Articolo metodologico

Applicazione dell'optogenetica combinata con la registrazione della fotometria delle fibre nella regolazione dei circuiti neurali-funzioni viscerali mediante elettroagopuntura

DOI:

10.3791/68667

⸱

19 settembre 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Lo scopo di questo esperimento è quello di stabilire un nuovo approccio per l'integrazione simultanea di optogenetica, registrazione intracerebrale del segnale di calcio e monitoraggio della motilità gastrica, offrendo un nuovo paradigma per il monitoraggio in tempo reale della relazione tra stimolazione somatica e interazioni circuito-funzione viscerale, che viene applicato alla ricerca in agopuntura.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo protocollo descrive una tecnica per la manipolazione optogenetica di specifici tipi di neuroni e la registrazione in tempo reale degli effetti dell'elettroagopuntura a Zusanli (ST36) sui segnali nucleari del calcio e sulla motilità gastrica nei topi in anestesia in vivo. L'esplorazione dei meccanismi centrali alla base dell'efficacia dell'agopuntura è stata limitata da vincoli tecnologici. Tuttavia, il progresso della tecnologia di imaging optogenetico e ottico ha spinto lo sviluppo delle neuroscienze. La registrazione fotometrica delle fibre, che inizialmente sfrutta gli indicatori di calcio geneticamente codificati per visualizzare i cambiamenti nella dinamica del calcio indicativi dell'attività neuronale, si distingue come una tecnologia chiave per caratterizzare le correlazioni cervello-comportamento in vivo. L'applicazione dell'optogenetica consente la codifica genetica dei neuroni, consentendo la loro attivazione o inibizione in risposta alla stimolazione luminosa. Questa capacità facilita la creazione di collegamenti causali tra la funzione dei circuiti neurali e i risultati comportamentali. La fotometria simultanea delle fibre, la registrazione del calcio e la stimolazione optogenetica forniscono un metodo per la registrazione e la manipolazione in tempo reale dell'attività neuronale, fungendo da approccio efficace per studiare i meccanismi centrali dell'agopuntura. Ciononostante, rimane una scarsità di studi che documentano l'utilizzo concomitante della fotometria delle fibre, della registrazione del calcio, dell'optogenetica e del monitoraggio della funzione viscerale nella ricerca sull'agopuntura. I risultati di questo esperimento mostrano che EA-ST36 potrebbe regolare la motilità gastrica correlata al circuito PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT . La stimolazione optogenetica di questo circuito produce lo stesso effetto. Dopo la sovrapposizione dei due, le variazioni del segnale del calcio e della motilità gastrica raggiungono il loro massimo. Questo studio ha stabilito un nuovo approccio per l'integrazione simultanea di optogenetica, registrazione intracerebrale del segnale del calcio e monitoraggio della motilità gastrica, offrendo un nuovo paradigma per il monitoraggio in tempo reale della relazione tra stimolazione somatica e interazioni circuito-funzione viscerale.

Introduzione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Negli ultimi anni, la proliferazione di sensori fluorescenti biomolecolari ha spinto l'utilizzo della fotometria in fibra in biologia molecolare, facilitando la registrazione in vivo 1. Questo progresso consente il monitoraggio in tempo reale delle alterazioni dell'attività neuronale nel cervello. L'integrazione dell'optogenetica consente la manipolazione neuronale, offrendo il vantaggio di condurre immediatamente l'optogenetica e la registrazione in fibra ottica semplicemente inserendo la fibra ottica. In combinazione con la registrazione della funzione viscerale, questo metodo offre una buona risoluzione temporale e un targeting a livello di nuclei per osservare come l'agopuntura modula le funzioni viscerali attraverso modifiche dell'attività neuronale.

