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Articolo metodologico

Sviluppo e standardizzazione di un micrometodo ex vivo per la quantificazione intracellulare della vincristina nelle cellule primarie ALL tramite LC-MS/MS

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DOI:

10.3791/69535

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23 gennaio 2026

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1Leukemia Biology Laboratory, Boldrini Children's Center, 2Mass Spectrometry Laboratory, Boldrini Children's Center, 3Boldrini Children's Center

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo mirava a stabilire e ottimizzare un metodo LC-MS/MS per la quantificazione relativa dell'accumulo di vincristina nelle cellule ALL pediatriche primarie.

Abstract

Quantificare la vincristina intracellulare (VCR) nelle cellule primari della leucemia linfoblastica acuta pediatrica (ALL) è essenziale per comprendere le differenze specifiche per campione nell'assorbimento dei farmaci e per supportare studi sperimentali utilizzando materiale scarso per i pazienti. Qui presentiamo un micrometodo LC-MS/MS ottimizzato specificamente per cellule primarie ALL ottenute tramite xenoinnesti derivati dal paziente (PDX), affrontando sfide chiave come la disponibilità cellulare limitata, dimensioni cellulari piccole e la necessità di recupero riproducibile dopo molteplici fasi di lavaggio. Saggi temporali che vanno da 1 a 5 ore hanno dimostrato che un periodo di incubazione di 3 ore produce i livelli più alti e costanti di videoregistratori intracellulari, con una minore variabilità tra le repliche. L'ottimizzazione del metodo ha inoltre stabilito che l'uso di 2,5 × 106 celle per condizione migliora la robustezza analitica rispetto a celle 1 × 106, che hanno mostrato una maggiore dispersione in esperimenti ripetuti. Ulteriori miglioramenti critici includevano l'uso di metanolo freddo per migliorare l'efficienza della precipitazione delle proteine e l'incorporazione di uno standard interno per monitorare e minimizzare le variazioni procedurali. Il metodo consente una quantificazione sensibile e precisa del videoregistratore intracellulare attraverso intervalli di concentrazione rilevanti, anche se la dose più bassa testata (0,01 μM) non è stata quantificabile dopo l'incubazione di 3 ore. Nel complesso, questo micrometodo offre un approccio pratico, riproducibile e scalabile per misurare VCR intracellulari in campioni primari ALL. Il suo design supporta analisi comparative, validazione di modelli ex vivo e future applicazioni metodologiche volte a integrare la quantificazione intracellulare dei farmaci in valutazioni farmacologiche più ampie.

Introduzione

La leucemia linfoblastica acuta (ALL) rappresenta circa il 25% di tutti i tumori infantili e rimane la malignità pediatricapiù comune 1,2. Sebbene i progressi nella terapia abbiano notevolmente migliorato i tassi di sopravvivenza, ora superando il 90%, la complessità biologica dell'ALL continua a guidare gli sforzi per sviluppare strumenti che caratterizzino meglio la malattia a livellocellulare 3.

Gli alcaloidi di Vinca, in particolare i videoregistratori, sono componenti chiave di TUTTI i protocolli ditrattamento 4. Poiché il VCR esercita i suoi effetti citotossici intracellulari, comprendere la sua captazione e accumulo nelle cellule leucemiche è fondamentale per studi che coinvolgono la risposta ai farmaci, la farmacodinamica e il comportamento cellulare nei sistemi ex vivo. Tuttavia, la maggior parte degli approcci disponibili per valutare i livelli intracellulari di farmaci si basa su misurazioni indirette o metodi semi-quantitativi, limitando la riproducibilità e la sensibilità 5,6,7.

Parallelamente, molte ricerche dipendono ancora fortemente dalle linee cellulari leucemiche, che mancano dell'eterogeneità biologica e della rilevanza clinica delle cellule primarie derivate dal paziente. I campioni primari spesso presentano sfide come numeri cellulari limitati, qualità variabile del campione e la necessità di tecniche analitiche altamente sensibili in grado di rilevare composti intracellulari a bassaabbondanza 8.

La cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) fornisce la specificità e la sensibilità necessarie per la quantificazione precisa degli agenti chemioterapici, tuttavia i protocolli standardizzati per misurare direttamente i videoregistratori intracellulari nelle cellule leucemiche primarie restano scarsi. Stabilire micrometodi robusti compatibili con materiale limitato del paziente può facilitare un'ampia gamma di applicazioni, tra cui profilazione farmacologica, valutazione delle interazioni farmaco-cellula e studi comparativi tra sottotipi di malattie o condizioni terapeutiche.

Qui, in questo protocollo, descriviamo lo sviluppo e l'ottimizzazione di un micrometodo per la quantificazione ex vivo del VCR intracellulare nelle cellule leucemiche primarie utilizzando LC-MS/MS. Per ottenere materiale sufficiente per lo sviluppo del metodo, campioni di pazienti sono stati trapiantati in topi immunodeficienti NSG per generare i modelliPDX 9. Dopo l'espansione in vivo , le cellule leucemiche umane sono state isolate ecriopreservate 10. Successivamente, sono stati scongelati, incubati con VCR, lavati, lisati e analizzati con LC-MS/MS per determinare i livelli intracellulari di farmaci.

Questo metodo offre diversi vantaggi: richiede un numero ridotto di cellule (2,5 milioni), è sensibile e rapido, ed è compatibile con campioni primari clinicamente rilevanti. Poiché misura direttamente il contenuto intracellulare di farmaci, fornisce uno strumento quantitativo affidabile per i ricercatori che studiano l'assorbimento dei farmaci, le risposte cellulari alla chemioterapia o altre questioni farmacologiche nelle neoplasie ematologiche.

Nel complesso, questo protocollo amplia il kit di strumenti analitici disponibili per lo studio della ALL pediatrica e può essere facilmente adattato ad altri farmaci o tipi di campioni, supportando future indagini sulla biologia della leucemia, il comportamento dei farmaci e la farmacologia di precisione.

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Protocollo

I campioni di leucemia utilizzati in questo studio sono stati prelevati da fiale bio-bancarizzate di pazienti trattati al Centro Infantil Boldrini, che hanno permesso l'uso delle loro cellule tramite un modulo di consenso informato. Il progetto è stato approvato dal Comitato Etico Istituzionale (CAAE 34601120.7.0000.5376). I protocolli per la generazione di PDX negli animali sono stati eseguiti in conformità con i regolamenti e le linee guida etiche del Comitato Etico Animale (Comissão de Ética no Uso de Animais) del Centro Infantil Boldrini (CEUA/Boldrini 0011-2020).

