Un nuovo metodo di fissazione per il trattamento di agopuntura nei ratti

Sommario

Qui, descriviamo un nuovo metodo di fissazione dei ratti che facilita l'agopuntura e la moxibustione sul dorso dei ratti.

Abstract

I ricercatori incontrano sempre il problema che gli animali sono difficili da controllare negli esperimenti sugli animali legati all'agopuntura. Esistono già alcuni metodi per impedire agli animali di fuggire dai siti di trattamento. Tuttavia, l'effetto di questi metodi di fissazione è diverso dallo stato di trattamento umano. Pertanto, abbiamo inventato un nuovo metodo di fissazione per mantenere i ratti proni, tranquilli e svegli durante il trattamento.

L'attrezzatura è costituita da una piattaforma di ritenuta in plastica porosa, un panno di cotone quadrato e diverse cinghie di ritenuta per il fissaggio dei ratti. Innanzitutto, infilare le cinghie di ritenuta nella piattaforma di ritenuta. Per ogni cinturino, passarlo attraverso due fori nella stessa fila, lasciando due fori tra di loro. Dopo aver posizionato la prima cinghia, inserire l'altra cinghia nella piattaforma allo stesso modo, assicurandosi di uno spazio di quattro file tra le due cinghie. In secondo luogo, afferra la coda del topo e guidala nel canale formato da due cinghie di ritenuta. Copri la testa del topo con un panno di cotone quadrato. In terzo luogo, stringere la cinghia di ritenuta sul collo per fissare la testa e gli arti anteriori. Quindi tieni gli arti posteriori del topo e stringi l'altra cinghia per fissare la vita e gli arti posteriori.

Questo metodo non richiede anestesia. Il dispositivo è semplice e facile da usare. Per valutarne l'efficacia e la sicurezza, abbiamo somministrato la procedura a 60 ratti. Tutti hanno completato il trattamento di agopuntura senza complicazioni. Mentre 14 ratti hanno mostrato brevi periodi di lotta durante la procedura, non sono stati osservati effetti avversi. I risultati dimostrano che il metodo è efficace e sicuro per l'uso.

Introduzione

Sia la modellazione chirurgica che l'intervento in vitro richiedono metodi di fissazione animale appropriati. Ciò garantisce che gli animali siano nella posizione più manovrabile e relativamente comoda. Ci concentriamo sul metodo di fissazione animale per l'intervento di agopuntura. L'agopuntura è efficace nel trattamento di molte malattie ^1,2. Lo studio del meccanismo dell'agopuntura ha ricevuto molta attenzione. Attualmente, l'agopuntura e la moxibustione sono argomenti di ricerca caldi in patria e all'estero. Il meccanismo patologico del trattamento con agopuntura deve essere ulteriormente esplorato e, oltre agli esperimenti clinici, è necessario anche il supporto della ricerca di base ^3,4. Nella ricerca di base sull'agopuntura e la moxibustione, la fissazione animale è un importante passo tecnico.

Attualmente, i metodi di fissazione comunemente usati includono bondage, anestesia, oscillazione, piattaforma alta e altri metodi di fissaggio. I vantaggi e gli svantaggi di questi metodi sono descritti di seguito.

