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Articolo metodologico

Rilevamento della suscettibilità ai farmaci e delle interazioni farmacologiche nel Mycobacterium tuberculosis mediante microtitolazione di resazurina e saggio a scacchiera

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DOI:

10.3791/67672

⸱

24 ottobre 2025

 ,  , 
1Department of Immunology, National Institute for Research in Tuberculosis, 2University of Madras, 3Faculty of Medical Research, Academy of Scientific and Innovative Research (AcSIR)

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per visualizzare e standardizzare il saggio del microtitolazione della resazurina (REMA) e la sua variazione a scacchiera per valutare la suscettibilità ai farmaci e i profili di interazione di Mycobacterium tuberculosis. Questo metodo fornisce informazioni, in vitro, per ottimizzare le combinazioni di farmaci da utilizzare nei regimi di trattamento e combattere la tubercolosi multiresistente.

Abstract

L'insorgenza della tubercolosi multiresistente ai farmaci (MDR-TB) richiede metodi di test di suscettibilità ai farmaci (DST) rapidi e accurati per guidare un trattamento efficace. Questo studio introduce una metodologia che combina il saggio del microtitolazione della resazurina (REMA) e il test a scacchiera per determinare la concentrazione inibitoria minima (MIC) e valutare le interazioni farmacologiche dei farmaci antitubercolari contro il Mycobacterium tuberculosis. Il REMA, adattato a un formato a 96 pozzetti, sfrutta la riduzione del colorante resazurina da parte di M. tuberculosis metabolicamente attivo come indicatore visivo della suscettibilità ai farmaci. Concentrazioni variabili di farmaci anti-TB vengono testate contro gli isolati di M. tuberculosis e si osservano cambiamenti di colore per determinare la MIC. Successivamente, viene impiegato un test a scacchiera per valutare i potenziali effetti sinergici, additivi o antagonisti tra le combinazioni di farmaci. Questo metodo semplice ed economico produce risultati entro sette giorni, offrendo un vantaggio significativo rispetto ai metodi tradizionali dell'ora legale. Questo metodo fornisce preziose informazioni sulla DST degli isolati di M. tuberculosis e facilita l'identificazione di combinazioni di farmaci promettenti per migliorare i risultati del trattamento contro la MDR-TB.

Introduzione

La tubercolosi (TBC), causata dal Mycobacterium tuberculosis, rimane una formidabile sfida sanitaria globale, esacerbata dall'emergere di ceppi resistenti ai farmaci. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), nel 2023 si stima che ci siano stati 10,6 milioni di nuovi casi di tubercolosi e 1,3 milioni di decessi, evidenziando l'urgente necessità di strategie diagnostiche e terapeutiche più efficaci1. La tubercolosi multiresistente ai farmaci (MDR-TB) e la tubercolosi estensivamente resistente ai farmaci (XDR-TB) rappresentano sfide importanti per il controllo della malattia a causa della complessità, della tossicità e della durata prolungata degli attuali regimi di trattamento 2,3.

La recente introduzione di nuovi agenti anti-TB, come la bedaquilina e il delamanid, che prendono di mira vie biochimiche uniche in M. tuberculosis, rappresenta una svolta nella gestione della TB 4,5. Questi farmaci sono stati approvati principalmente per l'uso nei casi di tubercolosi resistente ai fluorochinoloni e alla rifampicina come parte dei regimi MDR-TB più lunghi e più brevi approvati dall'OMS 6,7. Tuttavia, la determinazione delle combinazioni ottimali di farmaci e dei regimi posologici, in particolare quando questi agenti vengono utilizzati in combinazione con terapie consolidate, rimane un'area critica di indagine 8,9. Gli attuali metodi per i test di suscettibilità ai farmaci (DST), sebbene affidabili, sono spesso dispendiosi in termini di tempo, risorse e poco pratici per valutare combinazioni complesse di farmaci in un contesto clinico o di ricerca10. Ciò sottolinea la necessità di saggi fenotipici semplici e scalabili in grado di valutare sia l'efficacia dei farmaci che i profili di interazione in M. tuberculosis.

Tra questi approcci fenotipici, il saggio del microtitolazione della resazurina (REMA) è emerso come un metodo convenzionale e ampiamente accettato per valutare la suscettibilità ai farmaci. Il test si basa sulla riduzione del colorante blu di resazurina a resorufina rosa da parte di batteri metabolicamente attivi, che funge da indicatore visivo della vitalità cellulare. Sebbene sia stato reso popolare da Palomino et al. nel 200211, il principio dell'uso della resazurina per valutare la crescita batterica risale al lavoro di Pital et al.12. Negli ultimi due decenni, il metodo REMA è stato ampiamente convalidato e incorporato nelle procedure operative standard per la ricerca sui micobatteri e i test diagnostici 13,14,15.

