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Articolo metodologico

Sistema di ritenuta animale non avversivo che consente la registrazione del riflesso optomotorio negli scoiattoli di terra

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DOI:

10.3791/68335

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25 luglio 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Retinal Neurophysiology Section, National Eye Institute, National Institutes of Health, 2Department of Ophthalmology, Faculty of Medicine, University of Murcia and Biomedical Research Institute of Murcia (IMIB-Pascual Parrilla), 3Striatech GmbH

In questo articolo

Sommario

Il protocollo descrive come misurare la risposta optomotoria negli scoiattoli di terra a 13 linee, una specie dominante a cono con caratteristiche retiniche simili alla macula umana. Il design della piattaforma migliora la maneggevolezza e riduce l'ansia, migliorando la capacità dell'animale di rimanere sulla piattaforma rialzata, consentendo una valutazione non invasiva dei cambiamenti nella funzione visiva.

Abstract

Il riflesso optomotorio (OMR) fornisce una valutazione comportamentale della sensibilità al contrasto e dell'acuità visiva di un animale. I topi o i ratti vengono in genere posizionati direttamente a mano su una piccola piattaforma circolare; Tuttavia, maneggiare animali in questo modo può stimolare lo stress e l'ansia, che introducono fattori confondenti nell'interpretazione dei dati. È stato dimostrato che i metodi di manipolazione non avversivi, come raccogliere topi o ratti in un tunnel/tubo familiare, possono ridurre l'ansia. Ciò è di particolare interesse negli studi in cui gli animali mostrano un maggiore stress, iperattività o disfunzione motoria, con conseguente incapacità di rimanere sulla piattaforma. Un team guidato dai dottori Kiyoharu, J. Miyagishima e Francisco M. Nadal-Nicolás ha riprogettato la piattaforma OMR convenzionale per fornire un contenimento semichiuso. Ciò rende possibile per la prima volta registrare il riflesso optomotorio nello scoiattolo di terra a 13 linee, che è uno dei pochi mammiferi in grado di vedere i colori. Ha una striatura visiva con un'alta densità di coni simile alla macula umana, fornendo un modello attraente per lo studio degli effetti sul sistema visivo dei coni.

Introduzione

Gli scoiattoli di terra offrono un modello unico e prezioso per lo studio della funzione visiva grazie al loro stile di vita diurno e alle retine dominate dai coni, che imitano da vicino la visione umana1. Questo, insieme ai vantaggi pratici del loro utilizzo (dimensioni ridotte, minori costi di allevamento) rispetto ai primati, li rende un modello ideale per la ricerca traslazionale su lesioni retiniche, malattie o effetti collaterali oculari dei farmaci sui cambiamenti della visione dei colori 2,3,4,5,6. La ricerca preclinica sulle malattie della retina si basa sulla capacità di valutare se un animale può vedere. Il riflesso optomotorio (OMR) offre un metodo clinicamente rilevante per valutare la funzione visiva negli animali senza necessità di anestesia, consentendo una misurazione accurata dell'acuità visiva 7,8. In questo test, l'animale segue uno schema a strisce rotanti con lo sguardo. Le strisce rotanti inducono la percezione del movimento globale nell'ambiente, innescando un movimento involontario della testa - l'OMR. Questo riflesso serve a stabilizzare visivamente l'ambiente e può essere utilizzato per quantificare la capacità di vedere di un animale regolando in modo incrementale la frequenza spaziale o il contrasto dello stimolo. Man mano che lo stimolo diventa più difficile da percepire, l'OMR alla fine non viene attivato, consentendo la determinazione dell'acuità visiva o della soglia di contrasto. Il vantaggio dell'OMR è che si tratta di un reflex. Pertanto, non è richiesta alcuna formazione e non è necessario fissare la testa o eseguire un intervento chirurgico. Il riflesso è presente anche negli animali molto giovani (all'apertura degli occhi)9,10, rendendo possibile lo studio delle malattie ad esordio precoce. Inoltre, poiché non è invasivo, è possibile effettuare misurazioni longitudinali che consentono di monitorare la progressione della malattia.