1. Preparazione del campione e incubazione del farmaco (Giorno 1)

  1. Preparazione del materiale e soluzioni operative
    1. Pesa 2,5 mg di Vincristina solfato (peso molecolare: 923 g/mol) e scioglilo in 2,0 mL di dimetilsolfosidro (DMSO) in un microtubo da 2,0 mL per preparare una soluzione di stocco da 1,354 mM. Vortice fino a disciolto completamente.
      ATTENZIONE: Il DMSO è un irritante; Indossa i guanti e maneggialo in una cappa chimica.
    2. Preparare la soluzione di lavoro da 100 μM mescolando 147,71 μL della soluzione di VCR con 1.852,28 μL di DMSO in un microtubo da 2,0 mL. Vortice a fondo.
    3. Distribuire 500 μL della soluzione di lavoro in quattro microtubi da 0,6 mL e conservare a -20 °C per diversi mesi. Evita di scongelare le aliquote più di tre volte.
    4. Preparare una soluzione operativa di vinblastina (VINB) da 100 μM mescolando 181,81 μL di una soluzione stock da 1,1 mM (Vinblastina solfato 1 mg/mL, peso molecolare: 909,07 g/mol) con 1.818,19 μL di acqua ultrapura sterile in un microtubo da 2,0 mL. Vortice fino a diventare omogeneo.
    5. Ho fatto funzionare la soluzione VINB allo stesso modo di fatto per il videoregistratore.
    6. Prepara la soluzione di metanolo + 0,1 μM di VINB mescolando 49,95 mL di metanolo con 50 μL della soluzione di lavoro VINB in un tubo da 50 mL. Vortice fino a diventare omogeneo. Conservalo a -20 °C fino a 3 mesi.
      ATTENZIONE: Il metanolo è tossico e infiammabile; maneggiare con DPI appropriati in una cappa assorbente.
    7. Preparare una soluzione di acido formico + acqua + 0,1% mescolando 49,95 mL di acqua ultrapura con 50 μL di acido formico in un tubo da 50 mL. Vortice well. Conserva a temperatura ambiente (RT).
      ATTENZIONE: L'acido formico è corrosivo; maneggiare con guanti e protezione per gli occhi.
  2. Scongelamento e lavaggio delle cellule primarie
    1. Lo scongelamento dei campioni di cellule criopriservate facendo ruotare delicatamente la fiala in un becher contenente 15 mL di acqua distillata a 37 °C fino allo scongelamento completo.
      NOTA: Informazioni riguardanti i protocolli di raccolta e congelamento delle cellule si trovano nelle pubblicazioniprecedenti 9,10.
    2. Trasferire il contenuto della fiala in un tubo conico da 50 mL contenente 10-15 mL di PBS sterile 1x con una pipetta Pasteur sterile e usa e getta. Centrifuga a 300 × g per 5 minuti a RT.
    3. Scartare il soprantantante invertendo il tubo.
    4. Sospendere il pellet in 10 mL di mezzo AIM V con una pipetta Pasteur usa e getta. Contare le cellule vitali e misurare la dimensione media delle celle utilizzando un contatore automatico.
      NOTA: Si raccomanda di utilizzare cellule che presentino almeno l'80% di vitalità rispetto al numero totale di cellule raccolte.
    5. Calcola il volume necessario per raccogliere 2,5 × 106 celle vitali usando una proporzione semplice basata sulla concentrazione misurata. Ad esempio, se la concentrazione è 5 × 106 cellule/mL, il volume richiesto è 0,5 mL.
      NOTA: Esegui ogni trattamento in triplicata per garantire la riproducibilità dei dati. Salvare la dimensione media delle celle fornite nel contatore automatico; Usalo per calcolare il volume delle celle.
  3. Struttura per il trattamento della dipendenza
    1. Calcola il volume di soluzione di lavoro VCR necessario per raggiungere una concentrazione finale di 1 μM in un volume totale di 2,0 mL. Vortice la soluzione originale prima di pipettare.
    2. Aggiungi il mezzo AIM V, poi 2,5 × 106 celle e infine la soluzione VCR a un microtubo da 2,0 mL. Vortice brevemente e gira leggermente (5 s) per raccogliere liquidi dal tappo del tubo.
    3. Incubare i tubi aperti a 37 °C, 5% di CO2 per 3 ore.
    4. Dopo l'incubazione, chiudi i coperchi e centrifughi i campioni a 300 × g per 5 minuti a RT.
    5. Scartare con cura il sovrantantante usando una pipetta, poi aggiungere 1 mL di PBS a RT al tubo.
    6. Ripetere la centrifugazione a 300 × g per 5 minuti a RT, rimozione del surnatante e lavaggio PBS altre due volte, per un totale di tre lavaggi.
    7. Rimuovere con cura tutto il sovrantantante usando una pipetta, risospendere il pellet in 100 μL di PBS e far il vortice finché il pellet non è completamente sospeso.
    8. Aggiungere direttamente al campione 400 μL di metanolo freddo + 0,1 μM di vinblastina (-20 °C), evitando il contatto con le pareti del tubo.
    9. Conserva i campioni durante la notte a -80 °C.
      NOTA: I campioni possono essere conservati a -80 °C per alcune settimane (stop sicuro).

