Articolo metodologico

Identificazione rapida di Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis e Ureaplasma urealyticum mediante saggio a flusso laterale di amplificazione dell'RNA

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DOI:

10.3791/68413

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20 giugno 2025

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1The First People's Hospital of Foshan

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo che dimostra il saggio a flusso laterale di amplificazione dell'RNA e valutiamo l'efficacia per rilevare rapidamente Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis e Ureaplasmaurealyticum.

Abstract

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (CT) e Ureaplasma urealyticum (UU) sono patogeni comuni associati alle malattie sessualmente trasmissibili (MST). NG è l'agente eziologico della gonorrea, che può provocare vari disturbi del sistema genito-urinario, tra cui epididimite, prostatite, cervicite e infertilità. La TC è un microrganismo responsabile dell'uretrite non gonococcica e della malattia infiammatoria pelvica. L'UU è associata a uretrite non gonococcica, cervicite, prostatite e infertilità. Le attuali tecnologie molecolari per l'analisi di NG, CT e UU sono spesso complesse e richiedono molto tempo. I test molecolari rapidi per questi agenti patogeni possono facilitare la diagnosi precoce delle malattie sessualmente trasmissibili. Il saggio a flusso laterale di amplificazione dell'RNA (RGT) è un metodo che non richiede l'estrazione dell'acido nucleico. In questo processo, i campioni vengono lisati per rilasciare frammenti di acido nucleico, che vengono poi amplificati attraverso la trascrizione inversa e la trascrizione. Il prodotto di RNA amplificato viene riconosciuto e catturato da sonde specifiche, formando un complesso sonda di rilevamento RNA-sonda d'oro che può essere immobilizzato su una membrana di nitrocellulosa tramite flusso laterale per produrre bande visibili. L'intera procedura richiede meno di 1 ora. Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare l'efficacia della RGT per il rilevamento rapido di NG, TC e UU. Sono stati inclusi un totale di 1.416 campioni. La consistenza di NG, CT e UU quando analizzati mediante RGT rispetto al metodo di sondaggio della fluorescenza della reazione a catena della polimerasi (PCR) è stata rispettivamente del 99,03% (307/310), 99,38% (159/160) e 99,02% (303/306). La consistenza di NG, CT e UU quando analizzati mediante RGT rispetto al sequenziamento genico è stata rispettivamente del 99,17% (238/240), del 98,95% (188/190) e del 98,30% (173/176). Rispetto al metodo di coltura di isolamento dei patogeni, i tassi di rilevamento per i saggi NG, CT e UU sono stati del 100,00% (9/9, 17/17, 8/8). L'elevata sensibilità e specificità, la facilità d'uso e i tempi ridotti rendono questo test ideale per la rilevazione rapida e accurata di NG, CT e UU.

Introduzione

Le infezioni sessualmente trasmissibili (IST) rappresentano sfide significative per la salute pubblica globale, con conseguente grave morbilità e mortalità genitale e riproduttiva1. Neisseria gonorrhoeae (NG) è l'agente eziologico della gonorrea, con circa 87 milioni di nuovi casi segnalati ogni anno in tutto il mondo2. Questo patogeno induce principalmente l'infiammazione invadendo l'epitelio colonnare del tratto urogenitale3. La Chlamydia trachomatis (CT), un altro microrganismo, è responsabile dell'uretrite non gonococcica e delle infezioni pelviche, con circa 130 milioni di nuovi casi ogni anno4. L'Ureaplasma urealyticum (UU), la cellula autoreplicante più semplice e più piccola, invade facilmente il tessuto cervicale danneggiato ed è associato a uretrite non gonococcica, cervicite, prostatite e infertilità5. Tutte queste infezioni sono spesso asintomatiche sia nelle donne che nei pazienti di sesso maschile, ma possono portare a gravi complicanze se non trattate tempestivamente. Le infezioni materne possono provocare gravi esiti avversi della gravidanza, tra cui natimortalità, aborto spontaneo, parto pretermine e infezione fetale diretta6. Pertanto, lo sviluppo di un metodo rapido, sensibile, specifico e di facile utilizzo per il rilevamento degli agenti patogeni è di fondamentale importanza.