A complemento del REMA, il test checkerboard, introdotto da Caleffi-Ferracioli et al., estende l'utilità di REMA consentendo studi di interazione tra due farmaci in un formato di microdiluizione utilizzando lo stesso readout a base di resazurina16. Sebbene promettente in linea di principio, questo metodo rimane principalmente uno strumento di ricerca utile per lo screening di potenziali combinazioni di farmaci sinergici o antagonisti durante la valutazione preclinica precoce piuttosto che un test diagnostico di routine.

Questo manoscritto non presenta REMA o la sua variante a scacchiera come nuovi metodi. Piuttosto, l'obiettivo di questo studio è quello di fornire una rappresentazione visiva di una metodologia utile e convalidata per la determinazione della MIC e il test di interazione farmacologica, che è stata descritta e applicata con successo in studi precedenti. Forniamo un protocollo passo-passo con una guida dettagliata sulla preparazione dell'inoculo, la titolazione del farmaco, il layout della piastra, l'interpretazione della MIC e l'analisi dell'interazione a scacchiera. Questo manoscritto mira a supportare un uso più ampio e coerente dei saggi REMA e checkerboard nello sviluppo di farmaci per la tubercolosi e nella farmacologia sperimentale.

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Protocollo

NOTA: Le sostanze chimiche e i materiali utilizzati negli esperimenti di esempio sono disponibili nel file della Tabella dei materiali.

1. Preparazione dei terreni 7H9-S

  1. Per 100 mL di terreno 7H9-S, pesare 0,47 g di polvere 7H9 e 0,1 g di casitone, quindi sciogliere in 90 mL di acqua distillata; Mescolare fino a completo scioglimento.
  2. Sterilizzare il brodo in un pallone da 250 ml in autoclave a 121 °C per 15 min.
  3. Una volta sterilizzato in autoclave e raffreddato, aggiungere 10 ml di integratore di albumina oleica destrosio catalasi (OADC) e 0,5 ml di glicerolo.
  4. Incubare per una notte a 37 °C per verificare la sterilità.
    NOTA: La sterilità del terreno 7H9-S preparato viene verificata incubandolo per una notte a 37 °C. Il terreno dovrebbe rimanere limpido il giorno successivo, senza che si osservi torbidità.
  5. Conservare il fluido 7H9-S a 4 °C, al riparo dalla luce diretta.

2. Preparazione dell'inoculo M.tuberculosis

  1. Preparazione di inoculo da coltura di M. tuberculosis coltivato in terreno solido di Lowenstein Jensen (LJ)
    1. Utilizzando un ciclo di inoculazione sterile, raccogliere un ciclo completo di coltura di M. tuberculosis da un terreno LJ appena coltivato (21-28 giorni).
      NOTA: Evitare accuratamente di raschiare troppo in profondità nel substrato, che potrebbe disturbare le colonie più vecchie.
    2. Mettere i batteri raccolti in un flacone sterile contenente perle di vetro sterili e 2,5 ml di brodo 7H9-S. Assicurarsi che le perle di vetro aiutino nella rottura meccanica dei grumi durante il vortice.
      NOTA: Le colture fresche tra 21 e 28 giorni sono essenziali per garantire risultati affidabili dei test di suscettibilità. Evita di utilizzare culture più vecchie, in quanto potrebbero portare a risultati incoerenti.
    3. Fissare la bottiglia di bijou e agitare energicamente per almeno 1 minuto. Garantire una miscelazione continua per rompere i grumi batterici, ottenendo una sospensione relativamente torbida. L'obiettivo è una distribuzione omogenea dei batteri all'interno del mezzo.
    4. Trasferire la sospensione di coltura in una bottiglia da bijou fresca e lasciarla riposare indisturbata per 15 minuti. Questo passaggio consente ai grumi batterici più grandi di depositarsi sul fondo.
    5. Utilizzando lo standard McFarland 1.0 come riferimento, controllare la torbidità della sospensione di coltura e regolare con brodo 7H9-S fino a raggiungere la torbidità desiderata.
      NOTA: Uno standard McFarland, tipicamente 1.0, viene utilizzato come riferimento per una torbidità equivalente a circa 1.97 × 106 CFU/mL17. Lo standard viene preparato combinando 0,1 mL di cloruro di bario all'1% e 9,9 mL di acido solforico all'1%, ottenendo un precipitato fine di solfato di bario, che fornisce la torbidità. La sospensione batterica viene confrontata visivamente con lo standard McFarland tenendo entrambi i tubi su uno sfondo bianco con linee nere. La torbidità della sospensione batterica è regolata in base allo standard.
  2. Preparazione di inoculo da coltura di M.tuberculosis coltivato in terreno liquido 7H9
    1. Utilizzando una pipetta sterile, trasferire 2,5 ml di coltura di M. tuberculosis (2-3 settimane di vita) in un flacone bijou fresco con perle di vetro.
    2. Agitare la miscela per almeno 1 minuto per garantire una sospensione omogenea. L'azione vortice aiuta a rompere eventuali grumi.
    3. Trasferire i 2,5 mL di sospensione di coltura in un flacone bijou fresco e lasciarlo per 15 minuti per consentire ai grumi di depositarsi sul fondo.
    4. Confrontare la torbidità con lo standard McFarland 1.0 e regolare con il brodo 7H9-S per ottenere la concentrazione richiesta.
  3. Diluizione dell'inoculo
    1. Preparare una diluizione 1:10: per diluire l'inoculo, aggiungere 1 mL di sospensione batterica a 9 mL di brodo 7H9-S in un contenitore sterile (questo darà circa 1,97 × 105 CFU/mL).