Numerosi studi hanno illustrato il distinto impatto regolatorio dell'agopuntura sulla funzione gastrointestinale 2,3,4, sebbene i precisi meccanismi centrali rimangano sfuggenti. Molti antichi libri di medicina cinese, come Huang DiNeiJing, hanno anche registrato che l'ST36 (sul lato laterale posteriore all'articolazione del ginocchio, circa 2 mm inferiore al perone del caput5) è spesso usato per trattare le malattie gastrointestinali. Studi recenti hanno dimostrato che i nuclei coinvolti nei processi fisiologici gastrici (ad esempio, comportamento alimentare6, cessazione del consumo di cibo7, soppressione dell'appetito8) e patologici (ad esempio, dolore gastrico9, disfunzione gastrica10) comprendono il nucleo parasubtalamico (PSTn), il nucleo del rafe dorsale (DRN), il nucleo parabrachiale laterale (LPB), il nucleo del tratto solitario (NTS) e il nucleo motorio dorsale del vago (DMV). Gli studi hanno dimostrato che l'elettroagopuntura a ST36 può aumentare il numero di cellule c-Fos+ nel DMV, aumentando così l'espressione di c-Fos+ nel sottonucleo caudale di NTS11. Inoltre, è stato documentato che il nucleo paracentricolare (PBN) è coinvolto nella composizione del complesso nucleare paracentricolare, può proiettare fino al midollo allungato NTS, che svolge un ruolo importante nell'integrazione delle informazioni sensoriali viscerali, come i segnali gastrointestinali12,13. Le informazioni di cui sopra suggeriscono che l'agopuntura potrebbe potenzialmente modulare la motilità gastrica potrebbe essere correlata al circuito neurale PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT. I neuroni glutammatergici sono principalmente coinvolti nella LPB e NTS14, mentre i neuroni colinergici sono principalmente coinvolti nella DMV durante i processi fisiologici e patologici gastrici15. Studiare gli effetti regolatori dell'agopuntura sui circuiti neurali e sulle funzioni viscerali può fornire una comprensione più chiara dei meccanismi di agopuntura e fornire un supporto teorico per gli interventi clinici di agopuntura nelle malattie viscerali.

Tuttavia, a causa di limitazioni tecniche, la ricerca limitata ha approfondito i meccanismi dei circuiti neurali dell'elettroagopuntura nella modulazione delle funzioni viscerali. Pertanto, il presente studio presenta linee guida semplificate per introdurre il processo dettagliato di iniezione del virus. In particolare, la metodologia esposta in questo articolo può essere utilizzata per chiarire i meccanismi circuitali implicati nella regolazione dell'agopuntura di diverse funzioni viscerali.

Pertanto, questo studio mira a indagare gli effetti regolatori dell'agopuntura sulla motilità gastrica, che potrebbero essere correlati al circuito neurale PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT combinando l'optogenetica con la fotometria delle fibre per la registrazione dell'imaging del calcio. L'obiettivo è quello di stabilire un protocollo per l'imaging del calcio e la sincronizzazione optogenetica, introducendo un nuovo quadro di ricerca per lo studio della funzione viscerale e dei circuiti neurali.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Protocollo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutte le procedure hanno seguito le linee guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio stabilite dal National Institutes of Health e hanno ricevuto l'approvazione dal Comitato Etico per la Cura e l'Uso degli Animali dell'Istituto di Agopuntura e Moxibustione, Accademia Cinese delle Scienze Mediche. Topi maschi adulti C57 del peso di 25 g sono stati impiegati per l'iniezione virale e l'impianto di fibre ottiche. Il protocollo dell'esperimento sugli animali ha aderito rigorosamente ai requisiti dello standard nazionale "Linee guida per la revisione etica del benessere degli animali da laboratorio" (GB/T 35892-2018) ed è stato approvato dal Comitato Etico dell'istituto.

NOTA: Mantenere l'ambiente pulito durante il processo di iniezione del virus e di impianto della fibra ottica. Indossare maschere durante l'intera operazione. Dopo il periodo di alta espressione virale (21-28 giorni), l'elettroagopuntura a ST36 e le manipolazioni optogenetiche sono state condotte per registrare la motilità gastrica. Gli animali sono stati alloggiati nella struttura per animali dell'Istituto di Agopuntura e Moxibustione, Accademia Cinese delle Scienze Mediche, in condizioni controllate (temperatura: 22-24 °C, umidità: 50%-60%, ciclo luce-buio di 12 ore), con libero accesso a cibo e acqua. Informazioni specifiche sui reagenti e sulle attrezzature utilizzate sono disponibili nella Tabella dei materiali.