Il rilevamento rapido e accurato degli agenti patogeni è fondamentale per un'efficace diagnosi e gestione della malattia. I metodi di coltura tradizionali, che richiedono l'isolamento, la coltura e l'identificazione degli agenti patogeni, presentano svantaggi significativi, tra cui il dispendio di tempo e la bassa sensibilità. Sebbene il sequenziamento genico vanti un alto tasso di precisione, richiede un ambiente e un'attrezzatura complessi, il che lo rende costoso e anche dispendioso in termini di tempo. Le tecnologie molecolari convenzionali per l'analisi di NG, CT e UU sono state ampiamente accettate; Tuttavia, questi metodi sono spesso complicati e richiedono molto tempo, strumentazione sofisticata, tecnici qualificati e tempi di elaborazione prolungati. Pertanto, vi è un urgente bisogno di un metodo diagnostico molecolare semplice e affidabile per affrontare i limiti degli approcci convenzionali. Il test a flusso laterale (RGT) di amplificazione dell'RNA offre un'alternativa rapida, sensibile e specifica senza la necessità di procedure complesse 7,8. In questo metodo, i campioni vengono lisati direttamente per rilasciare frammenti di acido nucleico senza estrazione di acido nucleico e questi frammenti vengono amplificati attraverso la trascrizione inversa e la trascrizione. Il prodotto di RNA amplificato viene quindi riconosciuto e catturato da sonde specifiche, formando un complesso sonda di rilevamento RNA-sonda d'oro, che può essere immobilizzato su una membrana di nitrocellulosa tramite flusso laterale per creare bande visibili9. L'intero processo richiede meno di 1 ora, il che lo rende particolarmente adatto per i test di laboratorio di emergenza.

In questo studio, sono stati reclutati 1.416 campioni per valutare l'uso di RGT per il rilevamento di NG, CT e UU. I campioni sono stati analizzati utilizzando metodi di coltura RGT, PCR a fluorescenza, sequenziamento genico e isolamento dei patogeni. I risultati hanno indicato che il metodo RGT era accurato e coerente con i metodi diagnostici convenzionali. In conclusione, l'elevata sensibilità e specificità, la facilità d'uso e i tempi ridotti rendono questo test ideale per la rilevazione rapida e accurata di NG, TC e UU, suggerendo la sua promettente applicazione nella diagnosi medica preliminare delle malattie sessualmente trasmissibili.

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Protocollo

Questo studio è stato condotto in conformità con le linee guida etiche e l'approvazione concessa dall'Institutional Review Board del First People's Hospital di Foshan, nella provincia del Guangdong, in Cina (Ethical Review Document No. LR (2025) 136). Un totale di 1.416 campioni di tampone genitale (716 da pazienti di sesso femminile, 700 da pazienti di sesso maschile) sono stati raccolti in modo prospettico da individui clinicamente sospettati di malattie sessualmente trasmissibili che non erano stati sottoposti a terapia antibiotica nei 14 giorni precedenti (Tabella supplementare 1). Per ciascun partecipante, i tamponi accoppiati sono stati ottenuti simultaneamente e analizzati in parallelo: uno con il metodo di prova (RGT) e l'altro con il metodo di riferimento (rispettivamente sondaggio di fluorescenza PCR, sequenziamento genico e coltura di isolamento del patogeno). L'accordo tra i metodi è stato quantificato utilizzando il coefficiente Kappa di Cohen (κ), con l'interpretazione guidata dai criteri di Landis e Koch.

NOTA: Il protocollo di analisi per CT e UU segue fasi procedurali identiche a quelle descritte per NG, con modifiche limitate ai reagenti patogeni specifici. Le formulazioni dettagliate dei reagenti sono fornite nella fase 2.1 (Tabella supplementare 2, Tabella supplementare 3 e Tabella supplementare 4).

