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Articolo di ricerca
Conducendo studi basati sia sull'organismo che su colture cellulari, è stato dimostrato che l'inibizione della proteina inibitrice della chinasi Raf (RKIP) può mitigare la ferroptosi neuronale a seguito di emorragia intracerebrale spontanea, riducendo così il danno cerebrale. La citoprotezione osservata deriva dalla modulazione dell'asse di segnalazione NRF2/HO-1 .
La proteina inibitrice della chinasi Raf (RKIP), un membro primario della famiglia delle proteine leganti la fosfatidiletanolammina, è nota per il suo coinvolgimento in vari processi fisiologici, tra cui la differenziazione cellulare, la migrazione, il ciclo cellulare e l'apoptosi. Questo studio ha esplorato la sua funzione nella ferroptosi neuronale a seguito di emorragia intracerebrale spontanea (ICH) e i meccanismi associati. Un modello cellulare di ICH spontaneo è stato sviluppato utilizzando cellule di feocromocitoma di ratto (PC12) in coltura stimolate con emina. Sono stati valutati la vitalità cellulare, l'espressione dell'RNA, i livelli di specie reattive dell'ossigeno (ROS) e l'idroperossido lipidico (LPO). Inoltre, sono stati misurati i livelli di espressione proteica. Questo studio ha confermato che l'inibizione di RKIP è neuroprotettiva in vitro dopo ICH. Questo effetto è stato associato ad un aumento dell'espressione della glutatione perossidasi 4 (GPX4) e alla diminuzione dell'espressione dell'acil-CoA sintetasi a catena lunga della famiglia 4 (ACSL4), insieme ai livelli di ROS e LPO nei neuroni. L'inibizione di RKIP ha dimostrato un ruolo protettivo contro la ferroptosi neuronale in vitro dopo ICH, potenzialmente attraverso l'attivazione della via del fattore nucleare E2-correlato al fattore 2/eme ossigenasi-1 (NRF2/HO-1). Questo meccanismo può offrire informazioni sulle strategie terapeutiche mirate alla ferroptosi neuronale nell'ICH.
L'emorragia intracerebrale spontanea (ICH) è una condizione cerebrovascolare caratterizzata da sanguinamento dovuto a danno vascolare intracranico, necrosi e rottura dei vasi, che colpisce comunemente i gangli della base e rappresenta un importante sottotipo di ictus emorragico1. Il tasso di mortalità tra i pazienti con diagnosi di ICH è di circa il 50% e una percentuale significativa di sopravvissuti sperimenta una grave perdita di indipendenza2. Le attuali opzioni terapeutiche per l'ICH spontanea sono limitate, poiché nessuna terapia esistente ha dimostrato di ridurre significativament....
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Coltura di cellule PC12
La linea cellulare PC12 è stata propagata nel terreno di crescita del Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI-1640) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS) e l'1% di penicillina/streptomicina, con manutenzione ordinaria in condizioni di coltura standard (37 °C, 5% CO2 atmosfera umidificata). Per le procedure sperimentali, le cellule aderenti sono state piastrate su recipienti di coltura e lasciate proliferare fino a raggiungere monostrati quasi confluenti (circa il 90% di copertura superficiale). La dissociazione cellulare è stata ottenuta attraverso un trattamento enzim....
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L'emina può indurre danni alla membrana plasmatica, quindi viene spesso utilizzata per la costruzione di modelli cellulari in vitro di ICH. Questo studio ha indagato gli effetti del trattamento con emina a concentrazioni e durate variabili sulla vitalità cellulare PC12, analizzando contemporaneamente le dinamiche di espressione della proteina RKIP in condizioni sperimentali corrispondenti attraverso l'analisi western blot (Figura 1A). La vitalità cellulare era significativamente rid.......
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Questo studio ha studiato gli effetti e i meccanismi alla base del knockdown di RKIP sulla ferroptosi indotta da ICH in un contesto in vitro . La stimolazione delle cellule con l'emina innesca lo stress ossidativo, accompagnato da un'eccessiva generazione di ROS e LPO, promuovendo così la ferroptosi. L'inibizione dell'espressione endogena di RKIP accelera la traslocazione di NRF2 liberato nel nucleo e il legame con l'elemento di risposta antiossidante .......
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Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti noti o relazioni personali che possano aver influenzato il lavoro riportato in questo articolo.
Questo studio è stato supportato da sovvenzioni del Nantong Municipal Health Commission Project (MS2022015) e del Nantong Science and Technology Bureau Project (JCZ2023022).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| IgG anti-coniglio con etichetta Alexa Fluor 488 | Beyotime Biotech | A0423 | |
| Anticorpo anti-ACSL4 | Segnalazione cellulare | 38493T | |
| Anticorpo anti-GPX4 | Segnalazione cellulare | 59735S | |
| Anticorpo anti-HO-1 | MedChemExpress | HY-P80499 | |
| Anticorpo anti-NRF2 | Segnalazione cellulare | 12721T | |
| Anticorpo anti-RKIP | Abcam | ab76582 | |
| Anticorpo anti-β-actin | Abcam | ab179467 | |
| BeyoECL Plus | Beyotime Biotech | P0018M | |
| BSA | NCM Biotech | WB6504-100g | |
| Kit di conteggio delle celle-8 | Beyotime Biotech | C0037 | |
| SALVATAGGIO CELLA | NCM Biotech | C40050 | |
| ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix | Vazyme | Q411-02 | |
| DMSO | Beyotime Biotech | ST038 | |
| Siero bovino fetale | Gibco | A5670801 | |
| GraphPad Prism | |||
| Hemin | MedChemExpress | HY-19424 | |
| HiScript Q RT SuperMix per qPCR (+tergicristallo gDNA) | Vazyme | R123-01 | |
| IgG Anti-Topo con marcato HRP | Termo | C31430100 | |
| IgG Anti-Coniglio con Marchio HRP | Termo | C31460100 | |
| Kit per il contenuto di perossido lipidico (LPO) | Solarbio | BC5245 | |
| Locostatina | MedChemExpress | HY-W013411A | |
| ML385 | MedChemExpress | HY-100523 | |
| Montaggio medio? antisvanimento (con DAPI) | Solarbio | S2110 | |
| LATE in polvere SENZA GRASSI | Solarbio | D8340 | |
| PBS (polvere?pH7.2-7.4) | Solarbio | P1010 | |
| PC-12Adh | Biotecnologia BioChannel di Nanchino | BC-C-RA-005 | |
| Liquido penicillina-streptomicina | Solarbio | P1400 | |
| PRMI-1640 | Gibco | A1049101 | |
| Cocktail di proteasi e fosfatasi per uso generale, 50x | Beyotime Biotech | P1045 | |
| Marcatore proteico | Termo | 26617 | |
| PVDF | Millipore | RIKB43638 | |
| Kit per il test delle specie reattive dell'ossigeno | Solarbio | CA1410 | |
| Buffer RIPA (alto) | Solarbio | R0010 | |
| Kit di preparazione rapida in gel SDS-PAGE | Epizima | PG110 | |
| Buffer di caricamento campione SDS-PAGE, 5x | Beyotime Biotech | P0015 | |
| TritonX-100 | Solarbio | IT9100 | |
| TRIZOL | Termo | 15596018CN | |
| Soluzione di tripsina-EDTA? 0,25% (senza fenolo rosso) | Solarbio | T1300 |
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