Il primo passo nell'esecuzione del metodo di fissazione dell'anestesia è anestetizzare i ratti. Quando si utilizza questo metodo, i ricercatori corrono il rischio che i ratti possano morire. È anche possibile operare direttamente senza restrizioni dopo l'anestesia⁵. Quando si utilizza il metodo di fissazione della piattaforma calzino-coniglio, i ricercatori inseriscono la testa del ratto in un calzino tagliato, estendono gli arti anteriori attraverso i fori e fissano le gambe alla piattaforma del coniglio con elastici. Questo metodo facilita la selezione dei punti di agopuntura sugli arti. I ricercatori devono tagliare il calzino in base al sito di agopuntura, ma la procedura è alquanto complessa⁶. Alcuni ricercatori hanno sviluppato un dispositivo di fissazione della moxibustione composto da tre parti: sede di fissaggio, clip di fissaggio e supporto per bastoncino di moxa. Questo dispositivo consente ai ricercatori di eseguire la moxibustione su più punti di agopuntura contemporaneamente mantenendo una temperatura relativamente costante. Tuttavia, lo stato fisso di questo metodo differisce in modo significativo dal trattamento clinico dell'uomo⁷. Avvolgere i ratti con un panno e sospenderli con dei morsetti può ridurre significativamente l'influenza della contenzione. Tuttavia, il panno sospeso deve essere tagliato in anticipo per esporre i punti di agopuntura, il che rende scomodo esporre il sito di trattamento⁸. Alcuni ricercatori usano cinghie, corde e una piccola giacca con una cinghia in velcro autobloccante per fissare i ratti su una copertura della gabbia simile a una rete. Il dispositivo offre bassi costi di produzione, elevata praticabilità e funzionamento semplice. Ma è necessaria più di una persona per completare il processo di contenzione⁹. Alcuni ricercatori costruiscono un cilindro che tiene il corpo con una rete metallica, fissano le zampe dei ratti con morsetti di fissaggio e fissano il collo usando un bastone. Questo metodo fornisce una solida moderazione. Usando questo metodo, i ricercatori possono operare meglio sui ratti perché i punti di agopuntura su tutto il corpo sono esposti. Il problema è che il cilindro potrebbe essere incompatibile con le dimensioni del ratto. Inoltre, questo metodo applica più stress rispetto ad altre tecniche, quindi i ratti possono essere più suscettibili all'asfissia¹⁰. Il metodo di fissazione ad alta piattaforma sfrutta la paura dell'altezza dei ratti. I ricercatori posizionano i ratti sul pedale della piattaforma alta a 50 cm dal suolo. I ratti rimangono in una posizione prona naturale senza la necessità di ulteriori restrizioni. Questo metodo consente di pungere la testa e la schiena dei ratti. Questo metodo simula autenticamente l'ambiente di trattamento, quindi i risultati sperimentali hanno un buon valore di riferimento. Poiché i ratti temono le altezze, il loro stato mentale diventa anormale quando vengono posti a tali altitudini. Ciò rende il metodo inadatto alla ricerca sulle malattie mentali e potrebbe influenzare i risultati sperimentali¹¹. Alcuni ricercatori utilizzano una piattaforma di ritenuta regolabile e cinghie per fissare i ratti, esponendo un'ampia area di trattamento. Tuttavia, la replica dello scenario clinico rimane impegnativa¹².

C'è un urgente bisogno di affrontare il problema che i metodi di fissazione non possono simulare accuratamente le condizioni di trattamento clinico. Abbiamo fatto ogni sforzo per replicare le condizioni del trattamento clinico umano. Il metodo descritto in questo articolo rientra nella categoria del metodo del bondage. L'attrezzatura utilizzata in questo metodo include una piattaforma di ritenuta e cinghie di contenzione, insieme a un panno di cotone per assistere nella procedura. L'attrezzatura è relativamente semplice da usare. Rispetto ad altri metodi, questo metodo espone meglio i punti di agopuntura sul dorso dei ratti e migliora l'efficienza del trattamento.

Per testare l'affidabilità del dispositivo, sono stati utilizzati un totale di 60 ratti per l'esperimento. Tutti i 60 ratti sono stati divisi in due gruppi, ciascuno contenente 30 ratti: il gruppo di elettroagopuntura e il gruppo di agopuntura calda. I ratti sono rimasti calmi durante il processo di trattamento e il loro movimento ha avuto un impatto minimo sulla procedura. Nel gruppo di elettroagopuntura, 22 ratti hanno completato il trattamento con calma senza difficoltà. Un totale di 8 ratti hanno lottato durante l'operazione e 6 hanno rimosso gli aghi. Un totale di 24 ratti nel gruppo di agopuntura calda sono rimasti calmi durante il trattamento. Gli altri 6 ratti hanno mostrato un comportamento di lotta, ma nessuno ha rimosso le palline di moxa. Questi ratti che lottavano potevano anche calmarsi dopo essere stati coperti e confortati. Alla fine, tutti i ratti hanno completato il trattamento con successo.

Protocollo

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (n. 82205287). I protocolli sperimentali utilizzati in questo studio sono stati esaminati e approvati dal Comitato etico per la sperimentazione e l'uso animale dell'Università di medicina cinese di Pechino (n. BUCM-2024052704-2223) prima di eseguire gli esperimenti. Tutte le procedure dimostrate devono essere approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali (IACUC).