La maggior parte dei test OMR viene eseguita utilizzando sistemi personalizzati o commerciali che consistono in una piattaforma rialzata in cui viene posizionato l'animale, circondata da quattro schermi che mostrano motivi a strisce rotanti in bianco e nero. Le strisce si muovono in una direzione (in senso orario o antiorario), creando uno stimolo di movimento che suscita una risposta di tracciamento visivo da parte dell'animale 10,11,12,13,14,15,16. Una telecamera è montata sopra l'arena di prova per catturare i movimenti della testa dell'animale evocati visivamente in risposta allo stimolo rotante. Questi movimenti della testa vengono tracciati e analizzati per determinare la capacità dell'animale di percepire e rispondere al movimento, valutando così la sua acuità visiva.

Sebbene l'OMR sia abitualmente utilizzato nei topi e nei ratti, la misurazione della risposta optomotoria negli scoiattoli di terra a 13 linee è stata impegnativa a causa della loro iperattività e dell'incapacità di rimanere su piattaforme elevate, anche con un precedente condizionamento. Per aggirare questo problema, abbiamo sviluppato una piattaforma che fornisce un semi-contenimento, facilitando il trasferimento degli animali nell'arena. L'obiettivo di questo metodo è ridurre il tempo necessario agli animali per adattarsi al contesto sperimentale, consentendo la registrazione degli animali che mostrano un comportamento non collaborativo o hanno difficoltà a rimanere sulla piattaforma e migliorando l'inclusione degli animali negli studi. Abbiamo anche definito un protocollo per misurare l'acuità visiva negli scoiattoli utilizzando un'impostazione di contrasto definita sperimentalmente e abbiamo regolato le impostazioni della fotocamera per migliorare i risultati di imaging, consentendo l'analisi e il tracciamento automatizzati.

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Protocollo

Le procedure che coinvolgono gli animali sono state condotte in conformità con le leggi degli Stati Uniti e i regolamenti del Dipartimento dell'Agricoltura. Tutti gli esperimenti con gli animali sono stati condotti secondo i protocolli approvati dall'Animal and Care and Use Committee del National Eye Institute presso il National Institutes of Health. I maschi e le femmine di scoiattoli di terra a 13 linee (età 6-8 mesi) utilizzati in questo studio sono stati acquistati dalla colonia di scoiattoli Oshkosh dell'Università del Wisconsin. I topi (rd10: 1 mese, CX3CR1GFP/+: 6,5 mesi) utilizzati in questo studio sono stati allevati nella nostra struttura per animali. Gli animali e le loro gabbie sono stati selezionati in modo casuale e assegnati a gruppi sperimentali.

1. Preparazione della piattaforma prototipo e del tunnel di movimentazione modificato

NOTA: Le piattaforme piatte rotonde sono comunemente impiegate nei sistemi progettati per misurare la risposta optomotoria13. Tuttavia, i modelli di roditori iperattivi, come gli scoiattoli, spesso faticano a mantenere la stabilità su queste piattaforme. Questo design fornisce uno spazio semi-chiuso, che aiuta gli animali ad abituarsi rapidamente e riduce i comportamenti ansiosi. Questo miglioramento migliora la capacità di concentrazione dell'animale e riduce al minimo i casi di squilibrio o cadute durante le registrazioni.

  1. Nei software di disegno CAD (ad esempio, OpenSCAD o FreeCAD), progettare la piattaforma (grigio) e l'involucro (rosso) come mostrato nella Figura 1.
    1. Assicurarsi che le dimensioni chiave per la piattaforma dello scoiattolo siano mantenute come la lunghezza e la larghezza (L x P): 129 mm x 81 mm, lo spessore: 7 mm e l'altezza del muro che si estende lungo il perimetro: 8 mm. Utilizzare il file di documentazione CAD standard gratuito fornito per la piattaforma prototipo (scoiattolo) utilizzata in questo studio di prova di concetto (File di codifica supplementare 1).
    2. Assicurarsi che le dimensioni principali per l'involucro superiore rimovibile (guardando dall'alto verso il basso) siano mantenute come la lunghezza (119,5 cm) e la larghezza (76,2 cm), l'altezza dei lati (50,8 mm) e lo spessore della parte (3 mm). Utilizza il file di documento CAD standard gratuito fornito per replicare l'involucro superiore rimovibile (scoiattolo) impiegato in questo studio proof-of-concept (Supplementary Coding File 2).
  2. Regolare il diametro del foro passante alla base della piattaforma secondo necessità per adattarsi al piedistallo utilizzato per sollevare la piattaforma. Il diametro nella foto è di 40 mm.
  3. Stampa la piattaforma utilizzando un filamento bianco opaco. Ciò fornisce il massimo contrasto per la telecamera, consentendo al software di tracciamento di rilevare correttamente il contorno dell'animale sulla piattaforma.
  4. Stampa l'involucro superiore rimovibile con filamento scuro opaco (ad es. rosso). Ciò fornisce un senso di riparo per i roditori, che facilita la guida all'interno del tunnel prima che vengano sollevati e trasferiti nell'arena.
  5. Chiedi a un macchinista di tagliare il tubo quadrato trasparente estruso in acrilico utilizzando una sega da banco in modo che l'estremità lunga sia lunga ~ 101,6 mm. Assicurati di utilizzare occhiali protettivi e un bastoncino di spinta per guidare l'acrilico attraverso la lama mantenendo le mani al sicuro da potenziali lesioni.
  6. Utilizzando la sega da banco o un utensile rotante portatile dotato di una mola da taglio abrasiva, rimuovere una delle facce rettangolari lunghe. Questo crea una parte superiore aperta attraverso la quale la telecamera montata sopra avrà una visione senza ostacoli della posizione dell'animale e dei movimenti della testa.
  7. Pulire tutti i bordi con una lima a mano o carta vetrata. Assembla il tunnel di movimentazione modificato utilizzando il tubo quadrato trasparente estruso in acrilico tagliato a misura con l'involucro superiore rimovibile stampato in 3D posizionando l'involucro sopra la faccia aperta.