3. Preparazione degli antibiotici e conservazione

  1. Preparazione delle soluzioni madre e di lavoro: Preparare i farmaci utilizzati nell'esperimento di esempio, insieme ai loro metodi di preparazione della riserva e della soluzione di lavoro, come riassunto nella Tabella 1.
    1. Isoniazide (INH o I): per preparare una soluzione madre da 1 mg/mL di isoniazide, sciogliere 2 mg di polvere di isoniazide in 2,0 mL di acqua distillata. Sterilizzare la soluzione utilizzando un filtro per siringa da 0,22 μm.
    2. Moxifloxacina (MOX o M): per preparare una soluzione madre da 1 mg/mL di Moxifloxacina, sciogliere 2 mg di polvere di moxifloxacina in 2,0 mL di acqua distillata. Sterilizzare la soluzione utilizzando un filtro per siringa da 0,22 μm.
    3. Bedaquilina (BDQ o J): La bedaquilina è scarsamente solubile in acqua. Per preparare una soluzione madre da 1 mg/mL, sciogliere 2 mg di polvere di bedaquilina in 2,0 mL di DMSO. Sterilizzare la soluzione utilizzando un filtro per siringa da 0,22 μm.
    4. Delamanid (DEL o D): simile alla bedaquilina, il delamanid ha una scarsa solubilità in acqua. Per preparare una soluzione madre da 1 mg/mL, sciogliere 2 mg di polvere di delamanid in 2,0 mL di DMSO. Sterilizzare la soluzione utilizzando un filtro per siringa da 0,22 μm.
  2. Conservazione: Aliquotare 100 μL di ciascuna soluzione madre di farmaco in crioviali sterili e conservarli a -20 °C per un massimo di 3 mesi. Una volta scongelata, scartare la soluzione rimanente. Non ricongelare.

4. Preparazione della soluzione di Resazurina e conservazione

  1. Sciogliere la resazurina a una concentrazione finale dello 0,01% o dello 0,02% in acqua distillata. Filtrare la soluzione attraverso un filtro da 0,2 μm per la sterilizzazione.
  2. Conservare la soluzione sterilizzata di resazurina a 4 °C per un massimo di 1-2 settimane, al riparo dalla luce per prevenirne la degradazione.

5. Preparazione della piastra REMA

NOTA: Fare riferimento alla Figura 1 per una guida visiva sulla configurazione della piastra per microtitolazione REMA a 96 pozzetti. La piastra a 96 pozzetti offre spazio sufficiente per eseguire saggi di farmaci in doppio per ciascun farmaco in sei diluizioni doppie.