2. Elaborazione campioni per LC-MS/MS (Giorno 2)

  1. Estrazione del campione
    1. Preraffredda la centrifuga a 4 °C prima di rimuovere i campioni dal congelatore a -80 °C.
    2. Subito dopo aver prelevato i campioni dal congelatore, centrifugali a 13.000 × g per 20 minuti a 4 °C.
    3. Trasferire 300 μL di sovrantante a un microtubo da 1,5 mL.
    4. Asciuga completamente i campioni usando un concentratore a vuoto a 40-45 °C per 1 ora e 40 minuti.
      NOTA: I pellet essiccati possono essere conservati a -20 °C per alcune settimane (stop sicuro).
    5. Risospendere ogni pellet in 400 μL d'acqua + acido formico allo 0,1% (precedentemente preparato). Vortice delicatamente finché il pellet non si dissolve completamente.
    6. Centrifugare nuovamente i campioni a 13.000 × g per 20 minuti a 4 °C.
    7. Trasferire 300 μL di sovrantante in una fiala a vite da 2,0 mL per l'analisi LC-MS/MS.

3. Configurazione e acquisizione dati di LC-MS/MS

  1. Preparazione della fase mobile e condizionamento della colonna
    1. Prepara il Solvente A mescolando acqua ultrapura con acido formico allo 0,1%.
    2. Prepara il Solvente B mescolando acetonitrile con acido formico allo 0,1%.
      ATTENZIONE: L'acetonitrile è tossico e infiammabile; maniglia in una cappa chimica.
    3. Sonica ogni solvente in un bagno ultrasonico per 5 minuti. Collega le bottiglie al modulo della pompa e purga il sistema ad alta portata per rimuovere i contaminanti.
    4. Installare una colonna BEH C18 a fase inversa (1,7 μm, 2,1 mm × 50 mm).
      NOTA: Per effettuare l'analisi, questo studio ha utilizzato un sistema cromatografico Acquity H-Class accoppiato a uno spettrometro di massa Xevo TQS-Micro triplo-quadrupolo.
    5. Usa un gradiente binario composto dai Solventi A e B, entrambi preparati in precedenza.
    6. Eseguire il gradiente cromatografico dal 5% al 95% del Solvente B nei primi 2 minuti, seguito da 2 minuti di Solvente A per il lavaggio della colonna e il riequilibrio.
    7. Imposta la portata a 0,2 mL/min durante i 4 minuti di esercizio. Mantieni la temperatura della colonna a 40 °C e inietti 10 μL di ogni campione.
  2. Impostazione del metodo LC-MS/MS
    1. Apri il software LC-MS/MS. Clicca su File > Nuovo > Metodo MS per avviare un nuovo metodo.
    2. Vai nella scheda Funzione e imposta il tipo di funzione su monitoraggio a reazioni multiple (MRM). Inserite le transizioni ioniche e i parametri elencati nella Tabella 1 per VCR e VINB (standard interno).
    3. Imposta il tempo di acquisizione a 4 minuti. Clicca su Applica per salvare.
      NOTA: Non superare i 4 minuti per garantire il riequilibrio tra le iniezioni e le colonne.
    4. Configura i parametri UHPLC sotto Metodo Inlet > Modifica il Metodo LC e salva come file .mth (Tabella 2).
    5. Imposta i parametri sorgente sotto la scheda Accorda secondo la Tabella 3. Salva come file .tun.
    6. Salva il metodo completo: file > salva come ed esporta come file .mth.
  3. Creare una lista di esempi e iniziare la run
    1. Nella schermata principale del software, apri Lista di Campioni e crea una lista con i nomi dei campioni, i volumi di iniezione, le posizioni delle fiale e il metodo da utilizzare.
    2. Metti una fiala con acqua ultrapura nel vassoio dell'autocampionatore e designala come blank. Fai una scansione tra ogni serie di iniezioni triplice per evitare il trasferimento.
      NOTA: Prima di iniziare la corsa, assicurati che la pressione della colonna (ΔP) sia stabile e inferiore a 10 psi.
    3. Seleziona le righe desiderate nella Lista di Esempio e clicca su Esegui > OK per iniziare l'acquisizione dei dati.