1. Preparazione pre-operatoria

  1. Disinfettare lo strumento chirurgico che è stato sottoposto a sterilizzazione ad alta temperatura e pulire l'area chirurgica con etanolo al 70%.
  2. Anestesia: somministrare un'iniezione intraperitoneale di tribromoetanolo all'1,25% (0,2 ml/10 g di peso) al topo. Valutare l'assenza del riflesso di pizzicamento delle dita dei piedi per misurare la profondità dell'anestesia.
  3. Rasare i peli dalla testa e posizionare i topi in una cornice stereotassica dotata di barre per le orecchie e i denti. Applicare un unguento all'eritromicina sugli occhi dei topi per prevenire i danni causati dalla luce chirurgica.
  4. Immergere la ghiera in fibra ottica (dimensione della ghiera: 1,25 mm di ghiera bianca, tipo di fibra: 200/0,37, lunghezza della fibra: 5,5 mm, modello dell'ago della ghiera: V8475) in etanolo al 75% per 30 minuti e successivamente lavare via l'etanolo al 70% con soluzione fisiologica.
  5. Caricare il microiniettore (1 μL) con paraffina (800-900 nL). Sciogliere il tubo di vetro e disegnarlo in due sezioni. Affilare una sezione sulla punta utilizzando una rettificatrice ad ago che funga da ago per iniezione. Per garantire la tenuta ai gas del microiniettore, riempire il tubo con paraffina e collegarlo al microiniettore sulla punta utilizzando una pistola per colla.

2. Chirurgia dell'iniezione virale

  1. Incidere il cuoio capelluto lungo la linea mediana dagli occhi alla parte posteriore del collo per rivelare il cranio. Successivamente, asportare i muscoli del collo per esporre l'osso occipitale. Strofinare la superficie ossea con H2O2 per 30 s e poi pulire con un batuffolo di cotone asciutto per rimuovere la fascia sottocutanea e i tessuti connettivi (Figura 1A).
    NOTA: Questo passaggio serve a facilitare la copertura del cemento dentale sull'osso occipitale, rendendo la fibra ottica fissata in modo più stabile.
  2. Livella il cranio.
    1. Livellamento dell'asse X: segnare due punti che si trovano a 3,5 mm di distanza dal punto di Bregema nella sutura coronale e collegare i due punti per formare una linea. Il punto medio di questa linea è lo zero. Il valore assoluto della differenza dell'asse Z sulla superficie ossea a 3,5 mm di distanza dall'origine dovrebbe essere ≤ 0,03 mm.
    2. Livellamento dell'asse Y: segnare due punti che si trovano a 3,5 mm di distanza dal punto Lambda nella sutura lambdoide, impostare il punto medio dei due punti e collegare questo punto medio al punto Lambda per formare una linea. Il punto medio di questa linea è un altro zero. Il valore assoluto della differenza dell'asse Z tra questo zero e lo zero al quale la superficie ossea è stata regolata durante l'asse X dovrebbe essere ≤ 0,03 mm.
  3. Segnare le coordinate stereotassiche dell'iniezione del virus con un pennarello. Per PBN: -1,1 mm antero-posteriore (asse AP, Y), -5,45 mm mediale-laterale (ML, asse X), -3,3 mm dorso-ventrale (DV, asse Z) (con bregma come punto zero); Per NTS: -0,35 mm AP, 0,2 mm ML, -3,3 mm DV (con il punto più alto dell'osso occipitale come punto zero); Per DMV: -0,35 mm AP, 0,0 mm (il punto più alto dell'osso occipitale), -3,5 mm DV (con il punto più alto dell'osso occipitale come punto zero) (Figura 1B). Utilizzare un microtrapano ad alta velocità (diametro del trapano di 0,8 mm) per penetrare nel cranio nei siti designati per esporre la superficie del cervello. Successivamente, utilizzare una pinza fine per perforare delicatamente la dura madre e rimuoverla, applicare soluzione salina all'apertura praticata per mantenere l'umidità sulla superficie del cervello.
  4. Applicare l'adesivo Single Bond Universal sulla superficie del cranio (esclusa la regione perforata) ed esporlo alla luce per 30 s per l'indurimento. È importante mantenere una superficie asciutta del cranio prima di applicare l'adesivo universale a legame singolo per garantire una forte adesione. Inoltre, l'adesivo deve essere evitato sui muscoli durante l'applicazione.
  5. Fissare il microiniettore al braccio meccanico di un apparato stereotassico. Riempire con 250 nL di virus (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA). Al contatto con la punta dell'ago con la superficie del cervello, regolare la profondità (Z) su 0. Abbassare l'ago nel sito bersaglio all'interno del nucleo parabrachiale (PBN) e iniettare il virus nella regione PBN a una velocità di 35 nL/min. Dopo l'iniezione, tenere l'ago in posizione per 10 minuti, quindi ritrarlo a una velocità di 6 mm/min. Successivamente, immergere l'ago in una provetta Eppendorf contenente soluzione fisiologica per la pulizia (Figura 1C, D).
    NOTA: Le dosi iniettabili di tutti i seguenti virus sono di 250 nL; Il DMV è 100 nL16,17.
  6. Utilizzare lo stesso protocollo per iniettare rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPRE nel nucleo del tratto solitario (NTS) e rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA nel nucleo motore dorsale del vago (DMV) (Figura 1D). Tutti i titoli virali sono ≥ 1 × 1012 VG/mL.