2. Impostazione dell'arena OMR

  1. Disinfettare la piattaforma e il gruppo dell'involucro del tubo quadrato con un detergente/disinfettante prima e tra gli animali per rimuovere i segnali olfattivi indesiderati.
    NOTA: Sebbene i guanti di pelle vengano utilizzati per maneggiare gli animali ed entrare in contatto diretto con loro, non vengono indossati durante le registrazioni e non causano effetti confondenti duraturi o osservabili.
  2. Strappare un piccolo pezzo di carta assorbente di circa 50 mm x 50 mm e piegarlo per coprire la superficie superiore del piedistallo. Posiziona la piattaforma stampata in 3D sul piedistallo (alto 14 pollici) con il pezzo di carta assorbente in posizione.
    NOTA: La carta regola l'adattamento a pressione della piattaforma, impedisce movimenti involontari, fornisce uno sfondo bianco uniforme per l'imaging (se la superficie del piedistallo non è bianca) e funge da strato assorbente nel caso in cui l'animale urina durante la registrazione, impedendo che la piattaforma diventi scivolosa.
  3. Indossando guanti da lavoro in pelle, guidare delicatamente l'animale nel gruppo del recinto del tubo quadrato.
  4. Trasferire l'animale nell'arena posizionando il gruppo di recinzione sulla piattaforma (Figura 1J).
  5. Staccare con cautela l'involucro superiore rimovibile lasciando l'animale nel tubo quadrato trasparente estruso in acrilico sulla piattaforma. Chiudi la porta al sistema OMR

3. Impostazione dei parametri del software OMR

NOTA: Il sistema OMR raffigurato utilizza una telecamera industriale compatta dotata di un sensore CMOS da 1/3" sensibile a IR con un otturatore globale a 25 fotogrammi al secondo (fps). La telecamera è dotata di un obiettivo grandangolare F1.6, che consente una visione completa dall'alto dell'arena. I test preliminari dell'acuità visiva condotti sugli scoiattoli utilizzando l'impostazione standard del contrasto al 100% hanno rivelato che l'acuità visiva degli scoiattoli superava i limiti di risoluzione dell'hardware. Gli schermi In-Plane Switching Full HD da 23,8" utilizzati nella configurazione hanno una risoluzione di soli 1920 pixel di larghezza e il software è quindi codificato con una frequenza spaziale massima di 2 cyc/°. Per confronto, l'acuità visiva dei topi C57Bl/6 è di circa 0,3-0,5 cyc/°. A 2 cyc/°, ogni striscia ha una larghezza media di 5,3 pixel. Con una velocità di rotazione di 12°/s e una frequenza fotogrammi di 60 fotogrammi al secondo, il pattern si sposta di 0,2° per fotogramma, equivalenti a 4,2 pixel per fotogramma, supponendo una velocità di pixel uniforme. A frequenze spaziali vicine a 2 cyc/°, il pattern a strisce si avvicina al limite di risoluzione in cui può verificarsi l'aliasing, facendo apparire il pattern come se si stesse muovendo all'indietro. Per evitare questo artefatto, il software è codificato per limitare la frequenza spaziale a 2 cyc/°.