4. Analisi dei dati

  1. Visualizzazione ed esportazione dei dati
    1. Dopo il completamento della corsa, visualizza i cromatogrammi selezionando un campione e cliccando su Cromatogramma nella barra del menu in alto.
    2. Nella schermata principale, clicca su TargetLynx, seleziona i file appena eseguiti e clicca su Processa > Seleziona il metodo vincristine > OK, per generare le tabelle di output.
    3. Clicca su Segnala > Tabella Esporta e salva i dati elaborati come file .csv o .xlsx.
      NOTA: Esportare le aree di picco grezze sia per l'analita che per lo standard interno.
  2. Organizzazione dei dati e calcolo del rapporto
    1. Apri il file esportato e crea le seguenti colonne:
      1. Campione: Aggiungi il nome del campione o della fiala.
      2. Run: Indica a quale replica corrisponde il valore.
      3. Area VCR: Inserisci l'area sotto il picco per la vincristina.
      4. Area VINB: Inserisci l'area sotto la cima per la vinblastina.
      5. Rapporto VCR/VINB: Normalizza ogni valore VCR dividendolo per il corrispondente valore VINN.
    2. Aggiungi colonne per i valori di deviazione standard dell'area VCR, area VINB e rapporto VCR/VINB per ogni set triplicata.
      NOTA: La normalizzazione tramite lo standard interno consente la correzione per variazioni nel volume di estrazione o iniezione.
  3. Risultati della tracciazione
    1. Apri il software di grafica preferito e seleziona il formato di Tabella Raggruppata .
    2. Scegli Inserisci o importa dati in una nuova tabella e, sotto Opzioni, seleziona Inserisci 3 valori replicati in sottocolonne affiancate.
    3. Traccia solo i rapporti normalizzati VCR/VINB per ogni campione, escludendo i valori grezzi dell'area.

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Risultati

I risultati cromatografici rappresentativi ottenuti dopo saggi di accumulo intracellulare utilizzando cellule primarie ALL PDX incubate con VCR e VINB sono mostrati nella Figura 1. I campioni sono stati preparati utilizzando 2,5 × 106 celle per ogni condizione. Nelle condizioni cromatografiche descritte, il videoregistratore è stato costantemente mantenuto a 2,85 minuti con un effetto matrice minimo, e la forma di picco è stata simmetrica e ben risolta. Questi profili illustrano i...

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Discussione

Una valutazione accurata dei livelli intracellulari di farmaci nelle cellule leucemiche primarie è essenziale per comprendere la gestione dei farmaci a livello cellulare e per supportare lo sviluppo di saggi funzionali che completino il profiling molecolare. Gli approcci analitici esistenti spesso richiedono un gran numero di cellule, prevedono lunghe fasi di elaborazione o si basano su letture indirette che non riflettono la vera disponibilità intracellulare degli agenti

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non esserci conflitti di interesse.

Ringraziamenti

Ringraziamo il Centro Infantil Boldrini e tutti i pazienti che hanno donato i loro campioni per lo studio. Adrielli C. Soares ha ricevuto una borsa di studio dalla Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) e dalla Fondazione di Ricerca di San Paolo (FAPESP, 2023/18389-3). José A. Yunes ha ricevuto una borsa di studio per la produttività dal National Counsel of Technological and Scientific Development (CNPq, 308399/2021-8). Questo lavoro è stato supportato da finanziamenti per la ricerca del Ministero della Salute brasiliano tramite il programma PRONON (Programa Nacional de Apoio à Atenção Oncológica, NUP 25000.211174/2019-45).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Fiala a vite da 2,0 mLFlusso di alimentazione8-2400Utilizzato con inserti in vetro con molla (5 x 29 mm) della stessa azienda (Cat. 5-29015)
Fiala a vite da 2,0 mLFlusso di alimentazione8-2400Utilizzato con inserti in vetro con molla (5 x 29 mm) della stessa azienda (Cat. 5-29015)
AcetonitrileMerck (Sigma-Aldrich)100030
AcetonitrileMerck (Sigma-Aldrich)24010152
AIM VThermo Fisher Scientific12055091
Sistema cromatografico Acquity UPLC H-ClassWaters Co.https://www.waters.com/nextgen/br/pt/products/chromatography/chromatography-systems/acquity-uplc-h-class-plus-system.html?srsltid=AfmBOoo0mjNgaucBI-Exv97cEmWE96_lVkqKi2IR0IPtA-h1feG-WvtW
Contessa 3 FLThermo Fisher ScientificA49892
DMSOMerck (Sigma-Aldrich)D 8418
Falcon 50 mLSarstedt62.547.254
Acido formicoMerck (Sigma-Aldrich)F0507
Bottiglia di vetroMerck (Sigma-Aldrich)41121800
IncubatorePHCBIMCO-50M-PE
MetanoloMerck (Sigma-Aldrich)34860
Microtubo 1,5 mLEppendorf41121702
Microtubo 2,0 mLEppendorf30120094
PBSMerck (Sigma-Aldrich)PPB006
Speevac miVacFisher Scientific56340
Il software per l'acquisizione datiWaters Co.MassLynx
Triplo spettrometro di massa quadrupolo Xevo TQ-S microWaters Co.https://www.waters.com/nextgen/us/en/products/mass-spectrometry/mass-spectrometry-systems/xevo-tq-s-micro.html?srsltid=AfmBOoqqmLRNfHGqvtnwaL7xYOOEXPV3NJ9qYNH9HAwqXKXrMvLRQXSW
Sonicatore a UltrasuoniQuimisQ335D
Vinblastina 1 mg/mLLibbshttps://www.libbs.com.br/nossos-produtos/antineoplasico-faulblastina/Vinblastina solfato
VincristineCayman Chemicals11764

