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Articolo metodologico

Ecografia Doppler per l'imaging dal vivo e la quantificazione della funzione vascolare ovarica nei topi

728 visualizzazioni

DOI:

10.3791/69169

14 novembre 2025

In questo articolo

Sommario

I cambiamenti nel flusso sanguigno ovarico durante il periodo preovulatorio sono essenziali per l'ovulazione. L'ecografia Doppler è stata utilizzata nell'uomo e negli animali di grossa taglia per valutare l'emodinamica e la perfusione ovarica. Viene presentato un protocollo per l'applicazione dell'ecografia Doppler per valutare l'emodinamica ovarica durante le fasi preovulatorie e periovulatorie nei topi.

Abstract

Per valutare efficacemente la funzione vascolare ovarica e comprenderne il ruolo nella fisiologia e nella patologia ovarica, gli approcci non invasivi in vivo sono essenziali per catturare i cambiamenti in tempo reale senza interrompere il normale flusso sanguigno. L'ecografia Doppler è uno strumento consolidato e non invasivo per valutare il flusso sanguigno ovarico nelle specie più grandi, ma la sua applicazione è stata limitata nei topi, che sono uno dei modelli animali più utilizzati per la ricerca in biologia ovarica, come l'ovulazione. L'ovulazione è un processo strettamente regolato che dipende dalla maturazione follicolare coordinata stimolata dall'ormone follicolo-stimolante, seguita da un picco preovulatorio dell'ormone luteinizzante (LH) che porta alla rottura della parete del follicolo e al rilascio di ovociti per la fecondazione. Il picco di LH innesca anche una serie di cambiamenti strutturali e funzionali nel sistema vascolare ovarico (rimodellamento vascolare), come l'angiogenesi e la costrizione dei capillari nel sito di rottura follicolare poco prima dell'ovulazione. Inoltre, un rapido aumento del flusso sanguigno ovarico a seguito del picco di LH è stato riportato in più specie, ma non nei topi. Questo protocollo utilizza l'ecografia Doppler per visualizzare la vascolarizzazione ovarica murina e quantificare i parametri emodinamici. Il protocollo qui presentato riporta metodi dettagliati per il priming ormonale, l'anestesia, il posizionamento del topo, l'identificazione dell'ovaio e della sua vascolarizzazione utilizzando la potenza e il color Doppler e la misurazione della velocità del flusso sanguigno e dei parametri di resistenza. Questo metodo consente la valutazione longitudinale in tempo reale della funzione vascolare ovarica in topi vivi, fornendo un potente strumento per studiare la funzione vascolare ovarica sia in contesti fisiologici che patologici.

Introduzione

L'ovaio è un organo altamente vascolarizzato e i cambiamenti ciclici, strutturali e funzionali strettamente regolati nella sua vascolarizzazione (rimodellamento vascolare) sono essenziali per la normale fisiologia ovarica, compreso lo sviluppo dei follicoli, l'ovulazione e la formazione del corpo luteo 1,2,3,4. Il rimodellamento vascolare comprende una serie di processi coordinati come i cambiamenti nella permeabilità vascolare, l'angiogenesi, la vasodilatazione, la vasocostrizione e i cambiamenti nel flusso....

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Protocollo

Tutti i topi utilizzati sono stati mantenuti in stretta conformità con la Guida del National Institute of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio, con l'approvazione etica del Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali della Cornell University. Tutti gli animali utilizzati in questo protocollo erano topi C57BL6 immaturi (21-23 giorni).

1. Stimolazione ormonale per la superovulazione

  1. Iniettare topi di 21-23 giorni del peso di 10-12 g per via intraperitoneale con 5 UI di gonadotropina sierica (PMSG) di cavalla gravida seguite da 5 UI di gonadotropina ....

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Risultati

L'obiettivo di questo protocollo è applicare l'ecografia Doppler per visualizzare l'ovaio murino e la sua vascolarizzazione, valutare i cambiamenti nella perfusione ovarica e quantificare l'emodinamica ovarica.

La Figura 2 mostra immagini rappresentative della stessa ovaia in più punti temporali durante il periodo periovulatorio (12 ore prima e 12 ore dopo l'ovulazione) dopo l'iniezione di hCG. La Figura 2A

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Discussione

Questo studio introduce un metodo non invasivo per la visualizzazione e la quantificazione dell'emodinamica ovarica in vivo mediante ecografia Doppler. A differenza dei metodi esistenti, questo approccio consente la valutazione in tempo reale del flusso sanguigno senza interrompere la funzione vascolare. L'ecografia Doppler è uno strumento ampiamente utilizzato ed efficace per valutare la morfologia ovarica e la funzione vascolare nell'uomo e nei modelli animali di grandi dimens.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato supportato da NICHD 1R01HD109392. I dati di imaging sono stati acquisiti attraverso la Cornell Biotechnology Resource Center (BRC) Imaging Facility, con NIH S10OD016191 per l'ecografia VisualSonics Vevo-2100.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Nastro chirurgico 3MVWR International LLCMMM1534-3
Gel di trasmissione a ultrasuoni Aquasonic Clear  ParkerPKR-03-08
TagliacapelliSkull Shaver LLCBBT 2020
Gonadotropina Corionica UmanaSigma Aldrich9002-61-3
Nair Body Cream DepilatoreNairDepilazione
Optixcare Eye Lube Plus AventixOPX-4252
Crema per elettrodi Parker SignacremeParkerPKR-17-05-CS
Siero per fattrice gravida gonadotropinaEnzimi creativiNATE-0969
Sistema di imaging VisualSonics Vevo 2100VisualSonics Inc.

Riferimenti

  1. Duffy, D. M., Ko, C., Jo, M., Brannstrom, M., Curry, T. E. Jr Ovulation: Parallels with inflammatory processes. Endocr Rev. 40 (2), 369-416 (2018).
  2. Feng, Y., et al. Clarity reveals dynamics of ovarian follicular architecture and vasculature in three-dimensions. ....

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Ristampe e permessi

Tag

Flusso sanguigno ovaricoVascolarizzazione ovaricaPower DopplerColor DopplerVelocità del flusso sanguignoEmodinamica preovulatoriaOvaio di topo