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I dispositivi microfluidici sono diventati essenziali per il controllo delle concentrazioni e degli ambienti chimici in saghi cellulari, studi di stress osmotico e esperimenti di amministrazione dei farmaci nella ricerca biomedica, nella criobiologia e in altre applicazionidiagnostiche 1,2. Questi dispositivi permettono il controllo preciso del flusso e della concentrazione del fluido su scala micrometrica. Ad esempio, dispositivi microfluidici sono stati utilizzati per l'aggiunta e la rimozione di agenti crioprotettivi durante la crioconservazione delle cellule per prevenire danniosmotici 3. Analogamente, questi dispositivi microfluidici sono utilizzati anche per stabilire diluizioni seriali di antibiotici al fine di testare la suscettibilità agli antimicrobici contro organismiresistenti 4. Questo permette di identificare le combinazioni ottimali di farmaci per il trattamento delle infezioni antimicrobiche resistenti (AMR). Inoltre, consente l'imaging e il monitoraggio delle cellule vive, riduce il consumo di reagenti e facilita la precisione nei gradienti di concentrazione, a differenza delle tecniche macroscopiche, come la camera di Boyden, che forniscono gradienti più grossolani e statici senza monitoraggio cellulare intempo reale 1,5. Queste capacità consentono di imitare ambienti chimici simili a quelli in vivo in vitro per studi ad alta risoluzione su comportamento cellulare, migrazione cellulare, saggio di invasione cellulare, risposta farmacologica e test di tossicità.
Nonostante i vantaggi dei dispositivi microfluidici, le tecniche tradizionali di microfabbricazione per questi dispositivi (ad esempio, fotolitografia e stampaggio di polidimetilsossiano (PDMS)) sono spesso dispendiose in termini di tempo, costose e richiedono attrezzature e competenzespecializzate 6. Pertanto, creare un nuovo dispositivo tramite litografia morbida può richiedere giorni di lavoro, e anche i cambiamenti di progettazione iterativa richiedonomolto lavoro 6. Recentemente, la stampa 3D è diventata un'alternativa rapida alla prototipazione per superare queste limitazioni. Tuttavia, l'adozione precoce della microfluidica stampata in 3D fu limitata dal costo delle stampanti ad alta risoluzione (spesso ≥ 10.000 dollari), e le unità economiche non forniscono una risoluzionesufficiente 7. Il miglioramento della stereolitografia a basso costo basata su LCD ha significativamente fatto avanzare questo campo, poiché le stampanti di livello consumer (spesso ~150-$500) ora offrono una risoluzione in scala microscopica (~20-50 μm), sufficiente per molte applicazionimicrofluidiche 5. Considerando questi progressi, l'obiettivo generale del nostro lavoro era stabilire un flusso di lavoro economico ed efficiente per dispositivi microfluidici completamente stampati in 3D in grado di generare gradienti di concentrazione controllati senza le tipiche barriere della complessitàdi fabbricazione 8. Il nostro obiettivo era sviluppare un metodo rapido e affidabile per produrre sistemi di modelli microfluidici personalizzati sfruttando una stampante LCD 3D di livello consumer e una resina biocompatibile, rendendoli accessibili a un'ampia gamma di laboratori.
Qui presentiamo un dispositivo microfluidico stampato in 3D in grado di miscelare soluzioni, generare gradienti di concentrazione continui e programmabili, e formare combinazioni di soluzioni e gradienti di concentrazione programmabili. Il dispositivo è realizzato tramite stereolitografia desktop e assemblato completamente, utilizzando un design a canale aperto completamente sigillato con un'ostruzione del canale indotta dalla resina da film adesivo trasparente, è una sfida ampiamente segnalata nella stereolitografiamicrofluidica 9,10; Tuttavia, questo approccio sviluppa un dispositivo microfluidico robusto e impermeabile senza richiedere attrezzature specializzate di trattamento superficiale o di incollaggio e supera il problema comune della resina non polimerizzata che ostruisce i piccoli canali durante lastampa 11. Inoltre, utilizzando resine economiche e polimerizzabili ai raggi UV, ogni dispositivo può essere rapidamente prodotto con pochi dollari di materiali. Un altro vantaggio è che il suo design non è fisso; può essere facilmente modificato e ristampato, a differenza dei dispositivi commerciali che costano centinaia di dollari ciascuno e non possono esserepersonalizzati 12, 13, 14.