3. Chirurgia implantare in fibra ottica

  1. Fissare la ghiera in fibra ottica al supporto optrode e fissarla al braccio meccanico dell'apparecchio stereotassico. Impostare le coordinate di impianto corrispondenti a una posizione a circa 100 μm sopra il sito di iniezione virale del DMV (Figura 1E, F).
  2. Miscelare 1-3 g di cemento dentale con 1 mL di resina indurita a temperatura ambiente fino a ottenere un composto uniforme. Somministrare prontamente la miscela intorno alla ghiera della fibra ottica e sulla superficie del cranio, lasciando esposti 5 mm della sezione superiore della boccola della fibra ottica. Una volta che il cemento si è solidificato, allentare la vite del supporto, sollevare e rimuovere il supporto (Figura 1G).
  3. Utilizzare suture chirurgiche riassorbibili (6-0) per suturare il cuoio capelluto occipitale posteriore dei topi. Rimuovi i topi dal telaio stereotassico e mettili in un ambiente caldo per riprendersi dall'anestesia. Una volta che gli animali hanno mostrato movimenti illimitati, sono stati trasferiti in una gabbia pulita e spaziosa per l'alloggio, con 4-5 topi alloggiati insieme e con libero accesso a cibo e acqua.
    NOTA: Durante l'esperimento, è stato osservato che una gabbia più grande è benefica per il normale movimento dei topi ed è fondamentale per mantenere il loro peso. L'aumento dello spazio riduce anche la probabilità di contatto accidentale con la fibra impiantata, riducendo così al minimo i potenziali danni. I topi di peso pari o superiore a 25 g hanno mostrato cambiamenti significativi nella pressione intragastrica dopo l'agopuntura.