Così, per gli scoiattoli abbiamo ideato un protocollo in cui eseguiamo il test di acuità ma con un contrasto molto più basso. Abbiamo selezionato un'impostazione di contrasto (12,78%) in cui gli scoiattoli non erano in grado di vedere il motivo a strisce a 2 cicli/°.

  1. Nel pannello video in diretta, assicurati che l'animale si stia adattando bene al nuovo ambiente e stia iniziando a muoversi meno e a calmarsi.
    1. A 2 cyc/°, ogni striscia ha una larghezza media di 5,3 pixel. Impostare la velocità di rotazione a 12°/s e un frame rate di 60 fotogrammi al secondo; Il pattern si sposta di 0,2° per fotogramma, equivalenti a 4,2 pixel per fotogramma, supponendo una velocità di pixel uniforme. Impostare le frequenze spaziali vicino a 2 cyc/° in modo che il motivo a strisce si avvicini al limite di risoluzione in cui può verificarsi l'aliasing, facendo apparire il modello come se si stesse muovendo all'indietro. Per evitare questo artefatto, codificare il software in modo che limiti la frequenza spaziale a 2 cyc/°.
      NOTA: Per gli scoiattoli, abbiamo ideato un protocollo in cui eseguiamo il test di acuità ma con un contrasto molto più basso. Abbiamo selezionato un'impostazione di contrasto (12,78%) in cui gli scoiattoli non erano in grado di vedere il motivo a strisce a 2 cicli/°.
  2. Scarica il file di codifica supplementare 3. Apri il software OptoDrum.
  3. Nella scheda Impostazioni, fai clic su Impostazioni di importazione. Caricare il file di codifica supplementare 3.
  4. Nella scheda Impostazioni, imposta l'offset della soglia di sfondo su 17, la dimensione minima dell'animale [px] su 30 e la larghezza massima della coda [% della dimensione] su 1.
  5. Nelle impostazioni della fotocamera, lascia deselezionata l'opzione Inverti video e Controllo manuale della videocamera e disattiva Luce IR.
  6. Allargare la posizione e le dimensioni della regione di interesse per l'inseguimento per accogliere lo scoiattolo se si sporge al di fuori dell'apertura del tubo. I valori suggeriti sono Posizione: X: 359, Y: 237, Taglia: X: 570, Y: 455. Non estendere il ROI oltre la schermata Stimoli, in quanto può portare a falsi positivi.
  7. Selezionare Configurazione sessione dal pannello superiore (Figura 2A).
    1. Per la scala, impostare l'acuità spaziale stimata come segue. Impostare l'acuità attesa a 1.800 cyc/° (648 cicli); impostare la risoluzione ottimale dello stimolo a 0,5 CyC/° (180 cicli); Impostare la risoluzione di misurazione su 0,100 Cyc/° (36 cicli).
    2. Per la scala, impostare il numero di conferme richieste come segue. Impostare a 3 per le prove fallite; impostato per le prove di successo a 2.
      NOTA: Il numero di prove riuscite può essere aumentato per ridurre ulteriormente il verificarsi di false conferme positive. Tuttavia, con l'uso di questa piattaforma e del tunnel di gestione modificato, il tasso di errore rimane accettabilmente basso. Ciò è dovuto principalmente alla relativa immobilità degli scoiattoli e alla scarsa frequenza dei movimenti rotatori della testa, a parte quelli suscitati dagli stimoli evocati visivamente.
  8. Nella scheda Scala (Figura 2B), impostare l'antialiasing su larghezza a 3 px e lasciare la sinusoidale deselezionata.
  9. Per i criteri di test, bloccare il contrasto a 12,78% e bloccare la velocità di rotazione a 12 °/s.
    NOTA: Con un'impostazione di contrasto del 12,78%, l'acuità spaziale degli scoiattoli è limitata a circa 1,5-1,8 cyc/°. Non superando più le impostazioni hardware massime, questa configurazione consente la valutazione dell'acuità spaziale in risposta a malattie o lesioni.
  10. Una volta bloccati due dei tre parametri, l'opzione Imposta automaticamente i parametri diventa attiva (non più disattivata). Seleziona la casella accanto a Imposta automaticamente i parametri.
  11. Impostare il senso di rotazione a seconda che si preveda una disabilità visiva in uno o entrambi gli occhi. Si noti che per ogni occhio, solo il movimento nella direzione temporale-nasale suscita il tracciamento. Di conseguenza, valutare la lesione all'occhio sinistro utilizzando la stimolazione in senso orario (CW), poiché ci si aspetta che la stimolazione in senso antiorario (CCW) susciti risposte normali. Per la degenerazione o la lesione prevista in entrambi gli occhi, può essere utilizzata la rotazione dello stimolo in entrambe le direzioni.
  12. Clicca su Inizia prova per iniziare la presentazione dello stimolo. La telecamera sopra inizierà a registrare e tracciare i movimenti della testa degli animali. Durante la presentazione dello stimolo, fare clic sulla scheda Analisi per visualizzare in tempo reale le velocità angolari (rotazione della testina), la qualità della traccia e i parametri del punteggio. Al termine di ogni presentazione di stimolo, il software determinerà automaticamente se avanzare (indicato dal segno di spunta verde) al Cyc/° successivo, ripetere la prova o ridurre il Cyc/° (indicato dalla X rossa).
  13. Durante la registrazione, se il software di tracciamento capovolge in modo errato i marcatori del muso (rosso) e della coda (verde), premere Ctrl sulla tastiera per consentire l'override manuale per correggere l'orientamento testa-coda.
  14. Se l'animale cade dalla piattaforma, metti in pausa la prova premendo Metti in pausa la valutazione o facendo clic sulla barra spaziatrice. Rimuovere il tunnel di movimentazione dalla piattaforma e utilizzarlo con il coperchio per una manipolazione sicura dell'animale per riposizionarlo sulla piattaforma. Una volta che l'animale è pronto, fai clic su Riprendi valutazione per continuare la prova.
  15. Una volta completate tutte le prove, fai clic sulla scheda Riepilogo per mostrare le prove riuscite in verde e le prove non riuscite in rosso. La prova cerchiata in verde indica la soglia dell'acuità visiva per lo scoiattolo utilizzando il contrasto del 12,78%. Rimetti con cura l'animale nella sua gabbia di casa.