1. Raccolta dei campioni

  1. Tipo di campione applicabile: Raccogliere i tamponi genitali (tampone cervicale femminile, tampone uretrale maschile).
  2. Raccolta dei campioni
    1. Inserire il tampone genitale nell'orifizio uretrale maschile per 2-3 cm o nell'orifizio cervicale femminile per circa 1-2 cm.
    2. Ruotare una volta e tenere premuto per 10 s.
    3. Rimuovere il tampone e inserirlo nella provetta di raccolta contenente 1 mL di soluzione fisiologica normale.
    4. Rompere e gettare la coda del tampone, quindi serrare il tappo della provetta.
    5. Registrare l'orario di ritiro ed eseguire il test tempestivamente.
  3. Stoccaggio e trasporto dei campioni
    1. Trasportare i campioni a temperatura ambiente (RT) entro 4 ore o a 2-8 °C con un impacco di ghiaccio entro 24 ore.
    2. Conservare i pellet di celle rimanenti dei campioni lavorati a -20 °C per 3 mesi o a -80 °C per un massimo di 6 mesi se i test non possono essere condotti in modo tempestivo.

2. Preparazione

  1. Reagenti
    1. Per i reagenti del saggio dell'acido nucleico NG, fare riferimento alla Tabella supplementare 2.
    2. Per i reagenti del test dell'acido nucleico CT, fare riferimento alla Tabella supplementare 3.
    3. Per i reagenti del saggio dell'acido nucleico UU, fare riferimento alla Tabella supplementare 4.
    4. Conservazione: Conservare tutti i reagenti a temperature comprese tra -40 °C e -15 °C e le schede di rilevamento a temperature comprese tra 2 °C e 30 °C.
      NOTA: Il tampone di amplificazione e la soluzione di rilevamento devono essere bilanciati a RT prima dell'uso, in base ai requisiti di rilevamento giornalieri. Dopo aver raggiunto l'RT, devono essere conservati a 4 °C e possono essere utilizzati per il rilevamento successivo. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti. L'enzima di amplificazione deve essere conservato a -20 °C, tranne durante il processo sperimentale. Un aumento della temperatura di stoccaggio può portare a un calo o alla perdita dell'attività enzimatica.
  2. Requisiti dell'ambiente sperimentale
    1. Condurre l'esperimento in quattro zone fisicamente separate:
      1. Area di preparazione del reagente: Mantenere a 22 ± 1°C con pressione dell'aria positiva (portata d'aria filtrata con particolato ad alta efficienza (HEPA) ≥ 0,3 m/s). Conservare i reagenti pre-aliquotati in armadi sterilizzati con raggi UV.
      2. Area di preparazione del campione: Eseguire tutte le manipolazioni dei campioni in una cabina di sicurezza biologica di Classe II pretrattata con etanolo al 70%.
      3. Area di amplificazione: Azionare i termociclatori su tavoli antivibranti.
      4. Area di analisi del prodotto: Utilizzare un banco sterilizzato con raggi UV (30 minuti di esposizione prima/dopo l'uso).
    2. Regolare il personale e il flusso d'aria in ogni sezione per prevenire la contaminazione incrociata come segue:
      1. Mantenimento del flusso d'aria unidirezionale dalla preparazione dei reagenti alle zone di analisi del prodotto.
      2. Garantire una pressione negativa nell'area di preparazione del campione (-5 Pa rispetto alle zone adiacenti).
      3. Limitare il movimento del personale; Decontaminare i guanti con etanolo al 75% prima delle transizioni di zona.
      4. Installare porte a camera stagna con sistemi di interblocco (ritardo minimo di 30 s tra le aperture).
    3. Utilizzare materiali di consumo specifici per zona (ad es. provette da centrifuga, puntali per pipette, ecc.) ed eliminare i materiali di consumo dopo un singolo utilizzo.
    4. Mantenere la pulizia e il controllo di qualità:
      1. Pulire i banchi ogni giorno con ipoclorito di sodio al 10% seguito da etanolo al 75% o acqua distillata.
      2. Convalidare la sterilità dei materiali di consumo tramite il test delle endotossine (saggio del lisato di amebociti Limulus, <0,25 EU/mL).
      3. Monitorare settimanalmente la qualità dell'aria utilizzando piastre di sedimentazione (agar di soia triptica [TSA], ≤5 unità formanti colonie (CFU)/piastra dopo 4 ore di esposizione).
  3. Qualifiche del personale
    1. Possedere certificati o qualifiche relative alla tecnologia PCR per garantire l'accuratezza e l'affidabilità di questo esperimento.