4. Chirurgia di inserimento del palloncino

  1. Al picco dell'espressione virale (21-28 giorni), digiunare i topi per 4-5 ore. Successivamente, anestetizzare i topi mediante iniezione intraperitoneale di tribromoetanolo all'1,25% (0,1 ml/10 g di peso). 15 minuti dopo, somministrare un'iniezione intraperitoneale di soluzione di carbammato di etile al 10% (0,15 ml/10 g di peso). Valutare la profondità dell'anestesia confermando l'assenza di un riflesso di pizzicamento delle dita dei piedi.
  2. Radere i peli delle regioni addominali e ST36. Accendi il termoforo e impostalo in modo che mantenga una temperatura di 37 °C, con l'animale tenuto sul termoforo per tutta la durata dell'intervento per garantire una temperatura corporea costante.
  3. Collegare il palloncino in lattice alla siringa e iniettare aria al suo interno per verificare che il palloncino in lattice (BS4 73-2787) non abbia perdite d'aria.
  4. Esporre lo stomaco e una parte del duodeno al di sotto del processo xifoideo. Praticare una piccola incisione nel duodeno di circa 0,3 cm di lunghezza, 0,5-1 cm distalmente al piloro.
  5. Inserire il palloncino nello stomaco lungo la direzione intestinale attraverso l'incisione duodenale, con il nodo posizionato in corrispondenza del seno pilorico.
  6. Rimuovere l'ago della siringa, riempire 5 ml di acqua pura, scaricare l'aria e collegare l'altra estremità del palloncino con la siringa. Tirare verso l'alto il luer lock della siringa per evacuare il gas dal palloncino, quindi abbassare il luer lock per iniettare l'acqua pura nel palloncino. Collegare il gruppo a un rubinetto a tre vie e a un trasduttore di pressione.

5. Registrazione sincrona della pressione intragastrica e imaging del calcio

  1. Accendi il modello Neurolog Digitimer, CED Micro1401-4, Inper Studio, il sistema di registrazione in fibra ottica multicanale, il software Inper Signal e il software Spike 2. Impostare il software Inper, la registrazione del segnale del calcio in modo che venga attivata dal software Spike2 e dallo stimolatore optogenetico, assicurando che la stimolazione laser e l'acquisizione del segnale del calcio da parte del software Inper siano allineate con la registrazione della pressione intragastrica da parte del software Spike2.
  2. Apri tutti i rubinetti a tre vie che si collegano al palloncino, ruota la manopola ZERO sul modello digitimer Neurolog e osserva sul software Spike 2 se la linea di base è regolata al punto 0. Dopo aver equalizzato la pressione all'interno del palloncino con la pressione atmosferica, iniettare acqua pura nel palloncino fino a quando la pressione intragastrica non viene visualizzata a 15-35 cm H2O. Una volta che sia la pressione intragastrica che i segnali di calcio raggiungono uno stato stabile, registrare una linea di base di 60 s di pressione intragastrica e segnali di calcio nel DMV (Figura 2A).

6. Elettroagopuntura a ST36 e stimolazione laser

  1. Inserire un ago per agopuntura (0,25 mm × 25 mm) nel punto di agopuntura ST36 sinistro e collegarlo a un apparecchio per elettroagopuntura (10 Hz, 1 mA). Somministrare l'elettroagopuntura per 60 s registrando i cambiamenti nella pressione intragastrica e nei segnali del calcio.
  2. Dopo la stabilizzazione della pressione intragastrica basale e dei segnali di calcio, erogare la stimolazione optogenetica (635 nm, 5 ms, 5 Hz, 30 mW) attraverso la fibra per 60 s, monitorando i cambiamenti nella pressione intragastrica e nei segnali di calcio.
  3. Una volta che la linea di base della pressione intragastrica e dei segnali del calcio si stabilizza di nuovo, combinare l'elettroagopuntura a ST36 (10 Hz, 1 mA) con la stimolazione optogenetica (635 nm, 5 ms, 5 Hz) per 60 s e registrare i cambiamenti nella pressione intragastrica e nei segnali del calcio.

7. Esame istologico dell'iniezione virale e del posizionamento delle fibre

  1. Dopo il completamento dei suddetti protocolli, perfondere i topi con soluzione fisiologica e fissare immediatamente con paraformaldeide al 4% per via cardiaca. Raccogli il cervello dei topi. Eseguire la disidratazione a gradiente utilizzando soluzioni di saccarosio al 20% e al 30%, quindi sezionare dopo l'inclusione con un agente di inclusione a congelamento rapido. Confrontate le fette di cervello con le mappe cerebrali dei topi per osservare se le posizioni dell'iniezione del virus e dell'impianto di fibre ottiche erano accurate. Il posizionamento preciso delle iniezioni virali e degli impianti di fibre ha confermato la validità della pressione intragastrica e dei dati del segnale del calcio (Figura 1H, I).