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Risultati

L'OMR è considerato un successo una volta che il software identifica la soglia visiva determinata dalle prestazioni dell'animale nelle prove di discriminazione della frequenza spaziale. In particolare, la soglia è definita come segue: due prove di successo a una data frequenza spaziale (misurata in cyc/°), seguite da tre prove fallite alla frequenza spaziale successiva più alta. L'OMR è stato eseguito su scoiattoli di terra a 13 linee (6-8 mesi di età) utilizzando la piattaforma rotonda piatta standard (

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Discussione

Passaggi critici

Facilitare l'ingresso nel tunnel - Un punto importante da considerare è che gli scoiattoli richiedono che il gruppo di recinzione stampato in 3D funga da coperchio temporaneo per il tunnel rettangolare in acrilico; Senza di esso, non entreranno facilmente. Nella nostra struttura, gli scoiattoli di terra a 13 linee sono regolarmente alloggiati con un cilindro rosso delle dimensioni di un topo (Lunghezza: 15,24 cm, Diametro: 7,6...

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Dichiarazioni

Kiyoharu Miyagishima, Francisco Nadal-Nicolás, John Ball e Wei Li dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti. Thomas Munch è il proprietario e direttore della ricerca e sviluppo di Striatech GmbH. Boris Benkner è il fondatore e amministratore delegato di Striatech GmbH.