3. Lisi le cellule per estrarre l'RNA

  1. Elaborazione dei provini
    1. Agitare la provetta di raccolta dei campioni a 2.600 volte/min per 10 s per rimuovere le cellule dalla testa del tampone nella soluzione.
    2. Trasferire 1 mL della soluzione in una provetta da microcentrifuga da 1,5 mL utilizzando una pipetta calibrata impostata a 1000 μL.
    3. Centrifugare a 12.000 × g per 2 min a 25 °C.
    4. Aspirare 950 μl di surnatante senza disturbare il pellet. Risospendere i pellet in 25 μl di soluzione residua pipettando su e giù 10 volte utilizzando una pipetta calibrata da 200 μl impostata su 50 μl.
  2. Lisi dei campioni e dei materiali per il controllo qualità
    1. Pre-equilibrare il tampone di lisi cellulare e il controllo negativo a 25 °C per 15 min.
    2. Centrifugare i materiali per il controllo qualità a 1000 × g per 10 s a 25 °C per assicurarsi che tutte le polveri si depositino sul fondo della provetta.
    3. Aggiungere 30 μl di tampone di lisi ai materiali per il controllo qualità e 20 μl ai campioni.
    4. Incubare per 10 minuti a 25 °C.
      NOTA: Quando si utilizza il tampone di lisi cellulare, è essenziale mescolarlo accuratamente. Miscelare pipettando 15 volte (puntale da 200 μl) e aggiungere sia le particelle che il liquido al precipitato. Gestire il controllo positivo in una cabina di biosicurezza di Classe II trattata con raggi UV, seguita da una decontaminazione con ipoclorito di sodio al 10%.

4. Amplificazione isoterma dell'RNA

  1. Pre-equilibratura del tampone di amplificazione
    1. Scongelare il tampone di amplificazione ed equilibrare a 25 °C ± 1 °C per 15 minuti.
  2. Configurazione dei controlli
    1. Includere sia il controllo positivo che quello negativo in ogni esecuzione sperimentale.
  3. Etichettatura delle provette
    1. Etichettare le valvole di amplificazione in base al numero di campioni.
  4. Assemblaggio di reazione
    1. Pipettare 17 μl di tampone di amplificazione in ciascuna provetta utilizzando una pipetta calibrata da 20 μl. Aggiungere 2 μl del campione o del lisato di controllo direttamente nella gocciolina del tampone.
      NOTA: Assicurarsi che il lisato entri nel tampone senza entrare in contatto con la parete della provetta (centrifugare brevemente a 500 × g per 5 s, se necessario). Tappare immediatamente le provette per evitare la contaminazione da aerosol.
  5. Attivazione termica
    1. Incubare le provette in un termociclatore preriscaldato secondo il seguente programma:
      Fase 1: 95 °C per 2 min (denaturazione)
      Fase 2: 42 °C per 2 minuti (ricottura con primer).
  6. Amplificazione enzimatica
    1. Aggiungere 1 μl di enzima di amplificazione a ciascuna provetta e mescolare muovendo la provetta 5 volte seguita da una breve centrifugazione (500 × g per 5 s). Trasferire immediatamente le provette in un secondo termociclatore preriscaldato a 42 °C per 45 minuti.
      NOTA: Utilizzare incubatori separati per evitare fluttuazioni di temperatura, uno impostato a 95 °C e l'altro a 42 °C. Per le esecuzioni multicampione, mantenere le provette di amplificazione rimanenti a 42 °C aggiungendo l'enzima di amplificazione all'ultima provetta di amplificazione.