I dettagli delle attrezzature utilizzate nello studio sono elencati nella Tabella dei Materiali. Il protocollo può essere suddiviso in quattro sezioni: preparazione dell'esperimento, processo di fissaggio, operazione di trattamento e smontaggio dell'apparecchiatura.

1. Preparazione dell'esperimento (Figura 1)

1. Preparare la piattaforma di ritenuta in plastica porosa. La piattaforma di ritenuta è lunga 500 mm, larga 300 mm e alta 5 mm. Il foro su di esso è di 7 mm di lunghezza e 3,2 mm di larghezza. La distanza tra due fori adiacenti è di 7 mm. Questa attrezzatura funge da piattaforma per la fissazione dei ratti.
2. Preparare le cinghie di ritenuta. Ogni cinghia di ritenuta misura 300 mm di lunghezza e 4,8 mm di larghezza. Le cinghie di ritenuta sono seghettate e presentano una fibbia sulla punta, che può essere bloccata dopo l'inserimento.
3. Tieni pronto un panno di cotone quadrato. Il panno quadrato in cotone misura 30 cm 30 cm. Usalo per bloccare la visuale degli animali da esperimento.
4. Preparare lo strumento per elettroagopuntura. Utilizzare questo dispositivo per eseguire procedure di elettroagopuntura.
5. Preparare gli aghi per agopuntura (0,25 mm di diametro e 25 mm di lunghezza).
6. Tieni a disposizione un paio di guanti in lattice da laboratorio. Questi guanti costituiscono la misura protettiva fondamentale dell'esperimento.
7. Tieni a disposizione un paio di guanti antitaglio, progettati per proteggere i ricercatori dai morsi di ratto durante l'esperimento.
8. Usa la moxa per creare palline di moxa con un diametro di 5 mm, che vengono utilizzate per la successiva terapia di moxibustione.
9. Per evitare scottature ai topi, tagliate delle carte quadrate di 2 cm e 2 cm.
10. Tenere la garza sterile pronta per essere applicata per avvolgere la coda del ratto, garantendo la conducibilità elettrica durante il trattamento di elettroagopuntura.
11. Preparazione prima della fissazione: Prima di maneggiare i ratti, indossare guanti in lattice da laboratorio e guanti antitaglio per evitare di essere morsi dai ratti.

Figura 1: Dispositivi necessari per il funzionamento. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

2. Processo di fissaggio

1. Infilare due cinghie di ritenuta attraverso la piattaforma di ritenuta. Inserire ciascuna cinghia attraverso due fori nella stessa fila, distanziando due fori, con le cinghie a quattro file di distanza l'una dall'altra. Questa spaziatura corrisponde al diametro del corpo del ratto, limitando il movimento laterale durante il trattamento (Figura 2). Regolare la distanza in base alla forma dei ratti e ai siti di trattamento secondo necessità.
2. Afferra la coda del topo con una mano. Il ratto si muoverà istintivamente in avanti (Figura 3A).
3. Posizionare il ratto all'ingresso del canale formato da due cinghie di ritenuta. Il ratto perforerà il canale da solo (Figura 3B).
4. Copri la testa del topo con un panno di cotone quadrato e usa la stessa mano per tenerlo al collo. Afferra la coda e gli arti posteriori del topo con un'altra mano. Questo metodo garantisce il mantenimento della postura del ratto (Figura 3C).
5. Usa la mano che tiene il lato della testa per premere delicatamente la testa e il collo del topo. Utilizzare l'altra mano per inserire la cinghia di ritenuta nella fibbia e stringerla. Assicurarsi che la cinghia di ritenuta si trovi sul lato della coda della testa e degli arti anteriori per limitare il movimento della testa (Figura 3D, E).
6. Tieni la coda del topo con una mano. Assicurarsi che la cinghia di ritenuta si trovi davanti agli arti posteriori del ratto. Quindi stringere la fibbia per limitare il movimento della vita (Figura 3F). Il ratto trattenuto è mostrato nella Figura 3G.
7. Quando si esegue l'agopuntura sui ratti, questo metodo di fissazione garantisce stabilità durante il trattamento. Se il topo continua a lottare gravemente, coprigli delicatamente la testa con il panno. Proteggere il suo intero campo visivo e tenerlo in un ambiente buio può calmare il topo.
   1. Scegliete DU20, BL17 e BL23 come esempi. La selezione di questa distanza di fissaggio espone meglio i punti di agopuntura: DU20 è al centro della testa, BL17 è tra le due cinghie di ritenuta e BL23 è sul lato della coda della cinghia di contenzione, stringendo la vita del ratto.
   2. Girare l'ago nei punti di agopuntura (Figura 4A). Il ratto che completa il trattamento di agopuntura è mostrato nella Figura 4B, C.

