intervento di LPS prima della stimolazione magnetica, emulando così lo stato in vivo della microglia sotto rigorosa convalida neurologica. Successivamente, l'intervento rMS è stato applicato .......
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Discussione
La stimolazione magnetica ripetitiva (rMS) è una tecnica di neurostimolazione non invasiva che è stata ampiamente applicata nel trattamento di vari disturbi neurologici e psichiatrici, tra cui disturbi cognitivi, morbo di Alzheimer (AD), ictus, lesioni cerebrali e lesioni del midollo spinale (SCI). La rMS utilizza un campo magnetico pulsato per modulare il potenziale di membrana dei neuroni, influenzando selettivamente l'eccitabilità neurale all'interno del sistema nervoso
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (82302877, 82172541), della Natural Science Foundation of Hunan Province (2023JJ30549).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Terreno di montaggio antisbiadimento con DAPI | Beyotime, Cina | Kit BCA P0131 | |
| ThermoFisher Scientific, America | 23227 | ||
| Celle Bv-2 ATCC | CBP60922 | ||
| Piastre per colture cellulari a 12 pozzetti | Biofil, Cina | ||
| Piastre per colture cellulari a 24 pozzetti | Biofil, Cina | ||
| Scansione laser confocale Microscopio | Zeiss, Germania | 800 | |
| Incubatore a temperatura costante | ThermoFisher Scientific, America | ||
| CFSE | MedChemExpress, America | HY-158820 | |
| DMEM-Terreno di coltura | KeyGen, Cina | KGL1202-500 | |
| FBS | Gibco, America | 16250078 | |
| Iba1 | Abcam, America | ab48004 | |
| Apparecchio di stimolazione magnetica | Yiruide, Cina | CCY-IA | |
| Bobina di stimolazione magnetica | Yiruide, Cina | ||
| Paraformaldeide | BioSharp, Cina | ||
| PBS | KeyGen, Cina | KGL2210-500 | |
| Penicillina-Streptomicina | Gibco, America | 15140-122 | |
| Saccarosio | MedChemExpress, America | HY-B1779 | |
| Tripsina | KeyGen, Cina | KGL2107-100 | |
| Ultracentrifuga | Beckman, America | L-100XP |
Riferimenti
- Osso, L. A., Hughes, E. G. Dynamics of mature myelin. Nat Neurosci. 27 (8), 1449-1461 (2024).
- Gao, R., et al. Myelin debris phagocytosis in demyelinating disease. Glia. 72 (11), 1934-1954 (2024).
- Kopper, T. J., Gensel, J. C.
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Ristampe e permessi