Riferimenti

  1. Inaba, H., Pui, C. H. Advances in the diagnosis and treatment of pediatric acute lymphoblastic leukemia. J Clin Med. 10 (9), 1926(2021).
  2. Pui, C. H., et al. Childhood acute lymphoblastic leukemia: progress through collaboration. J Clin Oncol. 33 (27), 2938-2948 (2015).
  3. Gaudichon, J., et al. Mechanisms of extramedullary relapse in acute lymphoblastic leukemia: reconciling biological concepts and clinical issues. Blood Rev. 36, 40-56 (2019).
  4. Dhyani, P., et al. Anticancer potential of alkaloids: a key emphasis on colchicine, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine and vincamine. Cancer Cell Int. 22, 206(2022).
  5. Mateus, A., Matsson, P., Artursson, P. Rapid measurement of intracellular unbound drug concentrations. Mol Pharmaceutics. 10 (6), 2467-2478 (2013).
  6. Chien, H. C., et al. Rapid method to determine intracellular drug concentrations in cellular uptake assays: application to metformin in organic cation transporter 1-transfected human embryonic kidney 293 cells. Drug Metab Dispos. 44 (3), 356-364 (2016).
  7. Calcagno, A. M., Ambudkar, S. V. Analysis of expression of drug resistance-linked ABC transporters in cancer cells by quantitative RT-PCR. Methods Mol Biol. 637, 121-132 (2010).
  8. Richter, M., et al. From donor to the lab: a fascinating journey of primary cell lines. Front Cell Dev Biol. 9, 648272(2021).
  9. Borgmann, A., et al. Childhood ALL blasts retain phenotypic and genotypic characteristics upon long-term serial passage in NOD/SCID mice. Pediatr Hematol Oncol. 17 (8), 635-650 (2000).
  10. Rosati, M. M., Corrêa, J. R., de Sousa Mariano, S., Cardoso, A., Andrés Yunes, J. Murine model of leukemia relapse to induction chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia. J Vis Exp. (224), e68797(2025).
  11. Dams, R., Huestis, M. A., Lambert, W. E., Murphy, C. M. Matrix effect in bioanalysis of illicit drugs with LC-MS/MS: influence of ionization type, sample preparation, and biofluid. J Am Soc Mass Spectrom. 14 (11), 1290-1294 (2003).
  12. Yang, Y., Cruickshank, C., Armstrong, M., Mahaffey, S., Reisdorph, R., Reisdorph, N. New sample preparation approach for mass spectrometry-based profiling of plasma results in improved coverage of metabolome. J Chromatogr A. 1300, 217-226 (2013).
  13. Zhang, J., Dasgupta, A., Ayala, R., Bonapace, C., Kassim, S., Faustino, P. J. Internal standard variability: root cause investigation, parallelism for evaluating trackability and practical considerations. Bioanalysis. 16 (15), 771-776 (2024).

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