Ringraziamenti

Questa ricerca è stata supportata [in parte] dal Programma di ricerca intramurale del NIH, National Eye Institute. Questo lavoro è stato sostenuto anche dall'Ufficio dell'Assistente Segretario alla Difesa per gli Affari Sanitari e dalla Defense Health Agency J9, Direzione Ricerca e Sviluppo, attraverso il Vision Research Program nell'ambito del Premio n. (CDMRPL-18-0-VR180205). Le opinioni, le interpretazioni, le conclusioni e le raccomandazioni sono quelle dell'autore e non sono necessariamente approvate dal Dipartimento della Difesa. Gli autori ringraziano il Dr. Wenxin Ma per aver fornito i topi rd10 e CX3CR1GFP/+ , il Dr. Haohua Qian (Visual Function Core, NEI, NIH) per la discussione approfondita e l'assistenza tecnica con l'OMR, l'officina meccanica NIMH / NINDS / NICHD per l'aiuto con la fabbricazione dei componenti e Charles King (NIH Library) per l'assistenza nella stampa 3D.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Kit di utensili rotanti a batteria agli ioni di litio da 12 V MaxDremel 8220F0138220JAPer tagliare e lucidare il tubo quadrato acrilico.
https://www.dremel.com/us/en/p/8220-1-28-f0138220aa
6-0 SUTURA IN VICRYL RIVESTITO (POLYGLACTIN 910)EthiconJ670GPer suturare la palpebra.
https://www.ethicon.com/na/epc/code/j670g?lang=en-default
Tubo quadrato acrilico incolore trasparente (2" x 12")Centro Materie Plastiche del CanaleRT-300161Tunnel rettangolare trasparente (per mouse).
https://www.canalplastic.com/products/clear-colorless-acrylic-square-tube
Tubo quadrato acrilico incolore trasparente (3" x 12")Centro Materie Plastiche del CanaleRT-300168Tunnel rettangolare trasparente (per scoiattolo).
https://www.canalplastic.com/products/clear-colorless-acrylic-square-tube
DREMEL EZ SpeedClic: Dischi da taglio in plasticaDremelSC476Per il taglio del tubo quadrato in acrilico
Stampante 3D F270StratasysPer stampare modelli 3D di livello ingegneristico delle piattaforme.
https://support.stratasys.com/en/printers/fdm-legacy/uprint
Fluriso (isoflurano)VetOne 502017Anestesia generale. Liquido per inalazione.
http://vetone.net/Default/GetFile?id=7dda0c60-45fa-e711-bf2e-0024e8785118
FreeCAD 1.0 Modellatore 3D parametrico open source
Software Igor Pro versione 6.3.7.2WaveMetrics, IncPer tracciare i grafici. https://www.wavemetrics.com/
Maschere per anestesia a basso profilo per vaporizzatori tradizionali
  per SomnoFlo. Extra Large (animali oltre i 300 g) 		Società scientifica KentSOMNO-0804Per fornire anestesia generale.
https://www.kentscientific.com/products/low-profile-anesthesia-masks-for-somnosuite/
MakerBot Print per Windows versione 4.10.1.2056Industrie MakerBot, LLCSoftware per l'orientamento dei pezzi da stampare
Stampante 3D desktop MakerBot Replicator (5a generazione)Industrie MakerBot, LLCMP05825Per la stampa 3D di versioni prototipo delle piattaforme.
https://www.rnd-tech.com/product/makerbot-replicator-desktop-3d-printer-5th-gen/
Microsoft ExcelValentinaSoftware per fogli di calcolo per analizzare i dati. microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel
Guanti da lavoro multiuso in pelleSteiner IndustriesSPC02Per gestire gli scoiattoli.
https://www.steinerindustries.com/leather-palm/product/steiner-spc02-leather-palm-work-glove
OptoDrum PlusSTRIA. TECHDispositivo commerciale per la misurazione del riflesso optomotorio (acuità visiva e sensibilità al contrasto) https://stria.tech/products/optodrum/ 
Software OptoDrum versione 1.7.3STRIA. TECHSoftware per l'esecuzione di misure automatizzate del riflesso optomotorio.
Peroxigard pronto all'uso (detergente/disinfettante) PeroxigardPRTU242101Per pulire/disinfettare la piattaforma e il tubo quadrato in acrilico tra gli esperimenti.
https://peroxigard.com/product-information/rtu/
Macchina per anestesia Pureline M6000
con concentratore di O2		Fornitura veterinaria Penn, Inc.SUPM6000Per anestesia animale.
https://www.pennvet.com/customer/portal/catalog/home?urile=wcm:path%3APennVet+Catalog/Product+Catalog/SUPM6000/Pureline+M6000+Anesthesia+Mach+w_O2+Conc
Stampante 3D uPrint SE PlusStratasysPer stampare modelli 3D di livello ingegneristico delle piattaforme.
https://www.makerbot.com/makerbot-print/
Filamento PLA MakerBot bianco opaco, bobina grande
per Replicator+ (0,9 kg, 2 libbre)		Industrie MakerBot, LLCMP05780Filamento per stampare in 3D le piattaforme.
https://store.ultimaker.com/3d-printer-materials/replicator-series-materials/makerbot-pla-material-large-spool-for-replicator
Trattamento farmacologico
Neomicina e polimixina B solfati
e unguento oftalmico di zinco bacitracina, USP		Bausch & LombRX-0069Triplo antibiotico oftalmico per prevenire le infezioni oculari
Proparacaina cloridrato 0,5%Akorn17478-263-12Anestetico locale per instillazione oftalmica

Riferimenti

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