Per la valutazione delle terapie con cellule staminali nuovo, è importante non invasiva traccia le cellule iniettate in vivo. Questo video vi mostrerà come etichetta cellule staminali mesenchimali ed embrionali con il ferro mezzi di contrasto a base di ossidi in vivo per la successiva RM in vivo.
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Articolo metodologico
Etichettatura hESC e hMSCs con nanoparticelle di ossido di ferro per i non-invasiva in vivo inseguimento con la RM
In questo articolo
Sommario
Abstract
Negli ultimi anni la ricerca sulle cellule staminali ha portato ad una migliore comprensione della biologia dello sviluppo, malattie varie e il suo potenziale impatto sulla medicina rigenerativa. Un metodo non invasivo per monitorare le cellule staminali trapiantate in vivo avrebbe ripetutamente di migliorare notevolmente la nostra capacità di comprendere i meccanismi che la morte di controllo delle cellule staminali e di identificare fattori trofici e di vie di segnalazione che consentono di migliorare l'attecchimento delle cellule staminali. RM ha dimostrato di essere uno strumento efficace per la rappresentazione in vivo di cellule staminali con vicino risoluzione anatomica microscopica. Al fine di individuare le cellule staminali con MR, le cellule devono essere etichettati con cellulari specifici mezzi di contrasto MR. A tal fine, le nanoparticelle di ossido di ferro, come le particelle di ossido di ferro superparamagnetiche (SPIO), vengono applicate, a causa della loro elevata sensibilità per il rilevamento delle cellule e la loro eccellente biocompatibilità. SPIO particelle sono composte da un nucleo di ossido di ferro e un cappotto destrano, carboxydextran o amido, e la funzione creando disomogeneità campo locale, che causano una diminuzione del segnale sulle immagini T2 MR. Questa presentazione dimostrerà le tecniche per l'etichettatura di cellule staminali clinicamente applicabile con mezzi di contrasto RM per la successiva non invasive nel monitoraggio in vivo delle cellule etichettate con la RM.
Protocollo
L'etichettatura di hMSC con Ferucarbotran
Questa è la tecnica per l'etichettatura di cellule staminali mesenchimali con Ferucarbotran, un ossido di ferro agente di contrasto per RM:
- Per iniziare, piastra delle cellule 18-24 ore prima della procedura di etichettatura T75 fiaschi ad una confluenza del 80%. Se si utilizza un piatto diversa cultura, questa è pari a circa 10000 cellule per cm 2.
- Il giorno dopo, iniziare con la preparazione dei mezzi di etichettatura con l'aggiunta di 30 ml di Resovist a 8 ml di siero libertà dei media. Questo etichetta uno T75 pallone in 80% confluenza, corrispondente ....
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Discussione
Un non-invasiva rappresentazione delle cellule staminali è fondamentale per il monitoraggio praticamente qualsiasi terapia a base di cellule staminali. Una migliore comprensione della cinetica in vivo delle cellule staminali etichettati, come visualizzato nelle immagini MR, potrebbe aprire la strada ad un razionale e un uso più efficace delle cellule staminali a base di terapie. Dal momento che usiamo mezzi di contrasto clinicamente applicabile e tecniche di imaging, i nostri protocolli presentati devono essere facilmente traducibili in app.......
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Ringraziamenti
Questo progetto è stato sostenuto da una borsa SEED J. Leon Thal del California Institute per la Medicina Rigenerativa. Tobias Henning è stato finanziato da una borsa di studio di ricerca dal tedesco Research Association (DFG, SE 4578/1-2). Vogliamo riconoscere con gratitudine Meneses Juanito per i suoi consigli sulla cultura di cellule staminali embrionali umane.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| D-MEM ad alto contenuto di glucosio | Reagente | Sigma-Aldrich | D5648 | |
| Gelatina | Reagente | Sigma-Aldrich | G1890 | diluire la gelatina in PBS fino a una concentrazione finale dello 0,1 % |
| PBS (privato di Ca++ e Mg++) | Reagente | GIBCO, di Life Technologies | 14190-144 | |
| Tripsina-EDTA 0,05% | Reagente | Invitrogen | 25300-120 | |
| Tripsina-EDTA 0.25% | Reagente | Invitrogen | 25200-114 | |
| FBS caratterizzato | Reagente | Hyclone | SH30071.03 | |
| Filtro cellulare (40 μm Nylon | Strumento | BD Biosciences | 352340 | |
| DMEM Knockout | Reagente | GIBCO, di Life Technologies | 10829018 | |
| Sostituto del siero per knockout | Reagente | GIBCO, di Life Technologies | 10828028 | |
| b-Mercapto–etanolo | Reagente | Sigma-Aldrich | 7522 | |
| amminoacidi non essenziali | Reagente | GIBCO, di Life Technologies | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagente | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutammina | Reagente | GIBCO, di Life Technologies | 25030081 | |
| Penicillina/Streptomicina | Reagente | GIBCO, di Life Technologies | 15140-122 | |
| Ferumoxidi (Endorem) | Reagente | Guerbet | ||
| Ferucarbotran (Resovist)®) | Reagente | Bayer AG |
Riferimenti
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents. 228, 760-767 (2003).
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J.
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Ristampe e permessi
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