5. Saggio a flusso laterale

  1. Pre-equilibratura della soluzione di rilevamento
    1. Trasferire la soluzione di rilevamento nell'incubatore a 42 °C per 10 minuti.
  2. Omogeneizzazione
    1. Agitare la soluzione di rilevamento a 2.600 volte/min per 15 s fino a quando il colore non è uniforme.
  3. Mantenimento della temperatura
    1. Mantenere la soluzione di rilevamento a 25 °C ± 2 °C per ≤30 minuti prima dell'uso.
  4. Inizio della reazione
    1. Aggiungere 30 μl di soluzione di rivelazione a ciascuna provetta di amplificazione utilizzando una pipetta calibrata da 20-200 μl.
      NOTA: La punta della pipetta deve entrare in contatto con la parete del tubo con un angolo di 45° durante l'erogazione per evitare la formazione di bolle.
  5. Ibridazione
    1. Miscelare la soluzione pipettando su e giù 5 volte e incubare in un incubatore preriscaldato a 53 °C per 10 minuti.
  6. Preparazione del dispositivo di analisi
    1. Rimuovere le schede di rilevamento dalle buste di alluminio.
      NOTA: Evitare di toccare la zona di applicazione del campione.
  7. Esempio di applicazione
    1. Trasferire l'intera miscela nella porta del campione della scheda di rilevamento utilizzando una pipetta da 20-200 μl.
    2. Posizionare immediatamente la scheda di rilevamento in un'incubatrice a 42 °C per 15 minuti.

6. Analisi dei risultati

  1. Ambiente controllato per la lettura
    1. Mantenere le schede di rilevamento in un incubatore preriscaldato a 53 °C durante l'interpretazione visiva per stabilizzare l'intensità del segnale.
  2. Protocollo di interpretazione visiva
    1. Leggere i risultati del test direttamente mediante ispezione visiva delle bande sulle schede di rilevamento entro 10-20 minuti.
      NOTA: Il risultato non è più valido dopo 20 minuti.
  3. Per la matrice di interpretazione per l'interpretazione dei risultati RGT, fare riferimento alla Tabella supplementare 5.
    NOTA: L'interpretazione visiva del risultato è mostrata nella Figura 1.

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Risultati

Coerenza dei metodi di sondaggio a fluorescenza RGT e PCR
Sono stati analizzati un totale di 310 campioni per NG, di cui 161 femmine e 149 maschi. Il tasso di coincidenza positiva è stato del 98,78% (IC 95%: 93,39%-99,97%), mentre il tasso di coincidenza negativa è stato del 99,12% (IC 95%: 96,87%-99,89%). Il tasso di coincidenza complessivo è stato del 99,03% (IC 95%: 97,20%-99,80%). Il valore di consistenza Kappa era 0,975 (IC 95%: 0,947-1,003, Z = ...

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Discussione

In questo studio, la RGT è stata impiegata per rilevare agenti patogeni delle IST, tra cui NG, CT e UU. Se eseguito secondo rigorosi protocolli operativi, il test RGT ha dimostrato una forte concordanza con metodi diagnostici consolidati come il sondaggio a fluorescenza PCR, il sequenziamento genico e le tecniche di coltura di isolamento dei patogeni. La sensibilità e la specificità del test RGT erano paragonabili o superiori a quelle delle metodologie precedentemente riportate, come evi...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Ringraziamenti