  1. Aggiungere il brodo 7H9-S: utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 100 μl di brodo 7H9-S alle colonne 2-11, righe B-G. Assicurarsi che la distribuzione sia uniforme in tutti i pozzi.
  2. Aggiungere soluzioni farmacologiche: aggiungere 100 μl della soluzione INH di lavoro ai pozzetti B2 e B6. Allo stesso modo, aggiungere le soluzioni di lavoro MOX, DEL e BDQ ai rispettivi pozzi (B3 e B7, B4 e B8, B5 e B9).
  3. Diluire le concentrazioni del farmaco: utilizzando una pipetta multicanale, eseguire due diluizioni seriali dalle file B a G (colonne 2-9), assicurandosi di scartare gli ultimi 100 μl dopo la miscelazione nella riga G.
  4. Pozzetti per il controllo della crescita: Aggiungere 100 μL di brodo 7H9-S ai pozzetti B10 e C10 per il controllo della crescita.
  5. Controlli negativi e di sterilità: Aggiungere 200 μl di brodo 7H9-S ai pozzetti B11 e C11 per fungere da controlli negativi e di sterilità.
  6. Prevenire l'evaporazione: aggiungere 200 μl di acqua distillata sterile a tutti i pozzetti esterni per ridurre al minimo l'evaporazione durante l'incubazione.
  7. Piastre di inoculazione: Inoculare ogni pozzetto con 100 μl della sospensione di coltura diluita 1:10, ad eccezione del pozzetto di controllo negativo. Garantire un'inoculazione uniforme in tutti i pozzetti.
  8. Sigillare e incubare: Sigillare le piastre in sacchetti di plastica per mantenere la sterilità e incubare a 37 °C per 7 giorni.

6. Saggio di titolazione a scacchiera REMA

NOTA: Fare riferimento alla Figura 2A, B per una guida visiva sul modello di saggio di titolazione a scacchiera REMA per combinazioni di farmaci (ad es. BDQ e DEL).

  1. Diluire i farmaci verticalmente e orizzontalmente: diluire il primo farmaco (BDQ) verticalmente (righe B-H) e il secondo farmaco (DEL) orizzontalmente (colonne 2-8) per generare varie combinazioni di due farmaci.
    NOTA: Preparare la soluzione di lavoro diluita in serie in una fiala sterile (da 4 μg/mL a 0,06 μg/mL) per un farmaco diluito orizzontalmente.
  2. Aggiungere la soluzione di lavoro BDQ per la diluizione verticale: aggiungere 100 μl della soluzione BDQ di lavoro ai pozzetti B2 e B8.
  3. Aggiungere il brodo 7H9-S: utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 50 μl di brodo 7H9-S alle colonne C2-H8. Assicurarsi che la distribuzione sia uniforme in tutti i pozzi.
  4. Diluire le concentrazioni del farmaco: utilizzando una pipetta multicanale, eseguire due diluizioni dalle righe B-H (colonne 2-8), assicurandosi di scartare gli ultimi 50 μl dopo la miscelazione nella riga H.
  5. Aggiungere la soluzione di lavoro DEL per la diluizione orizzontale: Aggiungere soluzioni di lavoro diluite in serie dei farmaci da 4 μg/mL a 0,06 μg/mL ai pozzetti corrispondenti.
  6. Pozzetti per il controllo della crescita: Aggiungere 100 μL di brodo 7H9-S ai pozzetti B9 e C9 per il controllo della crescita.
  7. Controlli negativi e di sterilità: aggiungere 200 μl di brodo 7H9-S ai pozzetti B10 e C10 per fungere da controlli negativi e di sterilità.
  8. Piastre di inoculazione: Inoculare ogni pozzetto con 100 μl della sospensione di coltura diluita 1:10, ad eccezione del pozzetto di controllo negativo. Garantire un'inoculazione uniforme in tutti i pozzetti.
  9. Sigillare e incubare: Sigillare le piastre in sacchetti di plastica per mantenere la sterilità e incubare a 37 °C per 7 giorni.