8. Analisi dei dati

  1. Analizza i dati del segnale del calcio utilizzando il software Inper Data Analysis e i dati sulla motilità gastrica con il software Spike2. Confrontare le differenze tra i segnali del calcio o le ampiezze della motilità gastrica al momento della stimolazione (60 s) e quelli prima della stimolazione (60 s) per osservare gli effetti regolatori di diversi stimoli sulla motilità gastrica e sui segnali del calcio. Tutti i dati mostrati nella Figura 2 sono i grafici dei dati originali.

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Risultati

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

I virus sono stati iniettati nel nucleo parabrachiale (PBN), nel nucleo del tratto solitario (NTS) e nel nucleo motorio dorsale del vago (DMV) dei topi, con una fibra impiantata nel DMV (Figura 1A-G). Durante il periodo di picco dell'espressione virale, sono state registrate variazioni della pressione intragastrica e dei segnali del calcio all'interno del DMV in seguito all'elettroagopuntura a ST36 e alla stimolazione optogenetica. Lo scopo di questo studio è quello di osser...

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Discussione

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'indagine scientifica centrale dell'agopuntura riguarda la regolazione degli organi bersaglio attraverso la stimolazione dei punti di agopuntura dei nervi autonomi. I risultati suggeriti da Q. Ma hanno suggerito che l'influenza dell'agopuntura sulla modulazione della funzione degli organi remoti deriva dai riflessi autonomici somatici che attivano le vie simpatiche e/o parasimpatiche, in particolare quelle correlate alle malattie gastrointestinali e all'infiammazione sistemica

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Ringraziamenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Questo studio è stato finanziato dalla National Natural Science Foundation of China (n. 82174518, 82474661), dai fondi di ricerca fondamentale per gli istituti centrali di ricerca sul benessere pubblico (ZZ-2023008) e dal progetto di innovazione scientifica e tecnologica dell'Accademia cinese delle scienze mediche cinesi (CI2021A03402).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Virus
rAAV-CaMKII&alfa;-CRE-WPRE-hGH poliA (AAV2/9)CervelloVTAGatto#PT-0020
rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2/9)CervelloVTAGatto#PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)CervelloVTAGatto#PT-10973
Altro
1 μ L microiniettoreHamilton80135
Adesivo universale 3M EPSP Single BondUfficiale del mondo dentale41269
Ago per agopunturaZhongYanTaiHe0,25/13 secondi
CED Micro1401-4CED (Inghilterra)1401-4
Cemento dentale/Resina indurita a temperatura ambienteYAMAHACHI DENTALEN/A
Pinze finiRWDF11028-13
Tubo di vetroStrumenti di precisione mondiali504949
HANS-200AIstituto HANSHANS-200
Segnale Inper (software)InperN/A
Inper Studio(Venere)InperB1502
Palloncino in latticeApparato di HarwardBS4 73-2787
Sistema di registrazione multicanale in fibra ottica (Vista Pro)InperR5268
Modello Neurolog digitimer DigitimerNL900D
Ghiera in fibra ottica InperV8475
Spike 2 (software)CED (Inghilterra)N/A
Strumenti stereotassici (con calcolatore di coordinate)David Kopf StrumentiKOPF 942
TribromoetanoloSigmaT48402
tribromoetanoloSigma T48402