Ringraziamo Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc. per i reagenti e la guida tecnica offerti per questo studio.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
10% (p/v)  ipoclorito di sodioPreparazione in laboratorio.Preparazione in laboratorio.Soluzione di candeggina diluita per la decontaminazione e l'inattivazione di agenti patogeni su apparecchiature o superfici.
Etanolo al 75% (v/v)Ante Food Co., Ltd (Anhui, Cina)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlSoluzione acquosa di etanolo utilizzata per la disinfezione delle superfici
Pipetta a volume regolabile (0,5– 10 μ Fornitore verificato - L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101004Micropipetta monocanale per una gestione accurata di volumi su scala microlitro
Pipetta a volume regolabile (100– 1000 μ Fornitore verificato - L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101014Pipetta monocanale calibrata per la manipolazione di liquidi di grandi volumi.
Pipetta a volume regolabile (10– 100 μ Fornitore verificato - L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101008Pipetta monocanale ottimizzata per volumi intermedi, comunemente utilizzata nei protocolli di biologia molecolare.
Pipetta a volume regolabile (20– 200 μ Fornitore verificato - L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101009Pipetta monocanale per trasferimenti di medio volume, adatta per l'aliquotazione precisa dei reagenti.
Armadio di biosicurezza (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (Hong Kong, Cina)HF Safe-1200A Armadio di biosicurezza di classe II che garantisce la protezione del personale, del campione e dell'ambiente durante la manipolazione di microrganismi patogeni o colture cellulari.
Provette per centrifugaHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Cina)Guangzhou Yuexiu Dispositivo medico Deposito n. 20210414Per l'estrazione dell'acido nucleico, la pellettatura cellulare e altre procedure di laboratorio.
Saggio dell'acido nucleico di Chamydia trachomatis (CT) (analisi dell'amplificazione dell'RNA-flusso laterale)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Cina)A.10.309-STD-RG-002Per la rilevazione qualitativa dell'RNA dell'acido nucleico di Chamydia trachomatis in campioni di tamponi genitali e del tratto urinario.
CO2 IncubatoreThermo Fisher Scientific(Asheville, USA) LLCSN:Utilizzato per la coltura cellulare, fornendo un ambiente stabile a temperatura controllata (37° C), umidità e concentrazione di CO2 (tipicamente 5%) per garantire una crescita cellulare ottimale.
Piatto di coltura Corning Incorporated (Corning, USA)50 mm e acuto; 9 mmPer colture cellulari aderenti ed espansione.
Kit di rilevamento per acido nucleico a Chamydia trachomatis (CT) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdCina Certificato di registrazione del dispositivo medico n. 20143402234Per la rilevazione qualitativa dell'acido nucleico di Chamydia trachomatis in campioni di tamponi genitali e del tratto urinario.
Kit di rilevamento per acido nucleico a Neisseria gonorrhoeae (NG) (PCR-fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdCina Certificato di registrazione del dispositivo medico n. 20173401080Per la rilevazione qualitativa dell'acido nucleico di Neisseria gonorrhoeae in campioni di tamponi genitali e del tratto urinario.
Kit di rilevamento per acido nucleico a Ureaplasma Urealyticum (UU) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdCina Certificato di registrazione del dispositivo medico n. 20173400536Per la rilevazione qualitativa dell'acido nucleico di Ureaplasma Urealyticum in campioni di tampone genitale e del tratto urinario.
DMEM mediumThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)11965092Per la coltura di Chlamydia trachomatis.
Puntali per pipette con filtro (10 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, Cina)TF-10-BXLPer il pipettaggio preciso negli esperimenti.
Puntali per pipette con filtro (200 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, Cina)TF-200-BXLPer il pipettaggio preciso negli esperimenti.
Tampone genitaleHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Cina)Hz112Tamponi sterili con punta in cotone per la raccolta di campioni clinici dalle superfici delle mucose genitali.
Gibco Fetal Bovine Serum (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)10270106Per la coltura di Chlamydia trachomatis.
VetriniHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Cina)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Vetrini standard con trattamento anti-sbiadimento per la preparazione di strisci cellulari o sezioni di tessuto, compatibili con i protocolli di colorazione di Gram.