7. Incubazione e interpretazione dei risultati

  1. Colorazione con resazurina: dopo 7 giorni di incubazione, aggiungere 30 μL di resazurina (0,01%-0,02%) a ciascun pozzetto. Sigillare e incubare la piastra durante la notte per lo sviluppo del colore.
  2. Interpreta il cambiamento di colore.
    1. Esamina visivamente i pozzetti sotto una luce bianca costante o un'illuminazione bilanciata dalla luce diurna.
      NOTA: Il controllo della crescita (nessun farmaco) dovrebbe diventare blu o rosa, indicando un metabolismo batterico attivo. Un colore blu indica la completa inibizione della crescita. Il rosa denota una crescita attiva, mentre il viola (una tonalità mista) rappresenta un'inibizione parziale.
    2. Confronta l'intensità del colore sia con il controllo negativo (solo supporto) che con il controllo positivo (crescita batterica senza farmaco) per un'interpretazione accurata. Per ridurre al minimo la distorsione dell'osservatore, utilizzare la doppia lettura indipendente o la fotografia su lastra.
      NOTA: Il giudizio visivo può variare in base alle condizioni di illuminazione ambientale, quindi è essenziale un'illuminazione costante.
  3. Concentrazione inibitoria minima (MIC)
    1. Definire la MIC come la concentrazione più bassa di farmaco alla quale il pozzetto rimane completamente blu, indicando un'inibizione dell'attività metabolica del ≥99%. Considera i pozzetti che mostrano un colore viola o rosa indicativo di una crescita parziale o completa.
      NOTA: La determinazione della MIC mediante REMA si avvicina ai principi del metodo classico della proporzione, in cui la MIC è considerata la concentrazione più bassa che inibisce il ≥99% dell'inoculo rispetto al controllo senza farmaci. Sebbene REMA non utilizzi la conta delle UFC, l'endpoint visivo rappresenta un correlato fenotipico di questa soglia basata sulle proporzioni. Questa interpretazione è in linea con i protocolli colorimetrici precedentemente stabiliti11,14.

8. Calcolo dell'indice di concentrazione inibitoria frazionaria (FIC)

NOTA: L'indice di concentrazione inibitoria frazionaria (FIC) aiuta a determinare l'interazione tra due farmaci (sinergia, antagonismo o indifferenza). Viene calcolato in base ai valori MIC ottenuti dal test a scacchiera.

  1. Identificare la MIC per ogni farmaco da solo: dal test REMA, determinare la MIC per ciascun farmaco se usato singolarmente.
  2. Identificare la MIC per ciascun farmaco in combinazione: dal saggio di titolazione a scacchiera, identificare la MIC di ciascun farmaco quando viene utilizzato in combinazione con il secondo farmaco.
  3. Calcola il FIC per ogni farmaco.
    NOTA: Fare riferimento alla Tabella 2 per le formule utilizzate per calcolare il FIC e l'indice FIC. La Tabella 3 mostra la MIC consolidata basata sul test REMA. I valori rappresentativi dell'indice MIC e FIC sono riportati nella Tabella 4.
    1. Interpretare l'indice FIC come segue:
      FIC ≤ 0,5: Indica sinergia: i farmaci lavorano insieme per inibire la crescita in modo più efficace rispetto a entrambi i farmaci da soli.
      FIC > da 0,5 a < 4,0: indica l'additività: l'effetto combinato è uguale alla somma dei singoli effetti.
      FIC ≥ 4.0: Indicare antagonismo: i farmaci interferiscono con l'attività dell'altro.
  4. Esempio: Calcolo dell'indice FIC per BDQ e DEL in H37Rv
    1. Determinare la MIC di BDQ per H37Rv (ad esempio, 0,125 μg/mL). In combinazione con DEL, registrare la MIC di BDQ come 0,03 μg/mL.
    2. Determinare la MIC di DEL per H37Rv (ad esempio, 0,063 μg/mL). In combinazione con BDQ, registrare la MIC di DEL come 0,125 μg/mL.
    3. Calcola FIC per BDQ:
      FIC(BDQ) = MIC di BDQ in combinazione/MIC di BDQ da solo = 0,03 / 0,125 = 0,24
    4. Calcola FIC per DEL:FIC(DEL) = MIC di DEL in combinazione / MIC di DEL da solo = 0,125 / 0,063 = 1,98
    5. Somma entrambi i FIC per ottenere l'indice FIC:Indice FIC = FIC(BDQ) + FIC(DEL) = 0,24 + 1,98 = 2,26
    6. Interpreta il risultato.
      NOTA: Un indice FIC di 2,26 rientra nell'intervallo di interazione additiva (da >0,5 a <4,0), indicando che la combinazione di BDQ e DEL ha un effetto additivo sull'inibizione della crescita di M. tuberculosis.

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Risultati

Determinazione della MIC dei farmaci anti-TB mediante saggio REMA
Le attività di bedaquilina, delamanid, moxifloxacina e isoniazide sono state valutate utilizzando REMA contro l'H37RV sensibile ai farmaci e l'isolato clinico resistente ai farmaci di M. tuberculosis. La bedaquilina, il delamanid e l'isoniazide sono stati utilizzati nell'intervallo di concentrazione da (1 μg/mL a 0,03 μg/mL) e la moxifloxacina era nell'intervallo da (2 μg/mL a 0,06 μg/mL). Le sospensioni batteriche di isolati c...