Figura 2: Montaggio della piattaforma di ritenuta e della cinghia di ritenuta. La piattaforma di ritenuta con le cinghie di ritenuta inserite è mostrata in figura. Ogni cinghia viene inserita tramite due fori nella stessa fila, distanziando due fori, con le cinghie a quattro file di distanza l'una dall'altra. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 3: Il processo di fissazione di un ratto. (A) Tenere la coda del topo. (B) Lascia che il topo fugga in avanti nel canale. (C) Coprire la testa del topo con un panno di cotone. Premi il suo collo e afferra la coda e gli arti posteriori. (D,E) Stringere la cinghia sul retro. (F,G) Stringere la cinghia in vita. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figura 4: Operazione di agopuntura su un ratto. DU20, BL17 e BL23 sono stati scelti come punti di agopuntura per questa procedura di agopuntura. (A) Girare l'ago nei punti di agopuntura. (B,C) Il ratto che completa il trattamento è mostrato qui. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

3. Trattamento di elettroagopuntura

1. Collegare lo strumento di elettroagopuntura dopo aver completato l'agopuntura. Accendere il dispositivo di elettroagopuntura, premere il pulsante a onda continua per selezionare la forma di stimolazione elettrica e ruotare la manopola per regolare l'intensità di corrente a 1 mA e la frequenza a 2 Hz (Figura 5A).
2. Prendendo come esempio DU20, BL17 e BL23, collegare tre coppie di elettrodi come mostrato nella Figura 5. In particolare, collegare BL17 e BL23 sullo stesso lato di una coppia (Figura 5B, C). Collegare la coda, avvolta con una garza imbevuta di soluzione fisiologica, al DU20 sulla testa (Figura 5D, E). La direzione del flusso di corrente è coerente tra tutte e tre le coppie di elettrodi.
3. Ruotare la manopola di impostazione del tempo per impostare la durata del trattamento su 15 min.

Figura 5: Operazione di elettroagopuntura su un ratto. (A) Impostare il parametro su onda continua e regolare l'intensità e la frequenza della corrente. (B,C) Accoppia BL17 e BL23 sullo stesso lato. (D,E) Avvolgere la coda con una garza imbevuta di soluzione salina e collegarla a DU20. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

4. Trattamento di agopuntura caldo

1. Preparare questi articoli se è necessario un trattamento di agopuntura a caldo: moxa, ago per agopuntura (0,25 mm × 25 mm, lo stesso utilizzato in precedenza) e diversi fogli quadrati di carta. Inoltre, prepara alcune palline di moxa in anticipo prima dell'inizio del trattamento (Figura 1).
2. Prendi un foglio di carta quadrato e usa con attenzione un ago per forare il punto centrale della carta (Figura 6A). Successivamente, inserire l'ago nell'agopunto designato (Figura 6B).
   NOTA: A scopo illustrativo, questo studio ha selezionato l'agopunto BL23.
3. Posizionare con cura le palline di moxa sull'ago, quindi accenderle (Figura 6C-E).

Figura 6: Operazione di agopuntura a caldo su un ratto. (A) Prendere un foglio quadrato e perforarne il centro con un ago. (B) Inserire gli aghi nei punti di agopuntura. (C) Metti le palline di moxa sugli aghi. (D,E) Il ratto che completa il trattamento è mostrato qui. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

