Method Article

Un protocollo per la costruzione di un modello murino di fibrosi miocardica ipertensiva utilizzando l'angiotensina II

DOI:

10.3791/69409

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November 14th, 2025

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1The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, Southwest Medical University, 2Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital, 3Guangdong-Macao In-Depth Cooperation Zone in Hengqin, Chinese Medicine Guangdong Laboratory (Hengqin Laboratory), 4State Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Syndrome, Guangdong Provincial Hospital of Chinese Medicine, Guangdong Provincial Academy of Chinese Medical Sciences, The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine, 5School of Pharmacy, Southwest Medical University

In This Article

Summary

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L'infusione continua di angiotensina II (Ang II) tramite pompe osmotiche è uno dei metodi classici per la costruzione di modelli animali di fibrosi miocardica ipertensiva. Questo protocollo ha ottimizzato sistematicamente il processo di costruzione di questo modello e ha elaborato i punti chiave dell'impianto, del posizionamento e dell'impostazione della concentrazione di Ang II della pompa osmotica.

Abstract

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L'infusione continua di angiotensina II (Ang II) tramite pompe osmotiche è un approccio ampiamente utilizzato per stabilire modelli animali di fibrosi miocardica ipertensiva. Tuttavia, questa tecnica presenta alcune limitazioni nei rapporti attuali, come l'instabilità di Ang II, il posizionamento impreciso della pompa e la mancanza di una procedura standardizzata. Le attuali relazioni sulla metodologia di istituzione rimangono relativamente limitate. Questo protocollo ha sistematicamente ottimizzato la creazione di modelli di fibrosi miocardica ipertesa indotta da pompa osmotica Ang II nei topi, compresa la preparazione standardizzata della soluzione di Ang II, la calibrazione del dosaggio, l'impianto sottocutaneo preciso di pompe osmotiche e gli standard quantitativi per gli indicatori di valutazione del modello. I risultati sperimentali hanno dimostrato che la fibrosi miocardica ipertensiva indotta dalla pompa osmotica Ang II nei topi con alti tassi di sopravvivenza. I livelli di pressione arteriosa sistolica (SBP) si sono stabilizzati a 160 mmHg dopo sette giorni dall'impianto sottocutaneo. I topi modello avevano una riduzione significativa delle frazioni di eiezione ventricolare sinistra e un aumento delle dimensioni telediastoliche del ventricolo sinistro. Rispetto al gruppo di chirurgia fittizia, la deposizione di collagene all'interno del tessuto interstiziale miocardico ipertensivo e delle regioni perivascolari è aumentata. Questo studio, basato su un campione di piccole dimensioni (n = 6), ha convalidato preliminarmente la fattibilità di stabilire un modello murino di fibrosi miocardica ipertensiva utilizzando Ang II combinato con una pompa osmotica e ha stabilito un sistema di verifica quantitativa del fenotipo.

Introduction

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La fibrosi miocardica (MF), uno dei principali sintomi patologici dell'ipertensione, è caratterizzata da un'eccessiva deposizione di fibre di collagene all'interno del miocardio danneggiato o compresso. Rappresenta una delle forme più importanti di danno d'organo bersaglio mediato dall'ipertensione e contribuisce alla progressiva disfunzione cardiaca 1,2. La creazione di modelli animali appropriati è essenziale per far progredire la ricerca meccanicistica e sviluppare nuove strategie terapeutiche per la fibrosi miocardica ipertensiva. L'angiotensina II (Ang II), un effettore c....

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Protocol

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Tutte le procedure sperimentali sono state eseguite secondo le linee guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio del National Institutes of Health e i protocolli sperimentali sono stati approvati dal Comitato per la ricerca sugli animali della Southwest Medical University (numero di approvazione SWMU2020317).

1. Preparazione della soluzione di Ang II e riempimento della pompa osmotica

  1. Selezionare 12 topi maschi C57BL/6J di grado SPF (vedi Tabella dei materiali) di peso compreso tra 20 ± 1 g selezionando animali di 8 settimane per la loro uniformità di....

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Results

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Dodici topi sono stati impiantati per via sottocutanea con pompe osmotiche e sono sopravvissuti. Tutti i gruppi modello hanno sviluppato ipertensione (n = 6). Sette giorni dopo l'impianto, la PAS media nel gruppo modello ha superato i 160 mmHg (Figura 1A). Nei giorni 14, 21 e 28, l'SBP nel gruppo modello è rimasto costantemente al di sopra di 160 mmHg. Al contrario, il gruppo di chirurgia fittizia ha mantenuto livelli normali di SBP (circa 90-110 mmHg) per t.......

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Discussion

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Questo protocollo ha ottimizzato i passaggi chiave coinvolti nell'infusione continua di Ang II per indurre la fibrosi miocardica ipertensiva utilizzando una pompa osmotica e ha dettagliato gli aspetti critici, come il posizionamento dell'impianto della pompa osmotica e l'impostazione della concentrazione di Ang II. La pompa modello 2004 è stata scelta per la sua durata di 4 settimane e la dose di Ang II è stata calcolata in base alla velocità di infusione nominale, tenendo conto della mi.......

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Disclosures

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Tutti gli autori dichiarano che questo manoscritto non presenta conflitti di interesse.

Acknowledgements

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Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82074378), dal Progetto del Dipartimento di Scienza e Tecnologia della Provincia del Sichuan (2022YFS0618), dal Progetto dell'Ufficio di Scienza e Tecnologia e dal lavoro di talento di Luzhou (2023JYJ029), dal Progetto di Laboratorio Provinciale del Guangdong di Medicina Tradizionale Cinese 2024 (HQCML-C-2024005), dal Programma di Scienza e Tecnologia di Shenzhen (JCYJ20230807094603007, JCYJ20240813152440051), dal Fondo di Ricerca Medica di Shenzhen (A2403028), Progetto dell'Associazione Medica del Sichuan (Q2025014) e Progetto della Southwest Medical....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ang IISigma-Aldrich CorporationSigma, A9525
Macchina per anestesia animaleShenzhen Reward Life Science Co., LtdR530
Ventilatore per animaliShenzhen Reward Life Science Co., LtdR415
GraphPad Prism GraphPad Software Inc.Versione 9.0
Monitor intelligente non invasivo della pressione sanguignaNippon Soft Dragon Co., LtdSoftron, BP-98A
Microscopio otticoYijingtong Optical Technology (Shanghai) Co., LtdOLYMPUS, SZ61TR
Soluzione e kit per la tintura tricolore MassonBeijing Soleibao Technology Co., LtdSolarbio, G1340
TopiChengdu Dossy Exprimental Animals CO., LtdC57BL/6J
Pompe osmoticheALZA CorporationAlzet, Modello 2004
Sistemi di imaging a ultrasuoniFUJIFILM VisualSonics Corporation, CanadaFUJIFILM, Vevo 3100

References

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  1. Zhao, D., Liu, J., Wang, M., Zhang, X., Zhou, M. Epidemiology of cardiovascular disease in China: current features and implications. Nat Rev Cardiol. 16 (4), 203-212 (2019).
  2. Czubryt, M. P., Hale, T. M. Cardiac fibrosis: pathobiology and therapeutic targets. Cell Sign....

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