Kit di sintesi del cDNA Goldenstar RT6 Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (Pechino, Cina)TSK302SPer la sintesi del primo filamento di cDNA nella prima fase della RT-PCR in due fasi. Contiene tutti i reagenti necessari per la sintesi del cDNA dall'RNA.
Gram Stain KitBaso Diagnostics,Inc. (Zhuhai, Cina)BA4012Un kit di colorazione contenente cristallovioletto, iodio, decolorante e safranina per differenziare Neisseria Gonorrhoeae.
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (New York, USA)Versione 25.0Per l'analisi dei dati.
Sterilizzatore a infrarossiHuaxixinrui (Qingdao) Analytical Instruments Co., Ltd.MJ-200WPer la decontaminazione istantanea di anse di inoculazione o pinze, riducendo al minimo la contaminazione incrociata nelle cappe di biosicurezza.
Anello di inoculazioneBKMAM Biotechnology Co., Ltd. (Hunan, Cina)110306002Per il trasferimento di campioni microbici, striature o inoculazione.
Microscopio invertito (IX-51)Olympus Corporation (Tokyo, Giappone)Codice attivo del laboratorio:  71807101Per osservare le cellule aderenti o la dinamica delle cellule vive in piastre di coltura.
MALDI Biotyper Sistema automatizzato di spettrometria di massa microbicaBruker Daltonics GmbH & Co. KG (Brema, Germania)Registrazione nazionale per l'importazione di dispositivi medici n. 20182222017Un sistema basato sulla spettrometria di massa MALDI-TOF per l'identificazione rapida dei microbi tramite profilazione proteica, che consente l'identificazione delle specie di batteri e funghi nei laboratori di microbiologia clinica.
Linee cellulari McCoyConservate in laboratorio.Conservato in laboratorio.Per la coltura di Chlamydia trachomatis.
Incubatore termostatico per micropiastre Leopard70-4 (capacità 4 piastre)Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.Leopard70-4Un incubatore per micropiastre che può ospitare fino a 4 micropiastre standard, con un intervallo di temperatura da ambiente a 70 gradi C,  utilizzato per le fasi di incubazione.
Microscopio (OLYMPUS CX43)Olympus Corporation (Tokyo, Giappone)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/Per l'osservazione clinica di campioni (ad es. morfologia cellulare, campioni colorati).
Mini bagno in metallo MiniG-R100Leaptec Scientific Instruments (Pechino) Co., Ltd.MiniG-R100Per una rapida regolazione della temperatura durante l'esperimento, come il riscaldamento, l'incubazione o la terminazione di reazioni in campioni di piccolo volume.
Saggio dell'acido nucleico Neisseria gonorrhoeae (NG) (analisi dell'amplificazione dell'RNA-flusso laterale)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Cina)A.10.309-STD-RG-001Per la rilevazione qualitativa dell'RNA dell'acido nucleico di Neisseria gonorrhoeae in campioni di tamponi genitali e del tratto urinario.
Reagente per l'estrazione dell'acido nucleicoWuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Cina)A.10.105-SC-001Per l'estrazione, l'arricchimento e la purificazione degli acidi nucleici.
Mezzo di trasporto dei campioniQIAGEN N.V. (Venlo, Paesi Bassi)5128-1220Questo mezzo è specificamente formulato per la raccolta, la conservazione e il trasporto di campioni clinici, garantendo la vitalità della Chlamydia trachomatis  e  Neisseria gonorrhoeae  per successivi test diagnostici.
Centrifuga termostaticaBeckman Coulter, Inc. (Brea, USA)SN: MRZ21L037Per pellettatura di cellule, microbi o acidi nucleici.
TM medioShanghai Yihua Scienza Medica & Technology Co., Ltd (Shanghai, Cina)Shanghai Pu Medical Device Filing No. 20140081TM medium può essere utilizzato per l'isolamento, la coltivazione e l'identificazione di Neisseria gonorrhoeae da campioni clinici per aiutare nella diagnosi di gonorrea.
Tripsina-EDTA (0,25%)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)25200072Per una delicata dissociazione delle cellule aderenti durante la subcoltura o le procedure sperimentali.
Ureaplasma urealyticum (UU) Nucleic Acid Assay (RNA Amplification-Lateral Flow Assay)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, Cina)A.10.309-STD-RG-003Per la rilevazione qualitativa dell'RNA dell'acido nucleico Ureaplasma Urealyticum in campioni di tamponi genitali e del tratto urinario.
Kit per coltura di isolamento selettivo, identificazione e sensibilità ai farmaciHebei Zhongaisheng Biotechnology Co., Ltd.(Hebei, Cina)Dispositivo medico Hebei n. 20152400168Per l'isolamento selettivo, la coltura, l'identificazione e la determinazione della sensibilità ai farmaci di Ureaplasma urealyticum e Mycoplasma hominis.
Miscelatore a vorticeXinkang Medical Instrument Co. Ltd (Jiangsu, Cina)XK80-ADispositivo da laboratorio per l'omogeneizzazione di campioni liquidi mediante agitazione rapida.
.300504406

Riferimenti

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