5. Smontaggio dell'attrezzatura

1. Smontaggio dell'apparecchiatura per elettroagopuntura
   1. Al termine del trattamento di elettroagopuntura, spegnere lo strumento di elettroagopuntura. Quindi, rilasciare con cautela la clip dell'elettrodo dagli aghi per agopuntura. Infine, estrarre delicatamente gli aghi per agopuntura dall'area da trattare.
2. Smontaggio dell'attrezzatura calda per agopuntura
   1. Dopo il trattamento di agopuntura calda, rimuovere con cura la cenere delle palline di moxa e smaltirla mettendola in acqua. Quindi ritirare delicatamente gli aghi e rimuovere eventuali fogli attaccati.
3. Smontaggio dell'attrezzatura di fissaggio
   1. Copri la testa del topo con un panno di cotone quadrato e contemporaneamente allenta le cinghie di ritenuta. Allentare la cinghia di ritenuta, stringendo inizialmente la vita del topo. Quindi, afferra saldamente gli arti posteriori e l'area dell'anca del ratto con una mano.
   2. Rilascia la cinghia che si stringe attorno al collo del topo con l'altra mano, quindi estrai delicatamente il ratto dalla cinghia di ritenuta tenendolo per la coda.

Risultati

Per valutare l'efficacia del metodo di fissazione, abbiamo condotto uno studio su un totale di 60 ratti, che sono stati divisi in due gruppi: 30 ratti nel gruppo di elettroagopuntura e 30 ratti nel gruppo di agopuntura calda. Le operazioni di trattamento includevano rispettivamente l'elettroagopuntura e l'agopuntura a caldo.

Dopo aver inserito gli aghi nei punti di agopuntura, l'agopuntore eseguiva manipolazioni di sollevamento, spinta e rotazione su ciascun a...

Discussione

I ratti tendono ad abitare ambienti bui. Si sentono sicuri quando sono al riparo e rispondono con calma agli stimoli, mostrando livelli di stress più bassi. Il metodo qui descritto sfrutta queste caratteristiche del ratto. I vantaggi di questo metodo di fissazione possono essere riassunti come segue: (i) Questo metodo può ridurre al minimo la risposta allo stress e il dolore sperimentati dagli animali da esperimento. Si allinea con i principi delle 3R dell'etica animale, vale a dire Ridu...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Aghi per agopuntura	Beijing ZhongYan TaiHe Medical Instrument Co., Ltd.	20222200133	Le specifiche degli aghi per agopuntura sono 0,25 mm di diametro e 25 mm di lunghezza.
Guanti antitaglio	Fabbrica di prodotti per la protezione del lavoro di Lvdazhou nel distretto di Lanshan, nella città di Linyi H0315103941		Progettato per proteggere i ricercatori dai morsi di ratto durante l'esperimento.
Strumento di elettroagopuntura	Suzhou Medical Appliance Factory Ltd.	20172200675	Questo dispositivo viene utilizzato per eseguire procedure di elettroagopuntura.
Guanti in lattice da laboratorio	Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd.	268237719221	Questi guanti costituiscono la misura protettiva fondamentale dell'esperimento.
Moxa	Beijing Tongrentang Xing'an Health Technology Co., Ltd.	152200000000613	moxa funge da materiale per la produzione di palline di moxa con diametro di 5 mm, che vengono utilizzate per la successiva terapia di moxibustione.
Piattaforma di ritenuta in plastica porosa	Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd.	341124000005877	La piattaforma di ritenuta è lunga 500 mm, larga 300 mm e alta 5 mm. I fori su di esso sono di 7 mm di lunghezza e 3,2 mm di larghezza. La distanza tra due fori adiacenti è di 7 mm. Questa attrezzatura funge da piattaforma per la fissazione dei ratti.
Cinghie di ritenuta	Zhejiang Litai Plastic Co., Ltd.	331003000001553	Ogni cinghia di ritenuta misura 300 mm di lunghezza e 4,8 mm di larghezza. La cinghia di ritenuta è seghettata e presenta una fibbia sulla punta, che può essere bloccata dopo l'inserimento.
Panno di cotone quadrato	MUJI (SHANGHAI) Company Limited WYLP20241105_1		Il panno di cotone quadrato misura 30 cm e 30 cm. Viene utilizzato per bloccare la vista degli animali da esperimento.
Carte quadrate	DELI Group Co., Ltd.	7752-1114	Per evitare scottature dei ratti, i ricercatori tagliano alcuni fogli quadrati che specificano di misurare 2 cm e acuti; 2 cm.
Garza sterile	Jiangxi Zhonggan Medical Devices Co., Ltd.	20172140084	La garza sterile viene applicata per avvolgere la coda del ratto, garantendo la conducibilità elettrica durante il trattamento di elettroagopuntura.