L'articolo descrive un protocollo per ricostituire il microbiota del latte donato pastorizzato utilizzando il microbiota del latte materno in contesti pratici e reali. Dimostra un'efficace crescita batterica e modulazione del microbioma, supportando l'applicazione fattibile di questa procedura all'interno delle cure di routine di un ospedale di maternità e della banca del latte umano associata.
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Articolo metodologico
Ricostituzione individualizzata del microbiota del latte umano: un approccio fattibile in contesti del mondo reale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il latte materno (MOM) è la risorsa nutrizionale più completa per i neonati. Nei casi in cui le madri non sono in grado di produrre latte a sufficienza o non possono allattare al seno, l'alternativa preferita è il latte umano pastorizzato di donazione (PDM), che viene regolarmente fornito dalle banche del latte umano. PDM offre una gamma superiore di elementi nutrizionali e immunologici rispetto a qualsiasi formula disponibile in commercio. Tuttavia, per garantire la biosicurezza, il PDM viene sottoposto a pastorizzazione, un processo che inattiva il microbiota commensale e riduce alcuni composti bioattivi. Questo studio presenta un protocollo progettato per ripristinare il microbiota della PDM utilizzando MOM come fonte microbica, adattando l'approccio a un contesto clinico del mondo reale.
Il protocollo è stato implementato in uno studio clinico condotto presso un ospedale di maternità e la banca del latte umano associata, con l'obiettivo di fornire latte donato personalizzato ai neonati prematuri le cui madri non possono produrre latte a sufficienza. La metodologia prevede l'inoculazione di PDM con il 10% di MOM, seguita da incubazione a 37 °C per 4 ore. L'analisi microbiologica ha dimostrato una crescita batterica di successo nel latte inoculato (IM) dopo l'incubazione, con il profilo del microbiota del latte ricostituito (RM) molto simile a quello del MOM, indicando un efficace ripristino del microbiota. Questi risultati suggeriscono che il protocollo di ricostituzione è fattibile per l'implementazione nell'assistenza neonatale, con il potenziale di migliorare la qualità nutrizionale e immunologica del PDM, supportando così la salute e lo sviluppo dei neonati non allattati al seno.
Introduzione
Il latte materno è ampiamente riconosciuto come la migliore fonte di nutrimento per i neonati, fornendo non solo macro e micronutrienti essenziali, ma anche una complessa gamma di elementi, tra cui vari metaboliti e componenti del sistema immunitario, come anticorpi, citochine e cellule1. Inoltre, le proprietà benefiche del latte materno derivano anche da una comunità di microrganismi commensali. Tutti questi elementi del latte materno svolgono un ruolo cruciale nello sviluppo del neonato1. La comunità di microrganismi, nota come microbiota, è influenzata da una combinazione di fattori c....
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Protocollo
Questo protocollo è stato eseguito nell'ambito delle procedure di uno studio clinico condotto dal nostro gruppo di ricerca (Registro brasiliano degli studi clinici, ReBEC RBR-729kr8x), e ha ricevuto l'approvazione del Comitato Etico (processo CAAE nº 41063520.4.0 000.0121) e il consenso informato è stato ottenuto da tutti i partecipanti prima della randomizzazione e della raccolta dei campioni.
La procedura di ricostituzione del microbiota del latte si svolge in tre fasi:
1. Ottenere il latte crudo della madre
NOTA: La procedura per otte....
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Risultati
Analisi della crescita batterica mediante coltura su piastra
I test microbiologici condotti per convalidare il metodo di inoculazione della PDM con il MOM, come proposto da Cacho et al.9, hanno dimostrato che, sulla base della conta CFU/mL, non c'erano differenze significative tra i campioni di latte inoculati prima e dopo l'incubazione di 4 ore. Tuttavia, in questi due punti temporali sono state osservate differenze nel numero di colonie, che indicano la crescita batterica dur.......
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Discussione
Qui presentiamo un protocollo da applicare negli ospedali di maternità associati a una banca del latte umano, con l'obiettivo di fornire a PDM la ricostituzione del microbiota del latte da una madre specifica che, per vari motivi, non può fornire latte sufficiente al suo neonato. Il protocollo è semplice e si basa essenzialmente su due passaggi. La prima prevede l'applicazione di procedure eseguite di routine nelle banche del latte umano per la corretta raccolta e successiva pastorizzazi.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano con gratitudine il sostegno finanziario del Programa de Pesquisas para o SUS, PPSUS/2020, Ministério da Saúde do Brasil; Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Estado de Santa Catarina, numero di sovvenzione: 2021TR000506; Programa de Pesquisa Universal, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) do Ministério de Ciência e Tecnologia do Brasil, Numero di sovvenzione: 420996/2023-0; Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica 2022 - 2024, Numero di sovvenzione: 120815/2023-0. Ringraziamo anche i volontari per aver fornito i campioni.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tiralatte elettrico | Horigen | XN-2219M2 | Pompa morbida dual plus |
| Pyrex bottiglie per terreni | Corning | CLS1395100 | Contenitori in vetro con coperchi in plastica... |
| 1000 µ L pipetta Labmate pro | Corning HTL SA | 5666 | Pipettatore a volume variabile |
| Fiala criogenica | Corning | CLS431417 | Fiale da 2 mL senza DNasi/RNasi |
| Provette da centrifuga da 15 ml | Corning | CLS431470 | Provette da 15 mL prive di DNasi/RNasi |
| Bagno d'acqua | EcoSonics | Q3.0/40A | |
| Uomo Rogosa– Sharpe (MRS) | Difco | 288210 | Terreni di crescita dei batteri dell'acido lattico |
| Mannitolo Sale agar (MSA) | Himedia | MH118 | Stafilococco Terreno di crescita |
| Barattolo anaerobico | Permutazione | Creare un ambiente a basso contenuto di ossigeno per la crescita dei batteri dell'acido lattico | |
| Extracta Kit – Kit | estrazione | RNA Loccus | MPTA-PV16-B Y |
| DNA Nanodrop | Promega | E6150 | Quantus DNA |
| GoTaqG2 | Promega | M7841 | Sistema di amplificazione PCR |
| Quantus Fluorimetro | Promega | E5150 | Kit di quantificazione DNA / RNA |
| MiSeq System | Illumina Inc. | M-GL-00006 v4.0 | Apparecchiatura di sequenziamento |
| Kit di reagenti MiSeq v2 (300 cicli) | Illumina Inc. | MS-102-2002 | Kit e reagenti per sequenziamento |
| Nome del software | |||
| Trimmomatic | http://www.usadellab.org/cms/index.php?page=trimmomatic | Strumento di rifilatura per dati Illumina NGS | |
| QIIME 2 | https://docs.qiime2.org/2024.10/ | Pacchetto per l'analisi del microbioma | |
| Nome del primer | Sequenza del primer16S_357F | ||
| TCGTCGGCAGCGTCAGA TGTGTATAAGAGACAGC CTACGGGNGGCWGCAG | |||
| 16S_805R | GTCTCGTGGGCTCGGAG ATGTGTATAAGAGACAGG ACTACHVGGGTATCTAATC |
Riferimenti
- Szyller, H., et al. Bioactive components of human milk and their impact on child's health and development, Literature Review. Nutrients. 16 (10), 1487(2024).
- Fernández, L., Rodríguez, J. M. Human milk microbiota: Origin and potential us....
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Ristampe e permessi