Per controllare la concentrazione della soluzione, il dispositivo stampato in 3D era integrato con doppie pompe di siringa (una per ciascuna soluzione in ingresso) controllate da uno script Python open-source, come descritto in precedenza per applicazionimicrofluidiche 15. Questo permette la regolazione precisa delle portate, dei gradi di gradiente e della temporizzazione in modo automatizzato. 15 Le portate nel nostro sistema variano tipicamente da pochi microlitri a 30 μl/min per ingresso, all'interno delle quali è stato ottenuto un mescolamento uniforme mantenendo una tensione di taglio minima. Utilizzando questo sistema, abbiamo generato profili di concentrazione lineari che spaziavano da condizioni approssimativamente iso-osmotiche (~300 mOsm/kg) a condizioni iperosmotiche estreme (~9.000 mOsm/kg) e di nuovo a isotoni, su intervalli di tempo definiti. Letture continue dell'osmometro confermarono che i gradienti generati erano lineari e accurati, e un semplice saggio colorimetrico verificò la miscelazione efficiente delle soluzioni in ingresso. Questi risultati confermano che gradienti di concentrazione complessi e variabili nel tempo possono essere realizzati in modo riproducibile con la nostra piattaforma completamente stampata in 3D, evidenziandone il potenziale di migliorare la capacità e la standardizzazione degli studi di esposizione osmotica a una frazione del costo abituale.
Questa piattaforma microfluidica stampata in 3D dimostra i recenti progressi verso soluzioni "lab-on-a-chip" che forniscono una risoluzione sufficiente per molte applicazioni microfluidiche basate su celle 16,17. Inoltre, gli esperti prevedono che la produzione additiva dovrebbe diventare un metodo leader per la fabbricazione di microdispositivi man mano che persisteranno i progressi nella tecnologia e nei materialidelle stampanti 6. Un vantaggio chiave del nostro approccio è che l'accessibilità non avviene a scapito delle prestazioni. In linea con studi precedenti che hanno dimostrato strategie di fabbricazione microfluidica a bassocosto 18,19, queste stampanti accessibili producono caratteristiche di dispositivo paragonabili a molte soluzioni industriali commerciali in termini di affidabilità eprecisione 7. I ricercatori possono quindi adottare questo metodo con la certezza che soddisferà i requisiti di precisione della maggior parte delle applicazioni. Questa piattaforma può essere adattata a una varietà di esigenze, dall'automatizzazione dell'aggiunta/rimozione di crioprotettivi a più fasi, allo screening delle risposte farmacologiche a vari intervalli di concentrazione e alla fornitura di modulazione chimica precisa nei modelli organ-on-chip16. In particolare, le dimensioni della risoluzione stampata (circa 100 μm di dimensioni del canale) sono sufficienti per molti saghibiologici 16, fornendo un buon intervallo per scale tipiche di lunghezza di celle o particelle. In sintesi, riducendo significativamente i tempi di fabbricazione, i costi e i requisiti di competenza, questa piattaforma microfluidica completamente stampata in 3D consente agli investigatori di prototipare e implementare soluzioni microfluidiche personalizzate in modo efficiente. Sebbene siano ancora necessari passaggi manuali di post-lavorazione come la lucidatura superficiale e la sigillatura con nastro adesivo, il flusso di lavoro complessivo rimane accessibile e fa risparmiare tempo rispetto ai metodi convenzionali di microfabbricazione.