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, S., et al. Perspective of calcium imaging technology applied to acupuncture research. Chin J Integr Med. 30 (1), 3-9 (2024).
  2. Xu, X., et al. Mechanism of electro-acupuncture in alleviating intestinal injury in septic mice via polyamine-related M2-macrophage polarization. Front Immunol. 15, e1373876(2024).
  3. Yaklai, K., Pattanakuhar, S., Chattipakorn, N., Chattipakorn, S. C. The role of acupuncture on the gut-brain-microbiota axis in irritable bowel syndrome. Am J Chin Med. 49 (2), 285-314 (2021).
  4. Wang, X. Y., Wang, H., Guan, Y. Y., Cai, R. L., Shen, G. M. Acupuncture for functional gastrointestinal disorders: a systematic review and meta-analysis. J Gastroenterol Hepatol. 36 (11), 3015-3026 (2021).
  5. China Association of Acupuncture and Moxibustion. Nomenclature and location of acupuncture points for laboratory animals Part 3: Mouse. World J Acupunct Moxibustion. 35 (2), 160-166 (2025).
  6. Chen, J., et al. A vagal-NTS neural pathway that stimulates feeding. Curr Biol. 30 (20), 3986-3998 (2020).
  7. Campos, C. A., Bowen, A. J., Schwartz, M. W., Palmiter, R. D. Parabrachial CGRP neurons control meal termination. Cell Metab. 23 (5), 811-820 (2016).
  8. Zhang, T., Perkins, M. H., Chang, H., Han, W., de Araujo, I. E. An inter-organ neural circuit for appetite suppression. Cell. 185 (14), 2478-2494 (2022).
  9. Zhang, F. C., et al. A vagus nerve dominant tetra-synaptic ascending pathway for gastric pain processing. Nat Commun. 15 (1), 9824(2024).
  10. Dong, W. Y., et al. Brain regulation of gastric dysfunction induced by stress. Nat Metab. 5 (9), 1494-1505 (2023).
  11. Iwa, M., Tateiwa, M., Sakita, M., Fujimiya, M., Takahashi, T. Anatomical evidence of regional specific effects of acupuncture on gastric motor function in rats. Auton Neurosci. 137 (1-2), 67-76 (2007).
  12. Browning, K. N., Travagli, R. A. Central nervous system control of gastrointestinal motility and secretion and modulation of gastrointestinal functions. Compr Physiol. 4 (4), 1339-1368 (2011).
  13. Sun, L., et al. Parabrachial nucleus circuit governs neuropathic pain-like behavior. Nat Commun. 11 (1), 21(2020).
  14. Simpson, E., et al. Lights, fiber, action! A primer on in vivo fiber photometry. Neuron. 112 (5), 718-739 (2024).
  15. Tao, J., et al. Highly selective brain-to-gut communication via genetically defined vagus neurons. Neuron. 109 (13), 2106-2115 (2021).
  16. Yao, L., Ye, Q., Liu, Y., et al. Electroacupuncture improves swallowing function in a post-stroke dysphagia mouse model by activating the motor cortex inputs to the nucleus tractus solitarii through the parabrachial nuclei. Nat Commun. 14 (1), 810(2023).
  17. Lyu, Q., Xue, W., Liu, R., et al. A brain-to-gut signal controls intestinal fat absorption. Nature. 634 (8035), 936-943 (2024).
  18. Ma, Q. Somatotopic organization of autonomic reflexes by acupuncture. Curr Opin Neurobiol. 76, e102602(2022).
  19. Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
  20. Liu, S., et al. Somatotopic organization and intensity dependence in driving distinct NPY-expressing sympathetic pathways by electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
  21. Luo, L. Architectures of neuronal circuits. Science. 373 (6559), eabg7285(2021).
  22. Yuan, Z., et al. A corticoamygdalar pathway controls reward devaluation and depression using dynamic inhibition code. Neuron. 111 (23), 3837-3853 (2023).
  23. Feng, J., et al. Monitoring norepinephrine release in vivo using next-generation GRABNE sensors. Neuron. 112 (12), 1930-1942 (2024).
  24. Smith, J., et al. Regulation of stress-induced sleep fragmentation by preoptic glutamatergic neurons. Curr Biol. 34 (1), 12-23 (2024).
  25. Li, Y., Liu, Z., Guo, Q., Luo, M. Long-term fiber photometry for neuroscience studies. Neurosci Bull. 35 (3), 425-433 (2019).

Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.

Ristampe e permessi

Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE

Richiedi permesso

Tag

Stimolazione optogeneticaregistrazione del segnale del calcioregolazione dei circuiti neuralimotilit gastricafunzione visceraleindicatori geneticamente codificatiregistrazione in tempo realecorrelazione cervello comportamento

Articoli correlati