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Discussione

La minaccia globale rappresentata dalla tubercolosi resistente ai farmaci (DR-TB) è diventata una questione urgente 1,19. Ciò ha creato l'urgente necessità di sviluppare metodi rapidi e migliorati per i test di suscettibilità ai farmaci (DST), in particolare per i farmaci antitubercolari di seconda linea e più recenti. Tali metodi sono essenziali per migliorare le strategie di trattamento, gestire efficacemente i farmaci anti-TB ...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Flacone quadrato da 250 mL con tappoSchott Duran218203655Preparazione dei terreni
Brodo 7H9Becton Dickinson271310Terreni di crescita per M. tuberculosis (temperatura ambiente)
Piastra a 96 pozzetti con coperchioCorning3596Micropiastre in polistirene a fondo piatto trasparente a 96 pozzetti trattate con TC, confezionate singolarmente, con coperchio, sterili (temperatura ambiente)
ART-Tips (1000 μ L)TARSONI528106Filtri in polietilene idrofobico con  Puntale filtrante in polipropilene in rack-sterile (temperatura ambiente)
ART-Tips (200 μ L)TARSONI528104Filtri in polietilene idrofobico con  Puntale filtrante in polipropilene in rack-sterile (temperatura ambiente)
Cloruro di bario diidratoMerck217565Preparazione standard McFarland (temperatura ambiente)
Bedaquilina (BDQ)Jansen e JansenRegalo di Jansen e JansenFarmaco anti-TB (4 ° C)
CasitoneBecton Dickinson225930Supplemento per coltura batterica (Temperatura ambiente)
Delamanid (DEL)Otsuka Prodotti farmaceuticiRegalo da Otsuka PharmaceuticalsFarmaco anti-TB (4 ° C)
DimetilsolfossidoSigma-Aldrich67-68-5Preparazione del brodo di farmaci (temperatura ambiente)
Filtro 0,2 μ mMilliporeSLGVR33RS0,22  μ m PVDF, monouso, filtro per siringa sterile (temperatura ambiente)
GliceroloMerck356350Aggiunto ai terreni di coltura (temperatura ambiente)
Anello di inoculazioneSigma-AldrichI8263Per la preparazione della sospensione della coltura (Temperatura ambiente)
Isoniazide (INH)Sigma-AldrichI3377-5GFarmaco anti-TB (4 ° C)
LJ medio InclinatoBD Mycobactosel221414Terreni di crescita per M. tuberculosis (4 ° C)
McCartney Bijou Narrow Mouth bottiglia, 14 mLSupertek12.124.0014Per la preparazione della sospensione della coltura (Temperatura ambiente)
McCartney Bijou Narrow Mouth bottiglia, 7 mLSupertek12.124.0007Per la preparazione della sospensione della coltura (Temperatura ambiente)
Micropipette (1000 μ L)GilsonF144059MPer una manipolazione precisa dei liquidi (temperatura ambiente)
Micropipette (200 μ L)GilsonFA10005MPer una manipolazione precisa dei liquidi (temperatura ambiente)
Moxifloxacina (MOX)Sigma-AldrichSML1581-50 MGFarmaco anti-TB (4 ° C)
Pipetta multicanale (20– 200 μ L)VWR849070024Per il pipettaggio simultaneo tra pozzetti
OADCBecton Dickinson211886Integratore per colture batteriche (4 ° C)
Riempitrici per pipetteMerckZ333980Per una manipolazione precisa dei liquidi (temperatura ambiente)
Sale sodico di resazurinaSigma-Aldrich62758-13-8Indicatore redox per saggi REMA (temperatura ambiente)
Pipette sierologiche,10 mLCorningCLS4100Sono state utilizzate pipette sterili monouso in polistirene (temperatura ambiente)
Perle di vetro massiccio, diametro 6 mmSigma-AldrichZ265950Per la preparazione della sospensione della coltura (Temperatura ambiente)
Acido solforico 95– 97%Merck100731Preparazione standard McFarland (temperatura ambiente)
Siringhe per filtroDispo Van100032Per l'uso con filtri per siringhe
Miscelatore a vorticeREMICM-101 PLUSPer la preparazione della sospensione della coltura
Poli sacchetto con cernieraSigma-AldrichZ162949

Riferimenti

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